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支气管上皮增生性病变FHIT及p53的病理学检测分析

目的 一、观察和分析支气管上皮增生性病变的病理形态特点,为肺癌癌前病变的早期诊断和分子生物学研究提供依据;二、检测和分析FHIT基因杂合性丢失/微卫星不稳定现象(LOH/MI)和p53基因突变在手术切除的肺癌和非肺癌(肺炎性病变)支气管上皮增生性病变是否存在差异,试图从分子生物学水平上揭示“真正癌变”的一些本质性改变,为肺癌前病变的风险性预测提供实验依据。方法 收集360例手术切除的肺鳞状细胞癌和肺炎性病变大体标本,HE染色,显微镜下寻找支气管上皮各级增生病变,观察和分析支气管上皮增生性病变的病理形态特点;采用聚合酶链反应银染技术结合二核苷酸(CA)_n重复序列出现多态性,检测分析肺鳞状细胞癌组(以下简称肺癌组)82例增生性病变和肺炎性病变组57例增生性病变的FHIT基因微卫星位点的LOH(loss of heterozygosity)和MI(microsatellite instability)现象;采用PCR-SSCP-DN  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京市结核病胸部肿瘤研究所
北京市结核病胸部肿瘤研究所

FHIT基因和人肺癌细胞系相关性的研究

目的 研究外源FHIT基因对不同FHIT基因状态人肺癌细胞系恶性表型的影响并初步探讨其抑癌机理方法 用RT-PCR,免疫组化和DNA测序等方法检测4中肺癌细胞FHIT基因和蛋白表达。构建PEGFP-FHIT真核表达载体,转染A549细胞,建立转染单克隆细胞系,细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞计数及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性等的影响。将外源FHIT基因转入三种不同FHIT基因状态的肺癌细胞系,细胞集落形成试验研究外源FHIT基因对肺癌细胞恶性增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。Western blot方法检测母系及转染细胞系中P21~(WAF/Cip)蛋白的表达。结果 801D细胞有内源FHIT表达,A2细胞FHIT表达水平减低,A549细胞缺乏内源FHIT表达。转染外源FHIT基因的单克隆细胞系FHIT-A549的集落形成率降低,凋亡率增加,细胞周期阻滞在...  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

Ras、FHIT、Bcl-2/Bax基因在肺癌中的异常及与吸烟关系的研究

目的 肺癌是人类最常见的恶性肿瘤,其发生发展与多种基因异常有关,同时吸烟与肺癌关系密切。Ras基因是癌基因,FHIT基因是抑癌基因,Bcl-2/Bax为凋亡相关基因,通过研究上述基因在肺癌组织中的异常,包括Ras基因的突变激活、FHIT基因的缺失及Bcl-2/Bax基因的异常表达,探讨与吸烟及临床病理特征的关系。了解肺癌的发生机制及吸烟致癌的分子靶点,为社会控烟及肺癌预防及基因诊疗提供理论依据。方法 随机选择36例临床确诊为肺癌且手术治疗的患者,术中采集肺癌及正常肺组织标本,置于-80℃冰箱保存新鲜组织及10%福尔马林固定标本。对每例病人临床资料进行详细记录包括术前详细的吸烟情况,术后病理特征。按吸烟情况及临床病理特征进行分组对比。分别采用以下方法对每例病人标本进行Ras、FHIT及Bcl-2/Bax基因异常情况进行研究。(1)聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法对新鲜冷冻标本进行K-ras基因突变情况检测...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

宫颈癌中FHIT基因表达与HPV_(16)E_6、HPV_(16)E_7基因表达的关系研究

目的:探讨宫颈癌中FHIT蛋白表达与HPV_(16)E_6、E_7蛋白表达的关系方法:用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别CIN、11例高级别CIN以及61例浸润性宫颈癌标本进行了FHIT蛋白、HPV_(16)E_6、E_7蛋白表达的检测;用免疫荧光染色及流式细胞术检测了宫颈癌细胞株CaSKi、SiHa中FHIT蛋白、HPV_(16)E_6、E_7蛋白的含量;用HPV_(16)E_6SiRNA转染CasKi宫颈癌细胞株,观察了HPV_(16)E_6蛋白表达被抑制后FHIT蛋白表达的改变隋况。结果:1.FHIT蛋白的表达在15/15(100%)例正常宫颈上皮均呈现阳性表达;4/14(28.57%)例CIN Ⅰ—Ⅱ、7/11(63.64%)例CINⅢ、52/61(85.25%)例浸润性宫颈鳞癌中表达异常。,(1)FHIT蛋白表达的异常程度反映了宫颈的病变程度(P0.05);(2)FHIT蛋白的异常表达率与宫颈癌的组织分...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

肺癌发展过程中几种分子生物学指标的变化和临床应用的价值

肺癌组织频繁发生染色体3p和9p遗传物质的缺失,而3p14.2和9p21又是最主要的缺失区域,而其中的抑癌基因:FHIT和p16基因成为本实验的重点。本实验选取:34例远离肺癌的正常肺组织和49例肺癌组织和16例转移性肺门淋巴结,进行①3p14.2和9p21区域杂合性缺失分析:②FHIT基因和p16基因分析(表达水平和突变的筛选):③非肿瘤组织肺组织和正常肺组织的FHIT基因的表达:④Ki-ras突变的筛查,DNA测序。本实验显示:①正常肺组织无FHIT基因异常,非肿瘤肺组织中7/34例(20%)出现FHIT基因编码区(exon5-9)转录本的缺失,此7例组织标本病理切片均显示局灶性良性病变:炎症,上皮增生等。②3p14.2LOH在肺癌组织中是很普遍的事件(81.6%),其中LOH率:D3S1300>D3S1234>D3S1481,LOH主要发生于FHIT基因编码区域内。3p14.2LOH与性别,吸烟史,临床分期,分化程度无明显...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

Fhit基因在人支气管上皮细胞癌变发生发展中的异常改变及其作用机制

肺癌是西方国家最常见的死亡原因,近年来在我国的发病率明显上升。肺癌组织3号染色体短臂的片段缺失是肺支气管癌变过程中的早期事件。Fhit基因定位于3p14.2,它的异常改变常见于多种上皮来源的肿瘤,尤其是与环境致癌物暴露相关的肿瘤。在肺支气管癌前病变阶段已经可以检测到Fhit蛋白的缺失。在肺癌中,吸烟者Fhit DNA及蛋白的缺失显著高于非吸烟者。Y细胞是经SV40 LT抗原转染而建立的人支气管上皮永生化细胞系,Western blot的分析结果发现Y细胞缺失Fhit蛋白。为了进一步了解Fhit基因在人支气管上皮细胞癌变发生中的作用机制,本研究用Fhit基因的真核表达载体转染Y细胞,从而得到了稳定高表达Fhit蛋白的Y/Fhit细胞。表型的研究主要包括Fhit蛋白的高表达对细胞生长、克隆形成、细胞周期及自发性凋亡的影响。与对照Y和Y/pcDNA3.1细胞相比,Y/Fhit细胞的生长速度明显降低、克隆形成率分别下降了14.8%及11...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>