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内皮抑素基因转移联合电离辐射对肺腺癌的实验性治疗及相关临床研究

恶性肿瘤的生长、转移依赖于血管形成,肿瘤血管生成受到血管生成促进因子和抑制因子的双重调控。内皮抑素(endostatin)是1997年由O’Reilly等从小鼠血管内皮瘤培养液中分离到的一种血管生成抑制因子蛋白。初步研究表明,内皮抑素能抑制内皮细胞分裂,抑制肿瘤的生长和转移。但由于抗血管生成疗法总体上仅能抑制肿瘤生长,并不能完全取代传统的针对肿瘤本身的治疗方法,单独使用时很难完全治愈肿瘤,因此,研究探讨血管抑制剂与传统放、化疗的联合治疗作用已成为当今肿瘤治疗研究的热点。而迄今为止,有关内皮抑素和电离辐射对恶性肿瘤的联合作用研究,国内未见报道,国外研究也甚少。鉴此,本文采用基因工程技术,观察内皮抑素对血管内皮细胞的影响,以及内皮抑素对肺腺癌移植瘤的抑制作用,并进一步探讨内皮抑素与电离辐射对肺腺癌的联合治疗作用,电离辐射对临床肺腺癌患者血清中血管生长因子的影响。旨在为临床恶性肿瘤治疗提供新的策略和依据。第一部 逆转录病毒介导内皮抑  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
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基因重组分泌型内皮抑素腺相关病毒治疗膀胱癌的实验研究

膀胱癌是国人泌尿系统最常见的恶性肿瘤,如何预防膀胱肿瘤术后复发、治疗术后残余瘤与原位癌是临床亟待解决的重大问题。研究认为实体瘤的生长与转移离不开肿瘤血管的生成,当肿瘤生长体积超过3mm~3、细胞数达10~7后就必须依赖肿瘤组织中的新生血管形成来提供生长所必须的养分及排出代谢废物。如果肿瘤超过这样的体积还缺乏毛细血管和小血管的生成,肿瘤将发生退化。因此,抑制血管生成可能是抑制肿瘤生长、防止肿瘤转移的一种有效策略。肿瘤的血管生成是血管生成刺激因子和抑制因子共同作用的结果。目前已分离出多种血管生成刺激因子和抑制因子,最主要的刺激因子有血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等,主要的抑制因子有内皮抑素、血管抑素及干扰素等。内皮抑素是大分子物质胶原蛋白ⅩⅧ羧基端的20kDa片段,被认为是迄今为止所发现的作用最强的血管生成抑制剂。内皮抑素能有效抑制血管内皮细胞的增殖,促使肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤的生长和转移,具有很强的抗肿瘤特性,而且无耐药性...  (本文共152页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
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内皮抑素基因联合持续低剂量阿霉素治疗胰腺癌的实验研究

目的:利用鼠源性内皮抑素mEndostatin基因的增殖缺陷型腺病毒,探讨内皮抑素基因治疗胰腺癌的可行性;并进一步观测其与持续低剂量阿霉素联合治疗胰腺癌的疗效。方法:先构建腺病毒载体pCA-mEndo,与腺病毒pBGH-3在293细胞内同源重组构建增殖缺陷型腺病毒Ad-mEndo;腺病毒Ad-mEndo在体外分别感染胰腺癌细胞株BxPC-3、AsPC-1,观测其体外转染及内皮抑素表达情况;并通过鸡胚绒毛尿囊膜实验进一步观测表达的内皮抑素蛋白抑制血管形成的活性。在裸鼠胰腺癌皮下模型中,分别于肿瘤内注射10~9pfu Ad-mEndo、Ad-GFP及NS,每周1次,共4次;腹腔内注射低剂量阿霉素1.2mg/kg,每周2次,共8次,并与腺病毒Ad-mEndo联合应用,观测抑瘤效果及毒副作用。在裸鼠胰腺癌原位模型中,分别腹腔内注射NS、腺病毒Ad-mEndo、阿霉素及腺病毒Ad-mEndo与阿霉素联合应用;腹腔注射2×10~9腺病毒Ad...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
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腺病毒介导的内皮抑素基因对小鼠Lewis肺癌的抑制及其与化疗协同作用的实验研究

血管抑制疗法是目前肿瘤治疗研究的一个热点。1997年发现的内皮抑素因其抑制血管生成作用强而备受关注,内皮抑素重组蛋白在动物实验及临床试验中已显示出明显的抑瘤作用。但内皮抑素蛋白制剂存在时效短、需反复追加,并且可引起全身性副作用等不足,使其在临床的应用受到限制。为解决这一矛盾,本实验构建携带小鼠内皮抑素(mouse Endostatin,mES)基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-mES),在体外证明其转染效率、安全性及其血管抑制活性的基础上,研究Ad-mES对小鼠Lewis肺癌生长、转移的抑制及其与化疗的协同作用。目前国内尚无文献报道,本实验从以下三部分进行研究:第一部分 携带内皮抑素基因的增殖缺陷型重组腺病毒载体(Ad-mES)的构建及其制备目的 构建携带小鼠内皮抑素基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-mES),并进行体外安全性检测。方法 选择mES基因为治疗基因,以腺病毒作为基因转移工具,将其亚克隆至穿梭质粒中构建成转移质粒pC...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
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腺病毒介导内皮抑素基因治疗小鼠肺癌的实验研究

研究背景血管生成是肿瘤发展、转移的重要条件,也是所有肿瘤的共性。实体瘤形成之初尚无血管生成,此时肿瘤细胞的营养主要通过弥散获得,当细胞距离毛细血管200um以上时,氧气将无法通过弥散作用抵达肿瘤细胞,此时如再无新生血管的生成,肿瘤组织将发生退化,而若有新生血管长入肿瘤组织,肿瘤将迅速生长,并且其浸润和转移能力也大大增强。研究证实通过抑制肿瘤血管内皮细胞的生长,可达到抑制肿瘤血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡的目的。抗血管生成治疗以其广谱、低毒、无抗药性受到了广泛关注,特别是内源性血管抑制药物的发现,掀起了抗血管生成研究的高潮。内皮抑素是新近发现的一种内源性抗血管生成药物,蛋白治疗可完全抑制动物肿瘤生长和抑制肿瘤转移,是现今发现的抗血管生成作用最强大的药物之一。由于其需要长期应用,体外不稳定,大量生产困难等因素限制了其更广泛的应用。基因治疗提供了一种替代途径可解决上述问题,而腺病毒是目前应用最广泛的载体之一。如能将两者结合起来,构建一种高...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
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腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因治疗G422胶质母细胞瘤的实验

一、重组腺病毒的制备及其对肿瘤细胞、内皮细胞生长的作用目的:制备高浓度、高纯度携有小鼠内皮抑素基因的重组腺病毒,测定该病毒体外对效应细胞的转染率,明确转染后肿瘤细胞能够表达内皮抑素,观察携有目的基因的重组腺病毒转染后对肿瘤细胞及内皮细胞体外培养时生物学特性变化。方法和结果:(一) Ad-mEnd和Ad-GFP用293细胞扩增,经氯化铯密度梯度离心法纯化浓缩后,TCID50法测得最终病毒滴度分别为5.01×10~(10) pfu/ml和3.16×10~(10)pfu/ml;并用Ad-GFP测得本腺病毒对G422细胞的体外转染率,在MOI=100时即可达到90%以上。(二) Ad-mEnd转染G422细胞培养后,RT-PCR检测到在540bp位置有高亮度条带表达,定量为β-Actin的5倍,测序结果为End基因;在转染细胞的上清液中,Western blot试验方法能够检测到20KD的蛋白质表达,证实End蛋白质表达。(三) 消化分...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>