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枯草杆菌生物素操纵子基因的克隆、序列改造及功能表达研究

利用基因工程技术生产生物素是国际上高技术竞争的又一热点。由于生物素能够提高家畜胴体质量和改善肉质,提高家畜繁殖力,是家畜品种性能正常发挥所必需的物质。目前,生物素只能通过化学合成方法获得,且均从国外进口,价格昂贵,制约了我国畜牧科技和产业的发展。随着基因工程技术的兴起,人们开始转向生物素生物合成的研究。生物合成方法可以进行生物素的专一性合成,克服了化学合成法收率低,不能专一性合成,需经高成本化学拆分过程才能获得d-生物素的弊端,可使生物素的生产成本降低,从而提高畜牧业的经济效益。我国尚无这方面的研究,因此,开展本研究具有重要的理论意义和经济价值。本研究以枯草杆菌ASl.1094菌株为研究材料,克隆了生物素操纵子基因,并对基因序列进行改造。而后对改造后的生物素操纵子基因进行了功能表达检测及bioW与bioB基因的诱导表达。旨在探索如何提高生物素操纵子基因的表达效率,为该操纵子基因的高效表达提供可行的研究路线和理论依据。并构建了可商  (本文共164页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

枯草杆菌生物素操纵子基因的克隆与功能表达研究

本研究以大肠杆菌(E. coli)克隆载体pUC19为模板,分别用两对引物扩增了含有复制起始序列(ori)和复制蛋白基因(rep)的700bp 片段,以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)质粒载体pGDV1为基本骨架,构建了三个带有氯霉素抗性基因的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌小型穿梭载体pGDVM、pGDVM1和pGDVM2。经大肠杆菌-枯草杆菌反复穿梭实验和细菌连续培养分析检测,结果证明:含大肠杆菌pUC19复制起始区(ori)和复制起始蛋白基因(rep)的700bp克隆片段在大肠杆菌中具有完全的复制功能;构建的三个质粒载体在大肠杆菌和枯草杆菌中能稳定地遗传。这三个穿梭质粒载体分子较小,仅3kb左右;具有较高的拷贝数(在枯草杆菌中约150-200拷贝数),带有多个不同的克隆位点,方便插入目标基因,并且带有氯霉素抗性基因,可以为受体菌提供理想的抗性筛选标记。该系列载体可以作为枯草杆菌理想的基因工程菌构建骨架。本研究成功地克隆了枯草杆菌...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北师范大学
东北师范大学

调控子Fur直接调控鼠疫耶尔森氏菌铁代谢功能的研究

鼠疫是一种古老的自然疫源性疾病,是由鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)引起的。而铁的摄取与利用在细菌生长和毒性中起重要作用。铁摄取调节蛋白(Fur)是革兰氏阴性菌重要的调节子,它调控细菌对铁的摄取和利用。虽然研究发现多个铁摄取系统受Fur调节,但是至今还没有从整体上阐明Fur如何调节鼠疫菌铁代谢。本研究首先基于Red系统一步法缺失替换鼠疫菌的fur基因,利用鼠疫全基因组DNA芯片进行基因转录调控的研究。为了鉴定铁-Fur调控元,我们比较了野生株在铁缺乏与铁富余条件下、以及铁富余条件下野生株与fur突变株的全局表达谱的变化。这一分析可以从全基因组水平上筛选出所有受铁-Fur直接或间接调控的靶基因。然后,在表达谱分析基础上进一步通过凝胶迁移实验、足迹实验、RT-PCR和引物延伸实验等这些经典分子生化实验和生物信息学分析,鉴定出受铁-Fur直接调控的操纵子,从而深入探究Fur对鼠疫菌铁代谢转录调控的分子机制。研究表明有32个操纵子/基因...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

《福建师范大学学报(自然科学版)》1987年01期
福建师范大学学报(自然科学版)

操纵子模型的微型计算机程序

本文用BASIC语言设计Monod操纵子数学模型的电子计...  (本文共4页) 阅读全文>>

《微生物学免疫学译刊》1988年03期
微生物学免疫学译刊

福氏2a痢疾菌ySH6000的1400Md侵袭性质粒:逃避宿主细胞的杀伤再感染相邻细胞所需的一个操纵子

由志贺氏菌引起的细菌性痢疾早期必经阶段是侵入肠上皮细胞,在那里增殖并且再感染邻近的细胞。大质粒(230kb)至少和染色体三个部位与福氏痢疾菌的毒力有关。志贺氏菌的毒力是很不稳定的。这是由于质粒遭受巨大缺失式ISl插入所致。质粒的...  (本文共1页) 阅读全文>>

《微生物学报》1989年03期
微生物学报

大肠杆菌棉子糖操纵子α-半乳糖苷酶表达的调节控制

大肠杆菌棉子糖操纵子(raf)位于质粒,其第一结构基因rafA编码的α-半乳糖苷酶为诱导酶。raf操纵子比乳糖操纵子(lac)或蜜二糖操纵子(mel)对诱导物有更严格的结构特异性。该酶被蜜二糖或棉子糖诱导,也被D-半乳糖微弱诱导,但不受乳糖、PNPG等结构相近糖所诱导。α-半乳糖苷酶的酶诱导形成能力在对数生长末期出现高峰。raf操纵子基因结构组成及调节与乳糖操纵子相似。以阻遏物为中介的负调控在raf操纵子调节中起...  (本文共7页) 阅读全文>>

《生物技术通报》1989年01期
生物技术通报

激素和活性多肽

一个预先制备的与thymulin有关的合成基因被连接到被酶切的质粒p...  (本文共2页) 阅读全文>>