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SH-SY5Y细胞基因表达谱芯片的制备及其应用研究

20世纪90年代,在生命科学领域中出现了一门新兴的尖端技术----基因芯片技术,它综合了分子生物学、微电子学、物理、化学等领域的最新科学技术,经过几年的发展,目前已经广泛应用于人类基因研究中。然而在基因芯片的研究过程中,一些技术细节上需要进一步的摸索。此外在神经科学领域中,神经元的分化机理一直是研究热点。全反式维甲酸作为临床上一种具有良好抗肿瘤作用的药物,它可诱导SH-SY5Y细胞向神经元分化,并抑制其生长,这一模型一直是研究神经元分化的经典模型。由于参与这一过程的机制比较复杂,因而需要采用基因芯片技术进一步研究。本课题根据这一线索,采用马文丽、郑文岭等建立的RD技术制备SH-SY5Y细胞基因表达谱芯片,在基因芯片的制备上做了一些研究,同时应用自制的基因表达谱芯片,研究了RA诱导SH-SY5Y细胞分化的基因表达变化。研究内容分为三部分:1、应用RD技术构建SH-SY5Y细胞基因片段文库。收集大量的基因探针,这是基因芯片制作的前提  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

《现代肿瘤医学》2017年04期
现代肿瘤医学

拓扑替康对神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖、侵袭和迁移影响的探讨

Modern Oncology 2017,25(04):0521-0524神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童时期较为常见的颅外神经内分泌性实体肿瘤[1]。神经母细胞瘤确诊时几乎70%已经出现转移且多数为多部位转移,最常见的转移部【修回日期】2016-09-12位为骨髓、骨、淋巴结、肝脏和皮肤等[2],其中70.5%患者出现骨髓转移、55.7%骨骼、30.9%淋巴结、30.9%肝脏转移[3],少数转移至肺和脑[4]。因强化疗、放疗和造血干细胞移植技术在临床中广泛应用,从而低级别神经母细胞瘤治疗已经取得长足发展,但发生早期侵袭、转移的特性使得高级别或者难治性神经母细胞瘤的预后仍然很差[5]。肿瘤的侵袭和转移包括细胞外基质(ECM)的降解、细胞穿破血管基膜、穿出血管壁进入宿主微环境一系列复杂的过程[6]。基质金属蛋白酶MMPs家族降解基底膜和细胞外基质,从而促进肿瘤细胞在组织中迁移。MMP2、MMP9属于MMPs家...  (本文共4页) 阅读全文>>

《神经损伤与功能重建》2017年02期
神经损伤与功能重建

法舒地尔对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后突触损伤的影响

对于急性脑梗死,临床上除了早期静脉神经嵴,是一种分化程度较低、繁殖快的肿溶栓及桥接动脉取栓或溶栓治疗外,尚无特瘤细胞。其细胞形态、生理及生化功能与正别有效的治疗方法,且能够及时接受上述治常神经细胞极为相似。现被广泛应用于神疗的患者极少[1-3]。寻求有效的治疗方法一经系统疾病的发病机制及药物作用机制方直是关注的热点。面的研究[4-6]。氧糖剥夺(oxygen-glucose de-SH-SY5Y细胞来源于神经系统发育的privation,OGD)是建立细胞缺血缺氧模型惯用的细胞建模技术[7]。近年来研究显示缺血缺氧损伤件下继续培养24 h后,在Olympus CK×41倒置相差显可通过激活Rho/ROCK信号通路进而引起神经元突起微镜下观察其突触损伤及修复情况。回缩、细胞骨架塌陷、细胞凋亡。有效地抑制Rho/1.2.4蛋白表达测定各组细胞在正常细胞培养条件ROCK信号通路的激活则可促进神经细胞突起延长、下继续培养24 h后,收集...  (本文共4页) 阅读全文>>

《实用医药杂志》2015年02期
实用医药杂志

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

氧自由基损伤与许多中枢神经系统退行性病变的发生发展密切相关。如:帕金森病、阿尔兹海默病、多发性硬化等。寻找防治氧自由基损伤的药物对于防治神经退行性疾病具有重要意义[1]。红花甙(carthamin,CAS number:36338-96-2)是我国传统名药红花(flower of carthamus tinctorius)的主要成分[2]。有广泛的心脑血管系统活性。近来有实验证明红花甙有较强的清除氧自由基的作用[3]。本实验利用过氧化氢(H2O2)致神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞株凋亡为神经细胞氧自由基损伤模型,探讨红花甙是否能对抗神经细胞氧化应激损伤,为红花甙用于防治神经系统退行性病变提供依据。1材料与方法1.1试剂与细胞红花甙购自科星贸易有限公司。SH-SY5Y细胞购于中国科学院上海生化细胞所。DMEM/F12培养基购于美国Hyclone公司。AnnexinⅤ-APC和碘化丙锭(PI)染料购于invitrogen公司。细...  (本文共3页) 阅读全文>>

《南方医科大学学报》2015年08期
南方医科大学学报

钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在盐酸布比卡因诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用

盐酸布比卡因是临床常用的局麻药之一,尤其在蛛网膜下腔阻滞广泛应用。但其所致的神经毒性损伤如短暂性神经病学综合征、马尾综合征等已引起人们的广泛关注[1-2]。钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,广泛分布于中枢和外周神经系统,是兴奋性突触的突触后致密物的主要成分,是调节神经元功能的重要分子。Ca MKⅡ与T型钙通道关系密切,二者相互调节,在神经元活动中具有重要作用[3-5]。Cav3.1是T型钙通道的一种亚型,也是SH-SY5Y细胞上表达的主要亚型,其是否与局麻药毒性损伤有关,以及Ca MKⅡ是否通过调节Cav3.1参与盐酸布比卡因所致的神经毒性损伤目前尚不明确。本实验采用盐酸布比卡因致神经细胞损伤的模型,抑制Ca MKⅡ的表达后,检测细胞活力、细胞凋亡率以及Cav3.1的表达来探讨Ca MKⅡ及其对Cav3.1的调控在盐酸布比卡因诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用。1材料与方法1.1细胞培养...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国药业》2015年17期
中国药业

内质网应激在罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

随着局部麻醉药(简称局麻药)在椎管内麻醉的广泛应用,其安全性及可能存在的神经毒性越来越引起学者的关注[1]。局麻药的神经毒性主要表现以神经纤维或脊髓初级神经元的损伤为主,包括暂时性神经病学综合征(transient neurological syndrome,TNS)[2]及马尾神经综合征(cauda equine syndrome,CES)[3]。局麻药用于椎管内或区域神经阻滞,可直接作用于神经元,破坏其氧化磷酸化,干扰线粒体跨膜电位[4],促进神经元程序性死亡。多项研究表明,罗哌卡因能触发神经元细胞内活性氧簇(ROS)暴发,在神经毒性机制中有重要的作用[5]。笔者分析了p38MAPK途径在罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞凋亡中的作用,为预防临床罗哌卡因引起的神经毒性及开发有效的治疗药物提供实验依据。1材料与方法1.1材料DMEM/F12培养基、FBS(Gibco公司);盐酸罗哌卡因(Astra Zeneca公司);细胞凋亡试剂...  (本文共3页) 阅读全文>>