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鳗弧菌主要致病因子的研究

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是引起水产动物特别是鱼类流行性疾病的一种重要病原。本实验室从山东荣城寻山渔场濒临死亡的患病牙鲆中分离得到一株鳗弧菌致病株M3。该菌的致病性极强(LD50为5.144×103 CFU/ per fish),感染牙鲆时引起出血症和溃烂症。为进一步防治这种严重致病菌,对该菌的主要致病因子进行了研究。毒性实验结果表明脂多糖(Lipopolisacchride,LPS)致病性较弱,而胞外产物(Extracellular product,ECP)有较强毒力,可导致牙鲆死亡,其LD50为3.2μg蛋白/g体重。研究发现M3-ECP具有明胶蛋白酶、淀粉酶、卵磷脂酶和酪蛋白酶活性,可溶解牙鲆红细胞。进一步经超滤、Sephadex G100凝胶层析、DEAE-cellulose离子交换层析和HPLC凝胶色谱层析纯化,从ECP中分离得到一个纯化的毒性蛋白,其对金鱼的半数致死量(LD50)为1.2μg蛋白/  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(海洋研究所)
中国科学院研究生院(海洋研究所)

鳗弧菌及其致病因子的检测及减毒突变株和灭活疫苗的研究

从患病牙鲆(Paralichthys olivaceus)分离到一株毒力较强鳗弧菌 M3。鳗弧菌 M3 分泌的胞外产物(extracellular products,ECP)对鳗弧菌的生长有明显的促进作用,通过溶血和蛋白质降解实验以及对牙鲆、金鱼、大鼠等的感染,表明 ECP具有较强的毒力,可导致牙鲆和金鱼死亡。对 ECP 进行分离纯化,经超滤、Sephadex G-100 凝胶层析、DEAE-cellulose 离子交换层析,得到一纯化的毒性蛋白—分子量约为 36 kD 金属蛋白酶。 制备了高效价、特异性良好的兔抗鳗弧菌 M3 抗体和金属蛋白酶抗体,利用玻片凝集法、荧光抗体法、酶联免疫吸附法等免疫学以及 PCR 分子检测方法,对鳗弧菌 M3 进行定性和定量检测,结果表明 PCR 检测法最为灵敏和特异。经肌肉注射感染牙鲆后,利用组织匀浆涂布培养的方法对各组织中侵染的病原进行分离,利用玻片凝集和 PCR 对病原进行检测鉴定,结果发现...  (本文共130页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
福建农林大学

鳗弧菌多克隆抗体和单克隆抗体的制备及其特性分析

鳗弧菌感染鳗鲡、鲈鱼、黄鱼、鲑鱼、香鱼、大菱鲆、牙鲆、虹鳟、对虾等广大水产养殖生物,具有发病快,致死率高和流行广泛特点,给水产养殖业造成较大的危害,受到广泛关注,成为研究热点。制备鳗弧菌(SMW5)全菌灭活抗原,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体血清,其效价达1:320000;对鳗弧菌检测灵敏度为1×104CFU/mL;与副溶血弧菌(ATC17802)、嗜水气单胞菌(JS01-1)和类志贺邻单胞菌(LCCi190625)有微弱的交叉反应;Western-Blot表明多克隆抗体与抗原的40 kDa蛋白有结合,与25-35 kDa的蛋白也有抗原抗体反应。所制备的3株单克隆抗体,其中1H9效价好、抗体分泌稳定、灵敏度高、特异性强,可应用于鳗弧菌ELISA或金标试纸条的研制。以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术,制备鳗弧菌单克隆抗体:细胞融合率达94.6%,融合阳性率达到62.4%;筛选得到3株...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国海洋大学
中国海洋大学

哈维氏弧菌毒力相关基因的筛查及快速检测技术研究

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是一种革兰氏阴性、发光的海洋细菌,在海洋环境中分布广泛。哈维氏弧菌是海水养殖动物的重要致病菌,近年来给海水养殖业造成了巨大的经济损失,因此建立灵敏、准确、快速的检测技术成为研究的重要方向和生产发展的急需,本研究拟建立哈维氏弧菌的快速检测技术。另外,目前已知哈维氏弧菌的致病性可能与其胞外产物中的溶血素、蛋白酶(包括丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶)、磷脂酶和脂酶等相关,至于是否还有其它毒力因子,尚不十分清楚。本文拟对toxS,tcpA, zot, flaB和flaC五种其他弧菌中的重要毒力基因在哈维氏弧菌中的分布进行筛查。toxR(toxin regulator)基因是在弧菌中广泛分布的毒力基因的表达调控基因,能对多种弧菌毒力基因的表达进行调控,而且不同弧菌的toxR序列同源性较低。本文根据哈维氏弧菌toxR基因片段(AY247418),设计特异性引物,对56株弧菌进行PCR检测,发现20株哈维氏...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

中华绒螯蟹常见病原的分离鉴定、致病及免疫机制研究

对患弧菌病的中华绒螯蟹进行了细菌性病原的分离和鉴定,从病蟹体内分离到三株病原菌,其生理生化特性、菌株形态及菌落形态均一致,经鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)。人工注射感染健康蟹,2d内均发生死亡,死亡率100%,并且症状同自然发病症状相似,证实副溶血弧菌为中华绒螯蟹弧菌病的病原菌。药物敏感试验结果表明,此病原菌对链霉素、利福平、卡那霉素、复方新诺明、环丙沙星、氟哌酸、四环素、氟嗪酸、复达欣、菌必治、萘啶酸等药物高度敏感。分离菌株培养物经离心、(NH_4)_2SO_4沉淀、透析、浓缩及过滤除菌获得的ECP蛋白具有明胶酶、几丁质酶、淀粉酶、酪蛋白酶、脂酶、磷脂酶等多种酶活性及溶血活性,但不具有脲酶活性,对中华绒螯蟹具有明显的致病作用。利用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶层析和DEAE-Cellulose离子交换柱层析等方法,从其胞外产物中分离纯化出了2种胞外蛋白酶,用SDS-PAGE电泳测...  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>

厦门大学
厦门大学

哈维氏弧菌胞外产物及鞭毛蛋白的研究

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi )是一种能产生单极端鞭毛的革兰氏阴性杆菌,它是海水养殖中常见的致病菌,由其引起的弧菌病是水产养殖经济动物中最为严重的疾病之一,其爆发性流行可导致多种海水养殖鱼虾贝类大量死亡,造成巨大的经济损失。本论文致力于哈维氏弧菌胞外产物及其鞭毛蛋白免疫原性的研究,主要结果如下:1.以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼(Epinephlus awoara)和斜带石斑鱼(E. coioides)分离的哈维氏弧菌TS-628菌株为研究对象,采用平板玻璃纸覆盖技术,获得该菌株的胞外产物(Extracellular product,ECP),并对其成分进行分析。杯碟法研究表明,哈维氏弧菌TS-628菌株的胞外产物具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、卵磷脂酶等多种酶活性和溶血活性,且溶血性物质具有热不稳定性。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及考马斯亮蓝R-250染色分析表明,ECP蛋白谱带主要集中在...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>