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结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核杆菌感染的保护作用

目的:本研究拟从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ag85b、mpt64以及引入甘氨酸接头连接的Ag85B-MPT64融合基因(AM),构建DNA疫苗并探讨其在小鼠体内诱导的免疫应答和在小鼠结核感染模型中的保护作用,为新型结核病疫苗的研制奠定基础,同时也为结核病的免疫防治提供理论和实验依据。方法:1、用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85B、MPT64编码基因以及通过甘氨酸接头连接的Ag85B-MPT64融合基因(AM),构建真核表达质粒pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT64和pcDNA/AM,用酶切和双向DNA测序进行鉴定;2、将MPT64、Ag85B编码基因亚克隆入pET32a中,构建pET/Ag85B和pET/MPT64原核表达质粒,使其在大肠杆菌中表达并鉴定。用重组的MPT64和Ag85B蛋白免疫BABL/c小鼠, 制备MPT64与Ag85B抗血清。3、将pcDNA3.1(+)、p  (本文共134页) 本文目录 | 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》2003年06期
细胞与分子免疫学杂志

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察

由于BCG的免疫保护作用不稳定(0%一80%)加上耐多药菌株的出现,以及AIDS并发结核杆菌感染病例的增多,结核病仍是传染病中威胁人类健康的重要疾病。寻找一种比BCG免疫保护作用更好的疫苗,已成为当今抗结核疫苗研究的当务之急[‘川。DNA疫苗由于其众多的优点被称为第3代疫苗。自前认为最有希望的结核病DNA疫苗,是多个抗原编码基因的融合或者共表达。本研究在已构建Ag85B和MpT石4融合基因真核表达质粒,并在体外成功表达的基础上,进一步研究了其在小鼠体内诱导体液租细胞免疫应答的能力。1材料和方法1.1材料peDNA3.l+、peDN刀Ag85B、peDNA/MI汀石4、PcDN刀AM(删除Ag85B终子密码子,利用Gene SOEing法将A娜5B与MI孑r64编码基因融合)及E.coli DHS。均由本教研室收藏。Endo free质粒抽提试剂盒为Qaigen公司产品。RP-Mll64o和胎牛血清(FCS)购自Hyelone公司...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国人兽共患病杂志》2004年03期
中国人兽共患病杂志

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

BCG在不同地区的免疫保护作用差异很大 (0~ 80 % ) ,寻找比BCG免疫保护效果更好的疫苗成为当今抗结核疫苗研究的当务之急〔1,2〕。结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和MPT6 4都是业已被证实具有较强免疫保护作用的分泌性蛋白 ,其中MPT6 4在一些BCG菌株中缺如〔3〕。本研究将Ag85B和MPT6 4编码基因 ,用疏水甘氨酸接头 ,经PCR扩增构建ag85b -mpt6 4融合基因并在大肠杆菌中进行表达 ,为新型结核疫苗的研究奠定基础。1 材料和方法1 1 质粒、菌株 结核分枝杆菌H37Rv标准株购自中科院微生物菌种保藏中心 ,pET32a、E coliTop10及E coliBL2 1由本教研室收藏。1 2 酶、主要试剂 HindⅢ、NotⅠ购自NEB公司 ,快速连接试剂盒购自TaKaRa公司 ,质粒纯化抽提、凝胶回收、PCR产物纯化试剂盒为上海华瞬生物公司产品 ,细菌基因组DNA抽提试剂盒、琼脂糖等购自上海生工 ...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华医学杂志》2004年08期
中华医学杂志

Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

尽管DNA疫苗综合了减毒活菌苗、灭活菌苗和亚单位疫苗的一些优点,能够诱导较强的特异性细胞免疫,但在抗结核病疫苗研究方面,至今还没有任何单一成分DNA疫苗的免疫保护效果超过卡介苗(BCG)。H37Rv全基因组序列公布以后,给新一代抗结核病疫苗的研究带来了曙光[1,2 ] 。多数学者认为,多个靶抗原、多个靶抗原T细胞表位、某些细胞因子与结核抗原以及结核抗原与免疫增强物质编码基因的融合或者共表达,可能会提高免疫效果,或许是未来抗结核病DNA疫苗研究的一个方向[3 6 ] 。本研究在已经构建Ag85b MPT6 4(AM )融合基因真核表达质粒并证实能在小鼠体内诱导体液和细胞免疫应答的基础上,进一步研究其对小鼠抗结核分枝杆菌感染的保护效果。材料与方法一、质粒、菌株及试剂结核分枝杆菌H37Rv标准株购自中科院微生物菌种保藏中心;pcDNA3 1+、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/AM [删除Ag85b终止子引...  (本文共5页) 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

融合基因ag85B-mpt64_(190-198)-mtb8.4在抗结核新型重组卡介苗以及亚单位疫苗研究中的应用

结核病(Tuberculosis,TB)是一种古老而漫长的感染性疾病,是长期危害人类健康的严重疾病之一。近年来,由于HIV和结核分枝杆菌双重感染,以及耐药型结核分枝杆菌的流行,导致结核病的发病率和死亡率大幅度上升。目前全球大约有20亿人感染上结核病,感染人数接近全世界人口的三分之一,其中每年有85%的死于结核病的患者,以及95%的疑似新发结核病例,都发生在发展中国家。结核病严重威胁着人类健康,联合国已将结核病列为21世纪重点控制的三大疾病之一。目前研制成功的唯一的能够预防结核病的疫苗——卡介苗,虽然已在全球范围内广泛使用,但在近期研究中发现,其许多临床试验结果并不是十分有效,免疫预防效果不稳定,在全球范围的免疫保护力检测,由0-80%不等,并且对成人几乎无效,对已感染患者更是没有治疗作用,可以说卡介苗并不是预防肺结核的理想疫苗,研究和开发新的结核疫苗势在必行!现阶段研究结核病疫苗主要集中在以下几个领域:1.以BCG为载体,重组进...  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

《第四军医大学学报》2003年12期
第四军医大学学报

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因的构建表达

0 引言BCG的免疫保护作用差异很大 (0 % - 80 % ) ,寻找一种比BCG免疫保护作用更好的疫苗已成为当今抗结核疫苗研究亟待解决的问题 .结核分枝杆菌的保护性抗原主要存在于分泌蛋白中 ,但迄今为止 ,还没有任何单一蛋白成分的亚单位疫苗或DNA疫苗的免疫保护作用优于BCG ,因此 ,寄希望于多个抗原的融合或者共表达[1,2 ] .Ag85B和MPT6 4都是已被证实具有较强免疫保护作用的蛋白成分 ,其中MPT6 4在一些BCG菌株中缺如[3] .我们将Ag85B和MPT6 4编码基因融合构建其真核表达质粒并在COS 7细胞中表达 ,为新型抗结核疫苗的研究奠定基础 .1 材料和方法1.1 材料 H37Rv购自中科院微生物菌种保藏中心 ;pcDNA3.1+,COS 7细胞株、重组Ag85B和MPT6 4纯化蛋白及多价抗血清由本教研室收藏 ;HindⅢ ,BamHⅠ购自NEB公司 ;快速连接试剂盒购自TakaRa公司 ;质粒抽...  (本文共3页) 阅读全文>>