分享到:

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的高效可溶性表达和检测血清抗体的间接ELISA方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)主要引起怀孕母猪的繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状,自1987年首次报道以来,已形成全球性流行并造成了很大的经济损失。该病的病原为PRRSV,随着毒株的毒力变异,新的强毒株不断出现,并能引起免疫过的猪场发病,而且人工致弱的疫苗毒也能返强而引起临床疾病。目前尚无理想的针对PRRS的预防和控制措施,因此加强对该病的监测尤为重要。本文分别用真核和原核表达系统对PRRSV核衣壳蛋白基因进行了高效可溶性表达,并用重组的核衣壳蛋白作为抗原,成功地建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。另外,还对PRRSV的凋亡诱导作用进行了研究。一、猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因在杆状病毒表达系统中的表达用RT-PCR扩增出美洲型PRRSV VR 2332株核衣壳蛋白(N)基因,首先克隆到pGEM-T easy载体,再亚克隆到转座载体pFastBacl,最后将含有PRRSV核衣壳蛋白基因的表达盒转座到穿梭载体Bacmi  (本文共130页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国农业大学学报》2009年02期
中国农业大学学报

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive andrespiratory syndrome,PRRS)是由PRRSV引起的致妊娠母猪早产、流产、产死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸困难的传染病[1-3]。目前该病遍布世界各养猪国家,尤其近年来我国养猪规模扩大,疫情也有所增加,PRRS为猪主要疫病之一给养猪业造成经济损失。因此,迫切需要建立有效可靠的检测手段,以便及时准确地监测猪群的免疫抗体水平,但目前国内关于PRRSV抗体检测方法的报道较少,对于PRRS的诊断方法多集中于对病毒抗原的检测,耗时长且费力,以致急需适合广泛应用于实践中的抗体检测方法。PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属,为有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组全长约15kb。根据基因型可分为以LV毒株为代表的欧洲型和以VR2332为代表的美洲型[4]。我国主要流行株为美洲型[5-6]。PRRSV共含有有8个开放阅读框(ORFs)。ORF1a和ORF1b编码RN...  (本文共6页) 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2009年02期
上海畜牧兽医通讯

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的高效表达及鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Res-piratory Syndrone Virus,PRRSV)结构蛋白分别由ORF 2~7编码,这六个ORF呈部分重叠式结构,分别编码相应的结构蛋白:Gp2、Gp3、Gp4、Gp5、M(膜基质蛋白)、N(核衣壳蛋白),其中N、M、Gp5为主要结构蛋白。N蛋白是含有一个潜在的糖基化位点的磷酸化蛋白,是PRRSV病毒粒子中含量最高的结构蛋白,占病毒蛋白的20%~40%〔1〕。N蛋白氨基酸序列分析也表明,同型N蛋白氨基酸序列同源性在96%~100%之间〔2,3〕。LeCall等〔4〕对15株欧洲型分离株ORF7的序列分析结果表明,ORF7高度保守,即使是在体内传代也很少引起ORF7的核苷酸序列变异。猪感染PRRSV后,一周后即可检出N蛋白抗体,且N蛋白抗体维持时间较长。另外,N蛋白激发的免疫反应最强,机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白的,因此,N蛋白...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2007年02期
中国兽医学报

原核高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的特性及应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reprodu-ctive and respiratory syndrome virus,PRRSV)为引起PRRS的病原体,属于动脉炎病毒,带囊膜的单股正链RNA病毒,基因组全长约15kb。根据病毒基因组的差异,PRRSV可分为2个基因型:欧洲型(A型,LV株为代表株)和美洲型(B型,ATCC-VR2332株为代表株)[1]。PRRSV含8个开放阅读框(ORFs),ORF1a和ORF1b为编码病毒复制酶基因,ORF2至ORF7均为编码病毒结构蛋白的基因。ORF7基因位于病毒基因组3′末端,编码核衣壳蛋白(N),组成病毒的核衣壳,起保护病毒基因组的功能。研究表明,N蛋白羧基端对维持蛋白正确构型和抗原性具有重要作用,而氨基端两处由碱性氨基酸残基构成的结构域参与结合病毒RNA的功能[2-4]。通过研究PRRSV感染Marc-145等细胞的试验发现,N蛋白本身具有相互作用的特性,它可通过非共价键...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国兽医科技》2000年04期
中国兽医科技

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的分离与分析

猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS)是以母猪繁殖障碍及仔猪呼吸困难为主要临床特征的一种病毒性传染病 ,病原PRRSV属动脉炎病毒群[1,2 ] ,有美洲型和欧洲型两型 ,迄今我国发现的毒株多为美洲型。PRRSV基因组为单股正链RNA ,大小约1.5× 10 4 bp,含 8个开放阅读框 (ORFs) ,分别编码 6种结构蛋白和 2种非结构蛋白 ,其中ORF 7编码核衣壳蛋白 (NP) [3 ] 。本研究应用RT PCR方法 ,从北京某PRRS发病猪场病料中分离出NP基因 ,进行了序列测定和分析。1 材料与方法1.1 材料PRRS病猪肺 ,采自北京某猪场 ,-70℃冻存 ;RNA提取试剂、逆转录酶和限制性内切酶等试剂 ,购自华美生物工程公司 ;TaqplusI ,购自中国科学院上海生物工程研究所 ;pGEM T载体 ,购自PROMEGA公司 ;测序试剂盒 ,为Amersham公司产品 ;α 3 5SdATP ,购自Dupont公司。1...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国畜禽传染病》1993年05期
中国畜禽传染病

反转录PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)属于冠状病毒,核酸为15~20kb的正链RNA,病毒粒子含有3种主要结构蛋白,即纤突蛋白 (s)、膜蛋白(M)和RNA结合的核蛋白 (N)。在工BV感染的细胞中,可以检到5条以上长短不一的病毒mRNA「‘’,它们都具有共同的3‘末端,但一般认为只有接近5/末端区域才能进行翻译,合成病毒蛋白,其中最小的一条mRNA含量最高,它所翻译的蛋白为非糖基化的N蛋白。 IBV可引起鸡急性传染性支气管炎(IB),在临床上其症状与一些呼吸道传染病类似,如新城疫、亚急性喉气管炎和传染性鼻气管炎等。IB的诊断通常采用鸡胚接种以分离鉴定病毒的方法,但多数野外毒株不能适应鸡胚生长,通常需要传2~3代才能出现典型病变。其他诊断方法,如血清学和病鸡气管组织培养方法等都存在着特异性差和诊断费时等缺点。因此,对1B特异、敏感和快速诊断方法的研究是非常必要的。本实验应用反转录PCR成功地扩增了IBVN的基因,这将有助于对该病特异快速...  (本文共3页) 阅读全文>>

山东大学
山东大学

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白诱导猪肺泡巨噬细胞白介素-10表达的分子机制研究

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS),俗称“蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染病。该病是危害全球养猪业发展的主要疫病之一,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV感染的典型特征是能够引发猪体免疫抑制,使得先天免疫应答不足,获得性免疫发展微弱,中和抗体应答迟缓,从而容易发生其它病毒或细菌的混合感染或继发感染。细胞因子(cytokine, CK)是一类能在细胞间或细胞内部传递信息的蛋白质或小分子肽,许多细胞因子在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。白介素-10(IL-10)是一种具有免疫抑制性调节作用的多能细胞因子。能够引发猪免疫抑制效应的多种病毒在感染宿主时均伴随有明显的IL-10上调,其中就包括PRRSV.我们研究发现,PRRSV (ZCYZ株)核衣壳蛋白能够显著上调可传代猪肺泡巨噬细胞的IL-10 ...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>