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猪圆环病毒2型ORF2基因表达及重组蛋白ELISA方法的建立

猪圆环病毒2型(Porcine circovurus type 2,PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。PCV2的ORF2基因不仅是其主要结构蛋白的编码基因,而且也是区分PCV1和PCV2的重要区域,其编码蛋白具有良好的抗原性。本研究利用PCR技术扩增出PCV2BF株ORF2基因,并进行了分子克隆,成功实现了ORF2基因在大肠杆菌中的表达,对表达的重组蛋白进行了初步纯化,利用纯化的重组蛋白初步建立了检测PCV2抗体的ELISA方法。采用PCR技术对12个规模化猪场猪断奶后多系统衰竭综合征发病猪群进行了PCV2检测,完成6株PCV2分离毒株的全基因组序列测定与分析。1.参照GenBank发表的PCV2BF株基因序列,设计合成一对引物,对PCV2BF株ORF2基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条约720 bp的特异条带,将其回收后克隆到pGEM T-Easy载体。根据基因分析,设计一对带有  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

断奶仔猪多系统衰竭综合征的研究

断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PWMS)是由猪2型圆环病毒(Porcine circovirus serotype 2,PCV2)引起的一种新发现的传染病,它不但可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡,还与仔猪A2型先天性震颤(Congenital tremor type A II,CT)、怀孕母猪繁殖障碍(Reproductive failure)、成年猪皮炎肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy,PDNS)和呼吸道疾病综合征(Porcine respiratory disease syndrome, PRDS)有关。这些疾病的广泛流行严重影响了养猪业的发展,给许多国家和地区带来巨大的损失。更为严重的是PCV2的感染可以造成免疫抑制,引起其他各种病原的继发感染,造成的间接损失难以估计。目前,PCV2已经成为严重...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

猪圆环病毒2型ORF2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达及初步应用

猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪群中发生的多种疾病相关,包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、A2型先天性震颤(CT)等。其中以PMWS最为严重,已经给全世界养猪业带来了很大的经济损失,国内也未能幸免。目前,国内还没有有效的检测试剂盒,快速、特异的检测方法已成为迫切需要。PCV-2的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,由病毒基因组中ORF2基因编码,构成病毒的核衣壳,具有较强的免疫原性,基因序列保守,可应用于临床诊断。本研究则从以下方面研究Cap蛋白,旨在建立PCV-2检测方法,为诊断与该病毒相关的疾病奠定基础。1.设计一对引物从谈国蕾构建的pcDNA3-ORF2载体中扩增出ORF2基因,并将扩增出的片段插入毕赤酵母表达载体p PICZ。A中,构建成重组质粒p PICZ_α-ORF2,经甲醇诱导表达、SDS—PAGE、间接ELISA和Western blot试验,结果表明:ORF2基因片段能被分泌表...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医杂志》2007年11期
中国兽医杂志

猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)根据致病性、抗原性及核苷酸序列的差异分为两个类型,即PCV1和PCV2。一般认为PCV1对猪无致病性,PCV2主要导致猪断奶后多系统衰竭综合征(PM-WS)[1]。目前各国研究者发现PCV2常与猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)或猪细小病毒(PPV)并发感染,也可以引起细菌继发感染,给世界各地的养猪业造成了巨大经济损失[2]。在我国,PCV2抗体已在PMWS发病猪群和健康猪群广泛存在,给养猪业带来了巨大的威胁[3]。PCV2有两个主要的开放阅读框,其中ORF1是最大的开放阅读框,编码病毒的复制蛋白,与病毒的复制转录有关;ORF2是PCV2的重要抗原基因,编码病毒主要结构蛋白,与宿主免疫有关,且在两型PCV之间不存在抗原交叉反应[4]。开展ORF2基因及其编码的蛋白的研究,对于探索PCV2病毒的致病机理、免疫特征及诊断方法都有极其重要的意义。本研究利用原核表达的PCV2 ...  (本文共3页) 阅读全文>>

《河南农业科学》2010年03期
河南农业科学

猪圆环病毒2型ORF2基因片段的克隆与原核表达

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是圆环病毒科圆环病毒属成员,是一种无囊膜的二十面体的单链环状DNA病毒。根据致病性和核酸序列的不同,分为1型(PCV1)和2型(PCV2)[1]。其中1型被认为是细胞污染物,无致病性;2型是引起猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)等相关疾病的重要病原,它可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡,更为严重的是PCV2的感染可以造成免疫抑制,引起其他各种病原的继发感染[2-4]。目前,PCV2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一。PCV2基因组大小为1767bp或1768bp,包含11个开放阅读框,ORF1和ORF2是主要的阅读框[5]。Nawagitgul等研究发现,PCV1和PCV2之间有交叉免疫现象,但这种交叉免疫主要发生在ORF1区域,二者的ORF1表达蛋白可以相互作用,这可能是因为二者的ORF1的核苷酸和编码氨基酸的同源性比较高(80%);同时发现二者的ORF2表达蛋白具...  (本文共4页) 阅读全文>>

吉林农业大学
吉林农业大学

猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立及初步应用

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)等相关疾病的主要病原之一。PMWS是继猪繁殖与呼吸综合征之后出现的又一猪免疫抑制性疾病,其流行广泛及造成的巨大经济损失,已引起世界养猪业的重视。目前尚无切实可行的商品疫苗和药物来防制PMWS的发生,因此,为了更好地预防和监控猪圆环病毒病,建立一种血清学检测PCV2的方法,以掌握该病的流行情况是十分必要的。根据PCV的抗原性和基因组成不同,可分为PCV1和PCV2两型,PCV1无致病性,PCV2具有致病性。其共有的开放性阅读框架ORF1相对保守,ORF1编码Rep蛋白的抗原性十分相近,氨基酸的同源性达86%,因此,两型病毒之间存在抗原交叉性。而PCV1与PCV2共有的ORF2基因编码病毒的主要结构蛋白(Cap蛋白),在两型病毒间...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医科学》2014年07期
中国兽医科学

猪圆环病毒2型ORF2基因的优化表达及活性检测

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是由Tischer I于1974年首先从猪肾传代细胞系PK-15中分离获得。该病毒可长期持续感染PK-15细胞,不表现CPE[1],在猪身上也无致病性,因而没有引起人们的注意,但随后发现一种具有致病性的新型猪圆环病毒。为了区分,将PCV分为PCV1和PCV2[2],其中PCV1无致病性[3-4]。PCV2可导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multi-systemic wasting syndrome,PMWS)及A2型先天性震颤(congeni-caltremor,CT),而且可引起免疫抑制,容易继发、并发一系列疾病,给世界养猪业造成了较大的经济损失。PCV2的基因组为环状、单链DNA,有2个主要的开放阅读框(open readingframe,ORF),即ORF1和ORF2。ORF1编码与病毒复制相关的蛋白[5],而ORF2编码病毒的主要结构蛋白,...  (本文共5页) 阅读全文>>