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BYDV-GPV株系正向串联体结构复制酶基因介导的转基因小麦研究

本文将人工合成的BYDV-GPV株系复制酶基因ORF1和ORF2 cDNA片段正向串联到了植物表达载体pWubi.tm1质粒上,成功地构建了植物表达载体pPPI29,利用花粉管通道法和基因枪法分别转化了普通小麦品种陇鉴127、CA8686、京冬8号和扬麦158,并进行了部分转基因小麦的抗病性鉴定;探讨了植物激素对成熟胚愈伤组织诱导的影响,获得了较高成熟胚愈伤组织的优化培养基配方:并对ORF1和ORF2基因进行了原核表达。研究结果为:根据已经测定的BYDV-GPV部分序列,设计并合成ORF1和ORF2相应的上、下游引物,在引物中分别引入BamHI、KpnI和EcoRI位点,使得ORF1 5′端BamHI、3′端含有KpnI位点,ORF2基因5′端含有KpnI、3′端含有EcoRI位点,以BYDV-GPV株系病毒RNA为模板,RT-PCR分别扩增了GPV株系的ORF1和ORF2基因片段,并将其分别插入到pGEM-T-vector载体  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

《农业生物技术学报》2000年02期
农业生物技术学报

通过花粉管途径将BYDV-GPV株系缺失复制酶基因导入小麦

大麦黄矮病毒(Barleyyellowdwarfvirus,BYDV)是全世界麦类作物上分布最广、危害最严重的病原病毒。在我国,BYDV引起的小麦黄矮病自从60年代发现以来,已数次流行,给我国小麦生产带来严重的经济损失。在国外,按照传毒介体和血清学关系,**ov被分成5个不同的株系:*AV、PAV、SGV、RPV和RMV。我国分离到的GPV株系与国外报道的5个株系在血清学上”‘和病毒外壳蛋白基因序列“’上均无同源性,为我国特有的株系。GPV株系作为我国小麦黄矮病发生的主流株系之一,对于我国小麦黄矮病的发生具有重要影响。小麦黄矮病防治措施包括有利用化学药剂防治蚜虫减少病毒的传毒介体,以及调整小麦播期避开介体蚜虫的迁移期等。但都不能获得理想的防治效果。最经济有效的防治方法是利用抗病品种。在大麦上发现的YdZ基因已经被广泛地应用于大麦的抗病育种之中’‘’,而在小麦上目前尚未发现有效的抗黄矮病基因。抗病毒转基因研究的发展,为利用人工抗性...  (本文共3页) 阅读全文>>

《西北农林科技大学学报(自然科学版)》1970年60期
西北农林科技大学学报(自然科学版)

大麦黄矮病毒(BYDV-GPV)的循回传播机理

大麦黄矮病毒(BYDV-GPV)的循回传播机理@吴云峰@李毅@魏宁生@成卓敏@周广和@杜志强¥西北农业大学植保系¥北京大学生命科学院¥中国农业科学院植保所对植物组织中蚜虫口针分泌的胶状唾液染色观察发现,蚜虫刺探时口针穿行在细胞间隙,仅在吸食时下颚口针进入细胞内。禾谷缢蚜饲毒12h时RT-PCR方法在后肠、血淋巴液和附唾液腺中检测到GPV;而非介体麦长管蚜在GPV毒源上吸食24h时,仅在后肠组织中检测到GPV;当继续取食48h时,在后肠及血淋巴液中也发现了GPV,但仍无能力进入附唾液腺,说明蚜虫后肠和附唾液腺对病毒均有专化选择作用,禾谷缢管蚜传播BYDV-GPV时存在吸食、获毒和传毒三个阶段。大麦黄矮病毒,麦蚜传播,RT-PCR检测大麦黄矮病毒(BYDV-GPV)的循回传播机理吴云峰1李毅2魏宁生1成卓敏3周广和3杜志强3(1西北农业大学植保系,陕西杨凌712100)(2北京大学生命科学院,北京100871)(3中国农业科学院植保...  (本文共4页) 阅读全文>>

河南农业大学
河南农业大学

大麦黄矮病毒GPV株系(BYDV-GPV)ORF4基因的原核表达及抗血清的制备

大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus, BYDV)是一种十分重要的禾谷类作物病毒。尽管有研究推测 BYDV 的 ORF4 与病毒在寄主体内的运动有关,但关于病毒在寄主体内的运转机制尚不了解。本研究首次对我国特有的BYDV-GPV株系的ORF4基因进行原核表达,并制备特异性的抗血清,成功用于 BYDV-GPV 侵染后燕麦体内表达的 17kDa 蛋白的检测,为进一步的研究奠定基础。根据已测定的 BYDV-GPV 的相关序列设计合成含有适宜酶切位点的相应引物,通过 RT-PCR 方法扩增出ORF4 基因片段并将其插入到 pGEM-T Easy 质粒中,获得了重组质粒pGEM-T-O4。对基因片段进行序列分析结果表明,ORF4 全长 456 个核苷酸,可编码 152 个氨基酸,分子量为 17kDa 的蛋白质。pGEM-T-O4 经 Nde I和 BamH I 双酶切后插入到质粒 pET-5a 中获得原核表达载...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

BYDV-GPV与GAV混合侵染蚜传专化性研究

小麦黄矮病是麦类作物的重要病害之一。普通小麦种质资源中未筛选到抗性材料,基因工程育种是培育抗病品种的手段之一。病毒的外壳蛋白(CP)基因介导的抗病性在抗病毒基因工程育种中研究最早、应用最广泛的。我国也已获得抗BYDV-GPV的小麦转CP基因的材料,但抗病毒转CP基因植物带来的病毒外壳蛋白的异源装配及RNA重组等生态安全性问题也越来越受到关注。本研究对大麦黄矮病毒(Barly Yellow Dwarf Vires,BYDV)GAV与GPV之间混合侵染的蚜传特异性与分子变异进行探索,旨在为小麦抗病毒基因工程的生态安全性评价体系建立一种可能的模式。以我国麦区的大麦黄矮病毒流行株系GAV、GPV为材料,利用它们的蚜传特异性,将由禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi L., Rp)传播、麦长管蚜(Sitobion avenae F.,Ma)不能传播的GPV和由麦长管蚜传播、禾谷缢管蚜不能传播的GAV混合侵染到岸黑燕麦上,观察发...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>