分享到:

人胚胎神经干细胞体外诱导分化及其分化相关基因表达的研究

第一部分:不同胎龄的人胚胎神经干细胞的体外培养研究【目的】探索人胚胎神经干细胞体外分离培养的条件,并观察其在体外增殖、分化的特点;建立人胚胎神经干细胞分离、培养及分化的鉴定技术,在体外大量扩增培养神经干细胞,为下一步的研究提供足够的材料。【方法】分别取水囊引产4月胎龄的人胚胎和米非司酮流产6-10周胎龄的人胚胎,从胎脑皮层分离组织,采用胰蛋白酶消化和机械吹打的方法获得单细胞悬液。部分细胞冻存,另一部分细胞进行体外培养。采用无血清培养基(DMEM/F12),加入EGF和bFGF(20ng/ml)刺激细胞增殖,从而进行体外扩增培养、连续传代。采用HE染色和相差显微镜观察细胞形态,常规Giemsa染色观察神经干细胞的染色体,免疫细胞化学和免疫细胞荧光法鉴定神经干细胞(Nestin)和分化成熟的神经元(NSE)、星形胶质细胞(GFAP)及少突胶质细胞(CNP)。用流式细胞仪和细胞生长曲线法检测神经干细胞的增殖能力。【结果】从人胚胎脑分离  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

大鼠骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及自体移植治疗颞叶癫痫实验研究

神经干细胞是指具有分化为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞的能力,能自我更新并提供大量脑组织细胞的细胞。它主要存在于胚胎和成年中枢神经系统脑室周围的广泛区域,但最近的研究显示骨髓基质细胞在一定条件下能诱导分化成神经干细胞,从而为神经干细胞的应用提供了无限制的来源。骨髓基质细胞源性神经干细胞的开发和应用,既克服了从脑组织获取神经干细胞的危险性和局限性,也避免了胎儿组织移植中存在的伦理、免疫排斥、来源有限等问题,其在治疗中枢神经系统损伤和神经退行性疾病领域将会有广阔的应用前景。癫痫为神经系统常见病之一,其患病率占人群的5‰左右,国内统计约占全部居民的7‰。癫痫为一非特异性慢性脑疾病,它是由先天的或后天的不同原因导致的慢性脑功能失调所引起的一种临床症候群,其特征是由于大脑某些神经元突然过度高频放电所引起的具有各种临床(或实验室)表现的反复发作。颞叶癫痫为局灶性癫痫的主要类型之一,常有较特殊的嗅觉异常,意识障碍和醉梦状表现。其常见的病理...  (本文共130页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

神经干细胞和皮肤干细胞的体外培养及诱导分化神经细胞的研究

成体干细胞的发现及其诱导分化为神经细胞的研究为人类及动物神经系统各种疾病的治疗和损伤的修复开辟了一条新途径。为了寻求一种自体取材方便、安全有效的可用于诱导分化为神经细胞的成体干细胞,为神经系统疾病的替代治疗提供理想的移植材料。本实验在建立了胚胎小鼠神经干细胞和山羊皮肤干细胞体外分离、培养体系的基础上,分别对神经干细胞定向诱导分化多巴胺能神经元和皮肤干细胞诱导分化神经细胞的条件进行了研究。1.分离培养了小鼠胚胎大脑皮层神经干细胞。原代细胞在培养的第2~3 d即可见到分裂形成的细胞球,5~7 d形成许多大的神经球;生长曲线显示神经干细胞的生长呈持续增长趋势;单细胞克隆试验显示单个细胞可以自我分裂增殖形成神经球,构成的神经球的细胞继续传代培养,同样具有增殖和分化能力,其克隆率可达到93%;所培养的神经球经免疫细胞化学反应呈nestin阳性着色。2.分离神经干细胞时采用先机械吹打、过滤、静置,取上清,再离心的方法,换液时采取只加入不吸弃...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究

研究背景与目的:神经干细胞(neural stem cell,NSC)的发现是神经生物学领域的最重要进展之一。NSC不仅对于中枢神经系统发育成熟后不可能再生的理论提出了挑战, 为研究神经发生、神经系统遗传病的发病机制提供了理想的载体,还为神经系统损伤修复和退行性病变的治疗带来了新的希望。NSC的培养扩增是研究的基础,本实验目的在于通过培养了解其生物学特性,为深入研究其体内外分化奠定基础。方法: 采用体外无血清培养和增殖刺激因子的作用,分离培养人和大鼠胎脑NSC。通过单细胞克隆实验和体外长期传代培养扩增和冻存复苏检测其自我更新能力、增殖能力和生物学特性稳定;免疫细胞化学检测NSC特征性标志nestin表达和分化为神经元和胶质细胞能力;BrdU掺入实验检测细胞增殖状态;通过克隆和细胞计数比较EGF、bFGF对鼠NSC增殖刺激作用,对LIF在人NSC培养中的作用进行探讨。结果:体外无血清选择性传代培养,获得的NSC能分化为神经细胞和...  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学技术大学
中国科学技术大学

人神经干细胞体外诱导过程中信号分子调控及移植后不同内环境下命运研究

由于神经细胞损伤或死亡导致的神经退行性疾病如脑卒中,帕金森等已经成为目前严重危害人们健康的主要疾病类型。然而,由于神经系统自我修复能力有限,该类疾病尚缺乏有效的治疗措施及手段。神经干细胞具有分化为神经系统内各种细胞的能力,通过干细胞移植等再生医学手段为神经系统疾病的治疗带来巨大希望。人多能干细胞(hPSCs)如胚胎干细胞(ESCs)和诱导多能干细胞(iPSCs)不但具有无限的自我更新能力,而且能够在体外分化为各种细胞类型,为体外稳定获得具有移植功能的神经干细胞提供了很好的来源。然而就目前来说,由于神经发育过程中的分子调控机制,尤其是人神经发生机制还不清楚,利用hPSCs体外分化获得有功能的神经干细胞还存在很多问题需要解决,如分化效率不稳定,神经干细胞群体不均一,体外自我更新能力弱等。另外,体外分化的神经干细胞移植体内后在不同内环境下的命运决定,如存活,分化,归巢等尚不明确。基于此,在本论文中,我们在优化人神经干细胞分化方法的基础...  (本文共151页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西医科大学
山西医科大学

溶血磷脂酸影响胚胎神经干细胞增殖和分化的初步观察

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)广泛存在于胚胎脑组织中,也存在于成年哺乳动物的神经系统。NSCs具有自我更新能力,能够定向分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。NSCs的这一特点使其有望成为体外移植治疗神经系统损伤和退行性疾病的重要材料。溶血磷脂酸(lysophospatidic acid,LPA)是一种简单的磷脂类物质,是血清的正常成份,而且正常情况下也存在于脑组织内。LPA的受体,LP_(Al-3),在多种细胞的细胞膜上有不同表达。LPA与G蛋白耦联的受体结合后,激活下游信号传导通路,从而调节体内各种细胞,包括神经元、神经胶质细胞等的功能活动。LPA在细胞水平的作用很广泛,主要是影响细胞形态,促进细胞增殖和存活,诱导细胞凋亡,改变离子电流和钙胞内释放等。Contos等曾报道,1.0 μmo/L LPA可以促进小鼠胚胎NSCs的增殖。但也有文献报道LPA的作用具有两面性,即不同浓度的LPA对同一细...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

胚胎神经干细胞向视网膜神经节细胞诱导分化的实验研究

目的 探索诱导神经干细胞向视网膜神经节细胞分化的途径。方法 培养大鼠胚胎海马和上丘源神经干细胞,并进行形态学和增殖能力的比较。对不同年龄大鼠的视路结构进行组织培养,观察其生长规律。将不同来源神经干细胞分别与新生大鼠、成年大鼠、视神经离断大鼠及假手术大鼠的视网膜、视神经、上丘组织共培养,并对分化的细胞进行鉴定。结果 海马源与上丘源神经干细胞具有相似的形态结构,但两者的增殖速度不同。视路组织接种3天后生长趋于旺盛,而在2周后部分组织的生长逐渐衰退。上丘源神经干细胞与视神经离断后的上丘组织、新生鼠上丘组织或视网膜组织共培养可以诱导分化出视网膜神经节细胞。结论 特定来源的神经干细胞可以在适宜的条件下分化为视网膜神经节细胞。  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>