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c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合治疗卵巢癌的实验研究

第一部分目的:探讨c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用及其分子机制。 方法:实验分成7组:正常对照组、c-erbB-2正义治疗组、c-raf-1正义治疗组、c-erbB-2反义治疗组、c-raf-1反义治疗组、全剂量联合治疗组和半剂量联合治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、集落形成试验、细胞周期检测、电镜检测、荧光显微镜检测、RT-PCR、蛋白质荧光强度测定,以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、细胞周期、mRNA及蛋白质表达有无差别。 结果:就全剂量联合治疗组和半剂量联合治疗组而言,转染72h的OD值分别为0.151(p﹤0.005)和0.073(p﹤0.005),增殖抑制率分别达到了88.7%和94.5%,克隆形成率分别为19.4%(p﹤0.01)和12.8%(p﹤0.01),凋亡率分别为24.3%(p﹤0.05)和31.5%(p﹤0.01),明显地下  (本文共144页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国肿瘤临床》2006年14期
中国肿瘤临床

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸转染对卵巢癌SKOV_3细胞的作用

卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤,总的5年生存率不到30%。有报道认为生物治疗在卵巢癌的治疗中将起关键性的作用,而反义基因治疗技术又成为其中的热点之一[1,2]。本文采用表皮生长因子受体(EGFR)介导的信号转导系统上的两个关键基因c-erbB-2与c-raf-1的反义寡脱氧核苷酸(A-SODN)联合转染EGFR高表达的卵巢癌SKOV3细胞[3],探讨其对细胞的增殖抑制作用及其分子机制。1材料与方法1.1主要试剂SKOV3细胞株购自重庆医科大学基础医学院肿瘤研究室。阳离子脂质体(lipofectin)为美国sigma公司产品。c-erbB-2正义脱氧寡核苷酸(SODN)序列为:5'-GGTTCACACGTGGCC-3',c-erbB-2ASODN序列为5'-CCAAGTGTGCACCGG-3'[4];c-raf-1SODN序列为5'-AATGCATGTCACAGGCGGGA-3',c-raf-1ASODN序列为5'-TCCCG...  (本文共4页) 阅读全文>>

《癌症》2003年08期
癌症

C-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤,据最新报道,美国每年新发病例达到23000例左右犤1犦,5年生存率不到30%犤2犦。有作者指出,生物治疗在卵巢癌的治疗中将起关键作用犤3犦。肿瘤的发生是一个多步骤、多因素参与的复杂生物学过程,涉及到多个癌基因的激活和抑癌基因的失活犤4犦,这些研究成果奠定了基因联合治疗的理论基础。肿瘤反义基因治疗技术又成为其中的热点之一犤5,6犦。以往有关的反义基因治疗往往局限于单一基因且多在体外细胞水平。C-erbB-2与c-raf-1是表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)介导的肿瘤信号转导系统(signaltransductionsystem)上的两个关键基因,我们观察c-erbB-2与c-raf-1的反义寡脱氧核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)联合治疗EGFR高表达的卵巢上皮癌犤7犦的作用。1材料与方法1.1...  (本文共4页) 阅读全文>>

权威出处: 《癌症》2003年08期
《重庆医科大学学报》2004年05期
重庆医科大学学报

RNAi沉默c-erbB-2、c-raf-1表达对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

肿瘤的发生是一个多步骤、多因素参与的复杂的生物学过程 ,涉及到多个癌基因 (oncogene)的激活和抑癌基因 (suppressorgene)的失活以及其他肿瘤相关基因 (tumorrelatedgene)的激活与表达。目前采用微阵列 (Microarray)分析方法、反义寡核苷酸技术 (ASODN)、基因敲除技术等同时抑制与肿瘤发病、发展有关的几个关键癌基因研究肿瘤形成机制和探讨抗肿瘤治疗的新方法并取得一定成果。RNA干扰 (RNAiRNAinterference)技术是近几年迅速发展起来的一项全新、高效基因研究技术 ,自2 0 0 1年来Science连续 3年授予有关RNA研究的“三甲”。应用该技术进行基因结构与功能、表达与调控、蛋白质的结构及其在细胞周期 (Cellcycle)与细胞程序化死亡 (PCD)的调节研究已成热点。c -erbB - 2是EGFR家族中最重要成员之一 ,erbB - 2原癌基因的激活与一系列恶...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中华妇产科杂志》2003年06期
中华妇产科杂志

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤形成的抑制作用

随着分子生物学研究的深入 ,人们逐步认识到肿瘤的发生、发展是一个多步骤、多因素参与的复杂的生物学过程 ,涉及到多个癌基因的激活和抑癌基因的失活[1] 。肿瘤反义基因治疗技术目前正成为基因治疗的热点之一[2 ] 。以往的反义基因治疗多局限于单一基因的体外细胞水平 ,我们选用c erbB 2与c raf 1的反义寡脱氧核苷酸 (ASODN)联合转染人卵巢上皮癌细胞株SKOV3 ,然后分别移植到裸鼠皮下 ,观察其对肿瘤形成的抑制作用 ,初步探讨基因联合转染的最适宜剂量。材料与方法一、材料SKOV3细胞株购自重庆医科大学基础医学院肿瘤研究室。阳离子脂质体 (lipofectin)购自美国Sigma公司。BALB/C裸鼠购自四川省抗生素研究所。c erbB 2正义寡核苷酸 (SODN)序列为 :5GTTCACACGTGGCC 3′,c erbB 2反义寡核苷酸(ASODN)序列为 5′ CCAAGTGTGCACCGG 3′[3 ] ;c ...  (本文共3页) 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

C-erbB-2反义探针抑制卵巢癌SKOV3细胞生长的初步实验

目的探讨正义脱氧寡核苷酸(SODN)、反义脱氧寡核苷酸(ASODN)、反义肽核酸(ASPNA)及放射性核素反义治疗对人卵巢癌细胞增殖的抑制作用。方法根据处理细胞的不同药物,本实验分为:对照组(空白对照、脂质体对照、顺铂DDP对照)、寡核苷酸组(SODN、ASODN、脂质体转染SODN、脂质体转染ASODN)、PNA组(ASPNA、脂质体转染ASPNA)、~(125)I标记组(~(125)I-Na、~(125)I-ASPNA)。用药物处理细胞后在转染后3天、5天和7天分别进行MTT试验、集落形成试验观察各组细胞的增殖有无差别。结果0.5nmol/ml时空白对照组在3天、5天和7天OD值分别为0.363±0.046、0.661±0.095和0.989±0.143,集落形成数为40.3±6.1。脂质体反义寡核苷酸组在3天、5天和7天OD值分别为0.191±0.023、0.212±0.029和0.420±0.034,集落形成数为2.3±...  (本文共50页) 本文目录 | 阅读全文>>