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猪圆环病毒2型ORF2基因表达及重组蛋白ELISA方法的建立

猪圆环病毒2型(Porcine circovurus type 2,PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。PCV2的ORF2基因不仅是其主要结构蛋白的编码基因,而且也是区分PCV1和PCV2的重要区域,其编码蛋白具有良好的抗原性。本研究利用PCR技术扩增出PCV2BF株ORF2基因,并进行了分子克隆,成功实现了ORF2基因在大肠杆菌中的表达,对表达的重组蛋白进行了初步纯化,利用纯化的重组蛋白初步建立了检测PCV2抗体的ELISA方法。采用PCR技术对12个规模化猪场猪断奶后多系统衰竭综合征发病猪群进行了PCV2检测,完成6株PCV2分离毒株的全基因组序列测定与分析。1.参照GenBank发表的PCV2BF株基因序列,设计合成一对引物,对PCV2BF株ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约720 bp的特异条带,将其回收后克隆到pGEM T-Easy载体。根据基因分析,设计一对带有  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

《北京农业科学》1960年50期
北京农业科学

鸡传染性贫血病毒ORF2基因的扩增及酶切分析

鸡传染性贫血病毒ORF2基因的扩增及酶切分析杨兵周文平沈冰韦莉韩苏平(北京市农林科学院畜牧兽医研究所100081)摘要根据鸡传染性贫血病毒(CIAV)CUX-1标准毒株DNA序列中ORF2基因片段设计一对引物,对CUX-1进行扩增,得到大小为684bP的片段,符合设计目的。以疑似CIAV的分离物SR43感染鸡马立克氏病淋巴瘤细胞(MSB1),提取全细胞DNA,用该引物进行扩增,也得到同样大小的片段。在使用限制性内切酶HindⅢ,37℃对CUX-1和SR43的PCR产物酶切后,进行琼脂糖凝胶电泳分析,均获得433bP和251bP两个条带。初步证明,SR43与CIAV-CUX-1DNA序列基本相同。关键词鸡传染性贫血病毒ORF2基因聚合酶链反应酶切鸡传染性贫血病(CIA)由鸡传染性贫血病毒(CIAV)引起。该病特征为雏鸡出现再生障碍性贫血,免疫抑制和淋巴系统萎缩[2],由于CIAV的免疫抑制作用,可造成鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊病...  (本文共3页) 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2009年15期
黑龙江畜牧兽医

猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆及其真核表达载体的构建

猪圆环病毒2型(Porcine cicrovirus type 2,PCV-2)为无囊膜的单股环状负链DNA病毒,属于圆环病毒科圆环病毒属。该病毒无囊膜,病毒粒子直径为15~17 nm,基因组大小为1 767 bp或1 768 bp,有11个读码框,其中ORF1和ORF2是最主要的读码框[1,2]。ORF2大小为702 bp,编码233个氨基酸,是病毒的主要结构蛋白(核衣壳蛋白),具有良好的免疫原性,产生的抗体在血清中维持时间长,是构建重组疫苗和检测的首选基因。该病毒与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道综合征(PRDC)等密切相关。试验从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征的死亡仔猪组织病料中扩增得到了ORF2基因并成功构建了含ORF2主要抗原位点基因的真核表达载体,旨在为猪圆环病毒2型的诊断和基因工程疫苗的研究奠定基础。1材料与方法1.1材料与试剂病料为河南省平顶山某猪场的送检病料(断奶仔猪的...  (本文共2页) 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2013年09期
黑龙江畜牧兽医

猪圆环病毒贵州株ORF2基因的克隆及表达载体的构建

猪圆环病毒(PCV)是一种重要的猪传染病病原,可引起断奶仔猪进行性消瘦、淋巴组织等组织发生病变的多系统衰竭综合征(PMWS)。人们根据PCV的致病性及核苷酸序列将PCV分为PCV-1和PCV-2二个血清型。PCV-1无致病性;PCV-2有致病性,是引起PMWS的主要病毒血清型。自1991年首次在加拿大报道PMWS后,亚欧许多国家和地区相继报道该病的发生。我国2000年才有圆环病毒感染猪的报道并引起重视,造成猪只的死亡率很高,这给养猪业带来了巨大的经济损失[1]。试验从贵州省某地区猪场采集的疑似PCV的仔猪病料组织中扩增得到了ORF2基因,并成功克隆到pMD19-T载体上,同时将目的基因成功插到原核及真核表达载体上,构建了含ORF2主要抗原位点基因的原核及真核表达载体,为猪圆环病毒的分子生物学技术诊断和基因工程疫苗的研究奠定基础,现报道如下。1材料疑似发生PCV-2的长白仔猪的肺脏、淋巴结、脾脏、肾脏、血液等样品,采自贵州省息烽县...  (本文共4页) 阅读全文>>

《动物医学进展》2009年02期
动物医学进展

猪圆环病毒2型ORF2基因的表达及活性研究

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)有1型和2型2个种(PCV-1和PCV-2)[1]。PCV-1无致病性,但可存在于正常猪体各器官及猪源细胞中;PCV-2有致病性,可引起母猪流产、仔猪出现呼吸道症状及死亡、育肥猪生产性能下降等症状,是引发断奶仔猪多系统衰竭综合征和猪的皮炎与肾病综合征等有关疾病的重要病原;PCV-2还可引起猪体免疫抑制,造成猪疫苗免疫失败[2]。猪圆环病毒2型基因组大小约为1.7 kb,编码11开放阅读框(ORF),ORF1和ORF2是其2个主要的开放阅读框[2],其中ORF1编码与病毒复制相关的Rep蛋白,此蛋白在PCV-1、PCV-2两种病毒之间有85%的同源性,是PCV-1、PCV-2产生抗原交叉性的主要原因;ORF2基因是PCV-2的重要抗原基因,编码病毒的衣壳蛋白(Cap蛋白),在Cap蛋白上存在抗原表位,具有免疫原性,因此ORF2基因成为建立PCV-2特异性血清学检测方法及核酸...  (本文共4页) 阅读全文>>

《东北农业大学学报》2009年06期
东北农业大学学报

猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Piglets MultipleSystem,PMWS)的病原,在临床上主要引起断奶仔猪发生衰竭、死亡、仔猪先天性震颤(CongenitalTremors,CT)、成年猪皮炎肾炎综合征(Porcine Der-matitis and Nephropathy Syndrome,PDNS)和呼吸道疾病综合征(Pathogenic Respiratory Disease Syndrome,PRDS)等多种病症[1]。Shibahara等证实PCV2可诱导淋巴系统中细胞凋亡,使得抗原递呈细胞递呈抗原能力减弱,同时降低了淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞机能,所以PCV2也是导致猪免疫抑制的重要病原之一[2],猪感染圆环病毒2型后很容易造成其他病原的继发感染。所以该病在猪群中的存在给养猪业造成了相当大的经济损失[3]。PCV有两个基因型,PCV1和PCV...  (本文共6页) 阅读全文>>