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应用Drug-western法从cDNA表达文库中筛选青蒿素类抗疟药靶标蛋白基因

以总RNA中的mRNA构建的cDNA表达文库理论上含有该生物体的所有表达基因,可表达与天然蛋白相似的重组蛋白。建立cDNA表达文库在一次永久保存基因资源的同时,可以利用功能筛选、免疫学筛选、药物探针筛选、Southern杂交和大规模序列测定等现代分子生物学技术寻找特异性活性蛋白基因,进而克隆和表达这些基因,对从核酸及蛋白质等分子水平研究疟原虫的生命活动规律,对揭示其抗药性分子机理,搞清某些特效药物结合蛋白的基因及此类药物的作用机制,对新型抗疟药物的合理设计及筛选都具有极其重要的现实意义。青蒿素是从传统中草药菊科植物黄花蒿中分离出的一种具有内过氧桥结构的倍半帖内酯。青蒿素类药物是一种与已知抗疟药如氯喹等完全不同的新型化合物。大量药理及临床研究证明青蒿素类药物是优于氯喹的抗疟新药,具有速效、低毒、高效等特点。1991年Meshnick等人提出了青蒿素类药物作用的二步机制假说:首先疟原虫体内血红蛋白的降解产物-亚铁血红素与青蒿素结合,  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

《分子植物育种》2003年Z1期
分子植物育种

基因表达文库的构建及其方法分析

1前言基因表达文库由一组来自于mRNA的DNA片段所构成 ,这些反映了生物体内特定的时期和不同组织的基因表达的信息的DNA片段被连接到特定的克隆载体上 ,并被保存在E coli里 ,作为筛选目的基因的平台。构建基因文库 ,继PCR(PolymeraseChainReaction)技术之后 ,已经成为分子生物学实验室的常规技术和克隆新基因的基本手段。特别是基因表达文库 ,根据组织特异性(tissuespecial)和发育阶段特异性 (developmentalstagespecial)构建而成的不同选择压力下的基因文库 ,给发现新基因提供了更为广阔的空间。因此 ,基因表达文库的构建被越来越多的科研人员应用到实际研究工作中去。本文介绍了多种构建基因表达文库的方法 ,比较它们的构建方法的优点和不足之处 ,并对它们在实际应用中的作用作了较为全面的分析。2基因表达文库的构建方法早在 70年代和 80年代初 ,文库构建 (libraryco...  (本文共5页) 阅读全文>>

《广西医科大学学报》2008年04期
广西医科大学学报

卵巢上皮性癌相关抗原cDNA表达文库的构建

人类肿瘤抗原的鉴定不仅有助于阐明肿瘤免疫的分子机制,也是建立新的肿瘤免疫学诊断和免疫治疗的基础。德国血清学家Sahin等[1]建立了一种从分子水平鉴定肿瘤抗原的方法,即重组克隆表达抗原的血清学鉴定(serological iden-tification of antigen by recombinant cDNA expression librar-ies,SEREX),它将分子克隆技术和利用自体血清对肿瘤细胞的自体分型技术结合起来,其理论基础是人体B细胞可以识别自身肿瘤抗原,且部分抗原可以刺激机体产生高价的IgG反应。这一技术已在肺癌[2]、食管癌[3,4]、乳腺癌[5]、肾细胞癌[6]等多种肿瘤中得到广泛应用。SEREX技术关键的一步是构建高质量的原核表达cDNA文库。本研究的目的是用人卵巢上皮性癌腹腔积液肿瘤细胞构建cDNA表达文库,为筛选、鉴定能用于卵巢上皮性癌早期诊断及可能作为免疫治疗靶向的抗原奠定基础。1材料与方法1...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国病原生物学杂志》2006年05期
中国病原生物学杂志

伊氏锥虫cDNA表达文库的构建

伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)寄生于马、驴、骡、骆驼等动物的血浆和造血器官,引起以进行性消瘦、贫血、黄疸、高热和心肌衰竭等为特征的伊氏锥虫病。该病在世界各地广泛流行,我国受危害的动物不断增多,相继有水牛、鹿、犬、猪、老虎等动物发生伊氏锥虫病的报道[1]。由于伊氏锥虫抗原变异、耐药性、免疫抑制的产生[2~4],目前该病尚无理想的防治方法。伊氏锥虫在长期的进化过程中适应宿主和环境的变化,是因为伊氏锥虫表达的某些因子改变了宿主的免疫反应[5]。本研究欲构建伊氏锥虫cDNA表达文库,为伊氏锥虫免疫相关分子的基因筛选奠定基础。yh材料和方法1虫株伊氏锥虫湖北水牛株,由本室传代,液氮冷冻保存;大肠埃希菌DH5α为本室保存。2主要试剂TRIZOL Reagent为Invitrogen公司产品;cDNASynthesis Kit、ZAP Express Predigested Vector Kit及GigapackⅢGold ...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国农业科学》2008年07期
中国农业科学

长角血蜱卵cDNA表达文库的构建

0引言【研究意义】蜱在摄食过程中,不仅给宿主造成直接损害,而且传播多种病原体。由蜱传播的新老疾病在对畜牧业生产造成巨大经济损失的同时,也引发了严重的公共卫生问题。因而,对蜱的控制非常必要[1]。传统的控蜱方法主要是使用杀虫剂,但由于长期使用某些杀虫剂会使蜱产生抗药性,加之杀虫剂的使用对畜产品和环境所造成污染等问题,因而抗蜱疫苗的研制显示出较好的应用前景[2]。为寻找高效、广谱的抗蜱疫苗候选分子、描述蜱与宿主的免疫生物学特性,必须对蜱吸血、病原传播及蜱与宿主之间的相互作用有更加深入的了解[3]。长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)主要分布在中国东北、华北、西北等广大地区,是流行最广泛和最重要的蜱种之一[4],可传播牛、羊泰勒属(Theileria)和巴贝斯属(Babesia)的多种病原,防控长角血蜱具有重要的流行病学意义。【前人研究进展】在过去的30年,研究蜱与宿主相互作用的免疫生物学技术取得了很大进步。...  (本文共5页) 阅读全文>>

《地方病通报》2008年04期
地方病通报

新疆哈萨克族食管癌cDNA表达文库的建立

哈萨克族食管癌是新疆特高发疾病之一。由于遗传背景和生活习惯的不同,其与发病机理相关的基因和基因组会有明显的不同。通过基因差异表达分析技术,有助于筛出食管癌相关的差异表达基因和基因组。而肿瘤基因表达谱的有效分析必须依赖于基因差异表达分析技术的进展。DAzLE(d ifferential analysis of cD-NA library expression)是由Huiwu Li在霍普金斯大学创立的最新的差异基因表达筛查方法[1],该法包括一次性构建非扩增的全长cDNA文库,建立cDNA文库亚池,克隆杂交初筛差异表达基因,反相Northern B lot进一步筛选差异表达基因。并且,实验结果证明了DAzLE方法的可靠性,准确性及有效性[2]。该法操作方便,实验所需仪器设备简单,建立的全长cDNA文库对标本总mRNA覆盖率100%,二次相关基因确认阳性率在75%以上。因此,本文应用高效可靠的DAzLE系统,拟首先构建新疆哈萨克族食管...  (本文共4页) 阅读全文>>