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利用酵母双杂交系统筛选与G蛋白及CaM相互作用的新蛋白

酵母双杂交系统是近年来发展起来的一种研究蛋白质—蛋白质相互作用的有效方法,由于它检测的是一种体内的相互作用,自这一系统建立以来,就被广泛地应用于生命研究的各个领域。在植物信号转导领域中,利用这一系统筛选到了许多重要的信号分子。鉴于双杂交技术在信号转导领域中的重要作用,我们开始探索建立这一方法。G蛋白和CaM是植物细胞信号转导中的两个重要的信号组分,它们参与细胞的多种反应,具有重要的生理功能。本文利用酵母双杂交系统分别筛选了与这两种蛋白相互作用的蛋白质,以进一步研究G蛋白和CaM信号转导途径中的其它上下游组分。本工作为我室酵母双杂交方法的建立打下了一个良好的基础。首先以G蛋白α亚基为诱饵构建了诱饵蛋白表达载体。通过PCR扩增得到GPA1基因并将其克隆到双杂交DNA结合域载体pGBKT7中,得到的重组质粒命名为pGBKT7-Gα,β—半乳糖苷酶活性鉴定表明Gα不具有自激活特性,将其转化到酵母菌pJ69-4A中,再以此为受体菌转化拟南  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

KGF-2结构与功能的研究

角质细胞生长因子-2(keratinocyte growth factor-2,KGF-2) 是成纤维细胞生长因子家族的一员,能够特异性促进上皮细胞的生长、增殖和分化。在个体发育过程中,KGF-2调控多种组织和器官的形成;动物模型研究表明,KGF-2在促进皮肤创口愈合,预防放疗引起的粘膜炎,以及治疗溃疡和肠炎等方面都有显著疗效;另外,KGF-2的过量表达还与某些组织和器官的肿瘤发生密切相关。KGF-2的诸多生物学功能主要是通过激活其细胞膜表面受体FGFR2IIIb介导的信号通路完成的,因此,通过对KGF-2与FGFR2IIIb相互作用分子机制的研究,确定KGF-2的关键受体结合和活性位点,将对控制KGF-2信号以及合理设计用于人类疾病治疗的KGF-2药物及其拮抗剂具有重要意义。此外,KGF-2具有核转位现象,但目前对其核转位的机制和功能还不清楚,也未见研究和报道。本实验利用计算机分子模拟系统对KGF-2与FGFR2IIIb结合的...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>

上海医药工业研究院
上海医药工业研究院

利用酵母双杂交系统筛选β-内酰胺酶抑制剂

β-内酰胺类抗生素(青霉素和头孢菌素)在临床上用于治疗多种细菌感染疾病,它们对人类的健康作出了巨大的贡献。但是,随着抗生素的广泛应用以及某种程度上的滥用,耐药菌在不断地产生,它们对许多β-内酰胺抗生素耐药,从而使这类药物对耐药菌感染的疾病无效。微生物来源的β-内酰胺酶的抑制剂棒酸(Clavulanic acid)及其β-内酰胺砜类化合物舒巴坦(Sulbactam)和他佐巴坦(Tazobactam),均在七十年代至八十年代被发现并证实是有效的β-内酰胺酶的抑制剂,且作为“自杀者”与β-内酰胺抗生素合并用药,可达到抑制β-内酰胺酶活力、增强β-内酰胺抗生素疗效的目的。然而,无论是砜类还是棒酸类抑制剂,对一些细菌产生的由染色体介导的Ⅰ型β-内酰胺酶的抑制作用都很小。近来人们从带棒链霉菌(Streptomyces clavuligerus)中分离到β-内酰胺酶抑制蛋白(β-lactamase inhibitory protein, BL...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

RSB66和HSD13编码蛋白质的功能研究

哺乳动物的精子发生过程是研究细胞周期调控和细胞分化机制的一个重要的模型。在此过程中,精原干细胞通过有丝分裂使其数量得到扩增,经减数分裂,随后再经历单倍体精子细胞的变形,发育成成熟精子。上述过程由在严格的时间和空间调控下进行表达的大量基因参与下完成。激光捕获显微切割(LCM)是近年来发展起来的从杂乱的多细胞组织中分离特定细胞群的新技术,分离的细胞群还可应用于后续的DNA、RNA和蛋白质的分析。在本组以往的实验中,我们在国际上首次用LCM分离获得了大量的大鼠初级精母细胞和圆形精子细胞,提取了这两种细胞的总RNA后,通过消减杂交技术建立了初级精母细胞消减圆形精子细胞的消减cDNA文库(RSB)。RSB66基因就是从RSB文库分离到的一条新基因。RSB66的cDNA全长为564bp,GenBank注册号为AY121839。开放阅读框编码含168个氨基酸残基的多肽链。Northern blot显示RSB66基因只在大鼠睾丸中特异性表达。根...  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

新基因TH1的功能研究

人Trihydrophobin 1(TH1)基因是果蝇Drosophila TH1基因的同源物,是D.T.Bonthron等人在2000年通过定位克隆方法得到的一个新基因。序列分析表明,该基因序列从Drosophila果蝇到人之间高度保守,其位于染色体20q13上,转录产物为2.4kb,蛋白产物分子量约为65.8kd。Nothern检测表明其在组织分布广泛,在心肌和骨骼肌,肾脏,肾上腺,甲状腺里高表达。尽管其进化上高度保守,目前对于其功能研究还是一片空白。我们实验室首先报导了新基因TH1编码产物,Trihydrophobin1蛋白,无论在体外和体内都能够特异的与Raf激酶家族中的A-Raf激酶结合,而非B-Raf或C-Raf.为进一步研究其可能具有的生物学功能,我们构建了一系列TH1的缺失突变体,通过酵母系统和GST-pulldown实验证实了TH1蛋白N端1-372氨基酸组成的区域对于这种结合是至关重要的。在HEK293和SM...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物信息学》2008年01期
生物信息学

酵母双杂交系统研究进展

综述了酵母双杂交技术的基本原理和实...  (本文共3页) 阅读全文>>