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移植静脉平滑肌细胞凋亡及相关基因表达与增殖关系的实验研究

自体静脉移植是治疗冠状动脉狭窄和周围动脉缺血性疾病的有效手段之一。然而移植静脉术后狭窄是影响其远期通畅率的关键问题。目前导致移植静脉狭窄的确切机制尚未清楚。探讨移植血管狭窄的发生机制,为防治狭窄提供线索是提高临床疗效的关键。近期研究表明,血管壁损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)在迁移、增殖引起血管内膜增生(IH)的同时也存在着凋亡,它在由IH引起的血管狭窄中起着重要作用,这一点在动脉粥样硬化及经皮腔内冠状动脉成型术中均已得到证实,但在移植静脉中VSMC是否有类似变化目前国内未见报告。为此本实验动态观察了移植静脉细胞凋亡与增殖的关系、凋亡相关基因在移植静脉VSMC中的表达以及细胞凋亡在IH中的作用,旨在为移植静脉再狭窄的发生机制和防治提供线索。实验方法本实验建立100只Wistar大鼠自体静脉移植模型(右颈静脉移植于肾下腹主动脉),于移植术后1~8周分期切取移植静脉及采血分离血浆,做下列检测。一.应用放射免疫法测定自体静脉移植术后不  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
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骨髓干细胞动员与梗死心肌修复及移植静脉桥预后的实验研究

背景:冠状动脉搭桥(冠脉搭桥)可改善心肌梗死区的血液供应,促进骨髓干细胞动员,但由于外周血中骨髓干细胞数量有限,其在心肌梗死(心梗)区促进组织血运重建及心肌再生的潜能目前还没有受到重视。本实验从三方面研究冠脉搭桥与骨髓干细胞动员相结合治疗缺血性心脏病的可行性。第一部分为临床实验。目的:研究冠脉搭桥术后骨髓干细胞动员规律及影响因素。材料与方法:符合实验要求的36例冠心病患者,采用流式细胞仪检测非体外循环冠脉搭桥术后外周血CD34~+细胞计数变化,间接反应骨髓干细胞动员情况。结果:冠心病患者外周血中存在少量CD34~+细胞,术后24小时达到峰值,48-72小时恢复到术前水平;CD34~+细胞动员与血清心肌酶及血管内皮生长因子呈高度正性相关。第二部分为心梗治疗实验。目的:研究骨髓干细胞动员对梗死心肌修复及心梗后心功能变化的影响。材料与方法:新西兰大白兔24只,随机均分为两组,结扎实验动物前降支制作急性心肌梗死模型,实验组术后24小时开...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

昆明医学院
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VEGF_(165)基因转染预防移植静脉再狭窄

目的:探讨腺病毒介导VEGF_(165)基因转染对自体移植静脉术后再狭窄的预防作用。方法:通过细胞内同源重组构建携带人VEGF_(165)基因重组腺病毒,转染体外培养的人脐静脉内皮细胞,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、酶联免疫吸附试验(ELISA)、噻唑蓝(MTT)比色法检测内皮细胞VEGF_(165)基因表达和细胞生长情况;进而,建立猪颈静脉移植模型,术中采用体外孵育方法将VEGF_(165)基因转染至移植静脉,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、病理组织学检查观察VEGF_(165)基因在移植静脉中的表达情况及其对移植静脉内皮细胞修复和内膜增生的影响。结果:本研究通过脂质体介导细胞内基因重组技术成功构建pDC315-VEGF_(165)腺病毒,在HEK293细胞(转化腺病毒E1基因的人胚肾细胞系)中大量扩增、纯化后得到滴度为1.6×10~(12)pfu/ml(每博士学位论文VEGF165基因转...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

腺病毒载体介导转染CD基因抑制大鼠移植静脉内膜增生及其机制的实验研究

目的内膜增生(IH),是静脉通过手术等途径进入动脉血流系统后,产生的一共性病理变化。临床常见于多种血管成形术后,其特点为平滑肌细胞(VSMC)增殖和细胞外基质大量积聚,造成管腔狭窄甚至闭塞。术后1-2年约20%-40%患者发生移植静脉狭窄,术后10年则有40%-60%患者发生狭窄和闭塞,严重影响了术后远期疗效。多年来,临床医生和科研人员从缩短手术时间、改善手术技术以及药物治疗等多方面入手,寻找解决内膜增生的方案,但均未能取得理想的疗效。随着分子生物学技术的发展,基因治疗成为解决这一问题的希望。它通常应用分子生物学技术,将一些有治疗价值的外源性基因通过一定载体(如腺病毒等)导人体内,通过修复/替代失去正常功能的基因,或抑制某些基因的过度表达,来达到治疗的目。自杀基因是诸多基因治疗种类中的一种,其工作原理是自杀基因可使无毒性的原药代谢为有毒性的产物,抑制细胞DNA的合成,并通过旁观者效应杀死周围的细胞。CD基因是比较常用的一种自杀基...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
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非限制性外支架防治移植静脉再狭窄的实验研究

目的:大隐静脉目前仍然是最常用的冠状动脉旁路移植材料之一,然而新内膜的生成及逐渐增厚导致晚期移植静脉再狭窄甚至闭塞,影响了手术的远期疗效。外支架能抑制移植静脉内膜增生和管壁增厚,是一种很有前景的防治移植静脉再狭窄的方法。本研究的目的在于探讨非限制性外支架防治移植静脉内膜增生和细胞增殖的效果及其可能的作用机制,同时探讨非限制性外支架对血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。材料与方法:新西兰白兔36只随机分成两组,每只均实施颈外静脉-颈总动脉移植术,支架组(S组)在移植静脉外套以直径6mm的非限制性涤纶外支架,对照组(NS组)移植静脉外无外支架,分别于术后1周(1W)、2周(2W)、4周(4W)取材进行观察。术后应用彩色多普勒超声观察移植静脉的通畅情况。组织切片进行HE和弹力VG染色,光镜下观察病理和结构变化。采用计算机图像分析系统测量移植静脉内膜、中膜的厚度和面积,管腔面积,并计算内膜增值率(即内膜面积/内弹力板包围面积)。切...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北医科大学
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血管损伤静脉移植后移植静脉再狭窄的实验研究

血管损伤在临床上极为常见,在动脉损伤的修复中,有1/3的病例需要血管替代物来修复。在众多的修复方法中,对于中小口径的动脉缺损,自体静脉移植仍为当前公认的首选方法。由于动静脉血管壁结构差异较大,移植过程中静脉经历缺血及机械损伤,移植到动脉环境后所遭遇的血液动力学变化等多种因素的作用,将引起移植静脉内皮细胞脱落、炎性细胞沉积、中膜平滑肌细胞增生并迁移至内膜、细胞外基质在内膜沉积,进而引起内膜及中膜增厚,导致血管腔发生狭窄甚至阻塞。据统计,静脉移植术后5年供体血管狭窄的发生率达30%~50%。本课题采用家兔作为实验动物,在自体股静脉-股动脉移植基础上创建了股静脉-股静脉移植的动物模型,与股静脉-股动脉移植对比,消除了混杂因素,分别观测供体静脉对缺血及机械损伤和移植到动脉环境后血液动力学的影响。关于移植损伤对供体静脉影响的机制,本研究用HE染色及维多利亚蓝染色观察血管壁厚度的变化,用增殖性细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色观察血管壁...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>