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mRNA-DD法克隆、鉴定脊索瘤相关基因cDNA片段及FHIT基因与脊索瘤相关性的实验研究

脊索瘤是发生于神经轴中线并侵及邻近骨的脊索残留物,是脊柱肿瘤中最常见的一种。Gray等通过文献复习222例患者,仅2例无病生存达10年,平均生存5.7年。由于局部复发和并发症的发生率高,故致命性危害大。因而脊索瘤相关基因研究将有助于脊索瘤基因诊断和基因治疗的进展,从而在分子机制上彻底去除或阻断致病基因的作用,达到治疗脊索瘤的目的。在本研究中我们应用mRNA差异显示、RT-PCR和免疫组化技术对脊索瘤相关基因进行了研究。本研究共分两部分,第一部分是应用mRNA差异显示方法对脊索瘤相关基因cDNA片段进行克隆、测序与鉴定;第二部分是脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与脊索瘤相关性的研究。cDNA为模板,进行PcR反应。DD一PCR产物应用凝胶系统分离、扫描,切下差异条带,重新进行PCR扩增纯化,扩增体系、条件同DD一PCR。将纯化的。DNA片段进行测序,测序结果在互联网上进行同源性比较和分析。差异。DNA片段的验证:根据两个差异cDN  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京市结核病胸部肿瘤研究所
北京市结核病胸部肿瘤研究所

FHIT基因和人肺癌细胞系相关性的研究

目的 研究外源FHIT基因对不同FHIT基因状态人肺癌细胞系恶性表型的影响并初步探讨其抑癌机理方法 用RT-PCR,免疫组化和DNA测序等方法检测4中肺癌细胞FHIT基因和蛋白表达。构建PEGFP-FHIT真核表达载体,转染A549细胞,建立转染单克隆细胞系,细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞计数及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性等的影响。将外源FHIT基因转入三种不同FHIT基因状态的肺癌细胞系,细胞集落形成试验研究外源FHIT基因对肺癌细胞恶性增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。Western blot方法检测母系及转染细胞系中P21~(WAF/Cip)蛋白的表达。结果 801D细胞有内源FHIT表达,A2细胞FHIT表达水平减低,A549细胞缺乏内源FHIT表达。转染外源FHIT基因的单克隆细胞系FHIT-A549的集落形成率降低,凋亡率增加,细胞周期阻滞在...  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

Ras、FHIT、Bcl-2/Bax基因在肺癌中的异常及与吸烟关系的研究

目的 肺癌是人类最常见的恶性肿瘤,其发生发展与多种基因异常有关,同时吸烟与肺癌关系密切。Ras基因是癌基因,FHIT基因是抑癌基因,Bcl-2/Bax为凋亡相关基因,通过研究上述基因在肺癌组织中的异常,包括Ras基因的突变激活、FHIT基因的缺失及Bcl-2/Bax基因的异常表达,探讨与吸烟及临床病理特征的关系。了解肺癌的发生机制及吸烟致癌的分子靶点,为社会控烟及肺癌预防及基因诊疗提供理论依据。方法 随机选择36例临床确诊为肺癌且手术治疗的患者,术中采集肺癌及正常肺组织标本,置于-80℃冰箱保存新鲜组织及10%福尔马林固定标本。对每例病人临床资料进行详细记录包括术前详细的吸烟情况,术后病理特征。按吸烟情况及临床病理特征进行分组对比。分别采用以下方法对每例病人标本进行Ras、FHIT及Bcl-2/Bax基因异常情况进行研究。(1)聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法对新鲜冷冻标本进行K-ras基因突变情况检测...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

宫颈癌中FHIT基因表达与HPV_(16)E_6、HPV_(16)E_7基因表达的关系研究

目的:探讨宫颈癌中FHIT蛋白表达与HPV_(16)E_6、E_7蛋白表达的关系方法:用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别CIN、11例高级别CIN以及61例浸润性宫颈癌标本进行了FHIT蛋白、HPV_(16)E_6、E_7蛋白表达的检测;用免疫荧光染色及流式细胞术检测了宫颈癌细胞株CaSKi、SiHa中FHIT蛋白、HPV_(16)E_6、E_7蛋白的含量;用HPV_(16)E_6SiRNA转染CasKi宫颈癌细胞株,观察了HPV_(16)E_6蛋白表达被抑制后FHIT蛋白表达的改变隋况。结果:1.FHIT蛋白的表达在15/15(100%)例正常宫颈上皮均呈现阳性表达;4/14(28.57%)例CIN Ⅰ—Ⅱ、7/11(63.64%)例CINⅢ、52/61(85.25%)例浸润性宫颈鳞癌中表达异常。,(1)FHIT蛋白表达的异常程度反映了宫颈的病变程度(P0.05);(2)FHIT蛋白的异常表达率与宫颈癌的组织分...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

肺癌发展过程中几种分子生物学指标的变化和临床应用的价值

肺癌组织频繁发生染色体3p和9p遗传物质的缺失,而3p14.2和9p21又是最主要的缺失区域,而其中的抑癌基因:FHIT和p16基因成为本实验的重点。本实验选取:34例远离肺癌的正常肺组织和49例肺癌组织和16例转移性肺门淋巴结,进行①3p14.2和9p21区域杂合性缺失分析:②FHIT基因和p16基因分析(表达水平和突变的筛选):③非肿瘤组织肺组织和正常肺组织的FHIT基因的表达:④Ki-ras突变的筛查,DNA测序。本实验显示:①正常肺组织无FHIT基因异常,非肿瘤肺组织中7/34例(20%)出现FHIT基因编码区(exon5-9)转录本的缺失,此7例组织标本病理切片均显示局灶性良性病变:炎症,上皮增生等。②3p14.2LOH在肺癌组织中是很普遍的事件(81.6%),其中LOH率:D3S1300>D3S1234>D3S1481,LOH主要发生于FHIT基因编码区域内。3p14.2LOH与性别,吸烟史,临床分期,分化程度无明显...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

Fhit基因在人支气管上皮细胞癌变发生发展中的异常改变及其作用机制

肺癌是西方国家最常见的死亡原因,近年来在我国的发病率明显上升。肺癌组织3号染色体短臂的片段缺失是肺支气管癌变过程中的早期事件。Fhit基因定位于3p14.2,它的异常改变常见于多种上皮来源的肿瘤,尤其是与环境致癌物暴露相关的肿瘤。在肺支气管癌前病变阶段已经可以检测到Fhit蛋白的缺失。在肺癌中,吸烟者Fhit DNA及蛋白的缺失显著高于非吸烟者。Y细胞是经SV40 LT抗原转染而建立的人支气管上皮永生化细胞系,Western blot的分析结果发现Y细胞缺失Fhit蛋白。为了进一步了解Fhit基因在人支气管上皮细胞癌变发生中的作用机制,本研究用Fhit基因的真核表达载体转染Y细胞,从而得到了稳定高表达Fhit蛋白的Y/Fhit细胞。表型的研究主要包括Fhit蛋白的高表达对细胞生长、克隆形成、细胞周期及自发性凋亡的影响。与对照Y和Y/pcDNA3.1细胞相比,Y/Fhit细胞的生长速度明显降低、克隆形成率分别下降了14.8%及11...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>