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猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的高效可溶性表达和检测血清抗体的间接ELISA方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)主要引起怀孕母猪的繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状,自1987年首次报道以来,已形成全球性流行并造成了很大的经济损失。该病的病原为PRRSV,随着毒株的毒力变异,新的强毒株不断出现,并能引起免疫过的猪场发病,而且人工致弱的疫苗毒也能返强而引起临床疾病。目前尚无理想的针对PRRS的预防和控制措施,因此加强对该病的监测尤为重要。本文分别用真核和原核表达系统对PRRSV核衣壳蛋白基因进行了高效可溶性表达,并用重组的核衣壳蛋白作为抗原,成功地建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。另外,还对PRRSV的凋亡诱导作用进行了研究。一、猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因在杆状病毒表达系统中的表达用RT-PCR扩增出美洲型PRRSV VR 2332株核衣壳蛋白(N)基因,首先克隆到pGEM-T easy载体,再亚克隆到转座载体pFastBacl,最后将含有PRRSV核衣壳蛋白基因的表达盒转座到穿梭载体Bacmi  (本文共130页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

DEV基因文库构建、核衣壳蛋白基因的发现及克隆与表达

鸭病毒性肠炎(Duck virus enteritis,DVE),俗称鸭瘟(Duck plague,DP)是鸭、鹅和大雁等雁形目水禽的一种急性接触性传染病。感染后,患鸭主要表现为急性败血性过程,其特征是血管损伤、体腔出血、消化道出血(或炎症、坏死)、淋巴器官受损及实质器官退行性变化等,具有较高的发病率和死亡率,是目前水禽养殖业的重要传染病之一。本病病原为鸭病毒性肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV),俗称鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV),亦称鸭疱疹病毒1型(Anatid herpesvirus 1,AHV-1),系疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科成员之一,是一种泛嗜性全身性感染的病毒。本研究以DEV CHv株为基本材料,对该毒株进行了提纯研究和基因组酶切分析;构建了DEV基因文库,经比对发现并克隆、鉴定了其核衣壳蛋白基因;利用该基因片段设计引物,建立了基于DEV核衣壳蛋白基因的一种PCR检测...  (本文共136页) 本文目录 | 阅读全文>>

《上海农业学报》1999年01期
上海农业学报

传染性支气管炎病毒T株核衣壳蛋白(N)基因的克隆及部分序列分析

传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus,IBV)是一种冠状病毒[‘j。引起鸡急性高度传染性上呼吸道和支气管感染,使鸡群增重减少,产蛋率下降,饲料报酬降低,甚至引起死亡,给养禽业带来严重的损失。该病毒血清型复杂,极易变异,仅肾病变型就有16个血清型,给该病的诊断、血清学分型、免疫预防与控制带来困难。Australia-T株是肾病型强毒株,不仅引起呼吸道症状,还会导致肾脏肿大、出血、尿酸盐沉着等病理变化’‘’。IBV的基因组为一线状单链RNA,研究表明,其mRNA的A、C、E分别编码IBV的3个重要结构蛋白——S、M、N[’1,近来人们对环绕RNA基因组的核衣壳蛋白(N)越来越重视。本研究应用RT-PCR方法对肾型传染性支气管炎病毒Australia-T株的病毒核酸进行扩增,将N基因部分核着酸序列和推测的氨基酸序列同已发表的Beaudette株、日本分离株和M41标准株序列作了比较。本文报道该项研究结...  (本文共6页) 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的表达及其特性

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)主要引起怀孕母猪的繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状,自1987年首次报道以来,已形成全球性流行并造成了很大的经济损失。该病的病原为PRRSV,随着毒株的毒力变异,新的强毒株不断出现,并能引起免疫过的猪场发病,而且人工致弱的疫苗毒也能返强而引起临床疾病。目前,针对该病尚无有效的治疗措施,因此加强对该病的监测尤为重要。本文分别用原核和真核表达系统对PRRSV核衣壳蛋白基因进行表达,并对目的基因蛋白的表达进行了分析,证明其具有良好的抗原性,为该病的监测和防控奠定一定的基础。一、猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达用RT-PCR扩增出PRRSV YC/2007株核衣壳蛋白(N)基因,首先克隆到pGEM-T easy载体,再克隆到表达载体pGEX-6P–1中谷胱甘肽- S-转移酶(GST)基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌BL21,实现了PRRSV核衣壳蛋白基因在原核表达系统中的表达。经SDS–P...  (本文共40页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国实验动物学报》2006年02期
中国实验动物学报

仙台病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

目前检测啮齿类实验动物SV感染主要采用ELISA方法,通常用全病毒作为诊断抗原进行血清学检测,该种方法存在有以下缺点:①仙台病毒不易在传代细胞上生长,采用鸡胚培养,费时费力;②来源于鸡胚培养纯化的病毒抗原,因含有鸡胚的某些蛋白而易导致试验结果假阳性[1]。综上所述,迫切需要一种操作简单、来源方便、可大量制备SV诊断抗原的方法。本研究参照GenBank上已发表的SV核衣壳蛋白序列设计一对引物,利用RT-PCR从SV中克隆出核衣壳蛋白cDNA,构建原核表达系统,旨在为建立以重组NP蛋白为诊断抗原的SV诊断方法奠定基础。1材料与方法1·1材料1·1·1病毒:SV为本实验室分离鉴定保存,参见文献[2]。1·1·2引物:应用Oligo6·0软件,根据GenBank已发表的SV核衣壳蛋白核苷酸序列设计并在北京赛百胜生物公司合成一对引物。Tf:5′CCAAAGGAATTCATGGCTGGGTTGTTGAGC3′Tr:5′CCTCGTCTCGA...  (本文共3页) 阅读全文>>

《上海交通大学学报(农业科学版)》2006年03期
上海交通大学学报(农业科学版)

鸡传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因的克隆、表达及应用

鸡传染性支气管炎病毒主要结构蛋白包括纤突蛋白(Spike protein,S)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid pro-tein,N)和膜蛋白(Menbrane protein,M)。N蛋白的主要功能是包裹核酸,使之易于装配于核衣壳中,且具有很强的免疫原性,是IBV诱导体液免疫应答、细胞免疫应答的重要免疫原[1]。S蛋白上有病毒主要保护性抗原表位,其S1多肽序列变化丰富,导致了IBV众多的血清型,相比之下N蛋白则比较保守。二者均可用作检测IBV特异性抗体的抗原,但由于S1多肽变异性大,难以用来检测众多血清型的抗体,而N蛋白较为保守,Genbank中收录的IBV N基因经比对分析表明不同血清型间同源性高达94%~99%,因此N蛋白可以用作不同血清型IBV抗体的检测抗原。Abdul[2]等已探讨过用重组N蛋白作为IBV特异性抗体检测用抗原的可行性。上海交通大学学报(农业科学版)第24卷作者克隆并表达了IBV M41病毒株的N基...  (本文共5页) 阅读全文>>