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禽流感病毒M2基因克隆、表达及其重组马立克氏病病毒的构建

禽流感(Avian Influenza, AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种高度接触性传染病,几乎所有的野生及家养禽类都可感染,该病经常给养禽业造成严重的经济损失。M2蛋白是禽流感病毒的跨膜蛋白,含有高度保守的抗原表位,是理想的交叉保护性疫苗的候选抗原。本研究对禽流感病毒M2基因进行了克隆、跨膜区缺失以及原核表达,探讨了金刚烷胺对M2蛋白原核表达的影响;并以该重组蛋白为免疫原制备出抗M2的单克隆抗体;将禽流感病毒M2基因与绿色荧光蛋白基因(EGFP)串联连接后,插入MDV CVI988的非必需区基因US片段中,构建带标记的重组质粒,利用同源重组的方法,构建和筛选出能表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒,初步分析了表达M2基因的重组马立克氏病病毒免疫对禽流感病毒的保护性。采用RT-PCR扩增出H9N2亚型禽流感病毒的M2基因,用OE-PCR的方法缺失了M2跨膜区(27-49aa),利用原核表达载体分别构建出M2全长基因  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国生物工程杂志》2007年09期
中国生物工程杂志

表达禽流感病毒M2基因的重组马立克氏病病毒的构建

几年来的实践证实,疫苗接种依然是防控禽流感的关键。然而,禽流感病毒的保护性抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的变异频率很高,不同变异株间不交叉保护,即以此类抗原研制的禽流感疫苗的保护效力具有亚型特异性,科学家们只有在疾病暴发之后,分离鉴定出病毒亚型,才能研制出相应的疫苗用于免疫,致使免疫防制工作经常处于被动局面,因此寻找一种具有交叉保护作用的禽流感疫苗成为人们关心的焦点[1]。流感病毒的跨膜蛋白(M2蛋白),在所有A型流感病毒中高度保守[2]。资料表明,该结构蛋白在机体内不仅能刺激产生抵抗不同型别流感病毒攻击的抗体,而且能引起CTL反应[3,4],因此M2蛋白是潜在的用来研究交叉保护性疫苗的候选抗原。马立克氏病病毒(Marek’s d isease virus,MDV)是引起鸡的一种高度接触传染性肿瘤病的病原。MDV分为3个血清型:I型包括强毒MDV分离株和它的人工和自然致弱变异株;II型为从鸡体分离的无致病性的MDV毒...  (本文共7页) 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

我国禽流感的流行病学调查

本文在调查、分析禽流感发生情况以及影响疫情相关因素的基础上,针对我国野鸟迁徙的2条主要路线,对我国禽流感病毒生态分布和禽流感流行现状的研究,对爆发高致病禽流感疫区的自主活动鸟类禽流感的血清学调查与分析,对黑龙江省部分地区散养畜禽流感病毒感染的血清学调查与分析,并对鹅源H5N1亚型禽流感病毒新疆分离株A/Goose/XJYL/10/2003HA基因的克隆和序列测定与分析,对H5N1亚型禽流感病毒新疆株NS基因的克隆和序列分析。在此基础上,对禽流感发生的流行病学分析,对高致病性禽流感时空分布规律的初步研究,从而初步建立了高致病禽流感传播的风险评估框架,分析并构建了温度对我国禽流感传播影响的时空模式,建立了禽流感免疫与流行的生物数学模型初析。本文的主要结论是:1.禽流感的发生和流行有其必然的因素,多发生在水多、鸟多、林子多以及野鸟迁徙地及其周边生态环境。2.对高致病性禽流感时空分布规律的初步研究,初步建立了高致病禽流感传播的风险评估框...  (本文共109页) 本文目录 | 阅读全文>>

《实验与检验医学》2017年05期
实验与检验医学

江西省首起聚集性人感染H7N9禽流感实验室诊断与分析

2013年3月,我国东部地区出现不明原因重症肺炎病例,后经国家流感中心确证为新型人感染H7N9禽流感病例[1]。流感病毒为单股负链RNA病毒,基因组大小约为14kb,由HA、NA、NP、PA、PB1、PB2、M、NS八个片段所组成。研究表明新型H7N9禽流感病毒是由多种禽流感病毒重配所产生的,其HA基因可能来自于野鸭中的禽流感H7N3,NA基因来自于东亚迁徙候鸟中的禽流感H7N9,余下六个片段来自于禽流感H9N2[1,2]。人感染H7N9禽流感引起的临床症状主要有高热、咳嗽、肌肉酸痛、呼吸窘迫进而导致重症肺炎[1,3];聚集性病例的出现提示新型禽流感病毒在人际间可能进行有限的传播[4-7]。目前针对其检测方法主要有分子生物学检测、血凝抑制试验与病毒培养等[8];本研究对江西省2例输入性不明原因肺炎患者咽拭子进行实验室检测,最终确诊两位患者为人感染H7N9禽流感聚集性病例,现将结果报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1患者基本...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国病毒病杂志》2017年04期
中国病毒病杂志

2017年湖北省禽类相关外环境H7亚型禽流感病毒分布情况调查

人感染H7N9禽流感是由H7N9禽流感病毒感染引起的急性呼吸道传染病,其中重症肺炎病例常并发急性呼吸窘迫综合征、脓毒性休克、多器官功能障碍综合征,甚至导致死亡[1]。2013年3月,人感染H7N9禽流感病例在我国华东地区首次报道[2],并在国内外引起广泛关注,此后疫情迅速蔓延至我国10余省40多个城市。湖北省2016年只有1例H7N9输入性病例,但从2017年1月13日确诊本年度第1例H7N9病例至2月9日,短短4周,就已确诊19例感染病例。为及时了解湖北省相关环境中H7N9病毒的污染情况,消除潜在危险因素,防止疫情发生,保障人民群众身体健康和生命安全,湖北省疾病预防控制中心对本省禽类相关外环境开展了一次禽流感H7亚型分布情况的横断面调查。1材料与方法1.1活禽市场外环境标本应急监测1.1.1监测点依据湖北省卫生计生委2017年《湖北省外环境H7亚型禽流感病毒应急监测方案》的要求,全省13个市州及天门、潜江、仙桃、神农架林区疾病...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国病毒病杂志》2017年04期
中国病毒病杂志

如何应对H7N9禽流感疫情:改变从现在开始,从每个人开始

2013年春季,我国长三角地区首次发现一种随着家禽运输和贸易不断扩散到其他省份,随后又新型重配低致病性H7N9禽流感病毒(LPAI与当地流行的H9N2禽流感病毒重配,产生新的H7N9),尽管该病毒对禽不致病,但人感染后临基因型[9-10],最为典型的是在第一波疫情末期,长床症状多表现为重症肺炎甚至死亡[1-3]。截至2017三角地区的H7N9禽流感病毒传至珠三角地区后,年7月,H7N9禽流感病毒在人群中经历了5个发进一步与珠三角地区鸡群中流行的H9N2禽流感病高峰,造成我国内地共27个省1 554人感染,病毒发生重配,产生珠三角地区独有的H7N9禽其中606人死亡[4]。2016-2017年第五波流行季流感病毒并且在当地流行至今[11]。节中,报告的病例数几乎是前四波的总和,且出现90%的禽流感病例有活禽市场相关暴露史,因了高致病性H7N9禽流感(HPAI H7N9)病毒感此活禽市场无疑是最重要的防控场所,我国通过在染病例[5]...  (本文共3页) 阅读全文>>

《湖南畜牧兽医》2017年04期
湖南畜牧兽医

H5亚型禽流感病毒的研究与应用

引起禽流感爆发主要病原之一的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV),是造成家禽业经济损失最为严重的病毒。诱导哺乳动物和禽类产生免疫反应的主要两种抗原是神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA),它们都位于流感病毒颗粒表面的囊膜上[1]。预防AIV感染的主要措施有传统的重组活载体疫苗和全病毒灭活疫苗及新型具有更高安全性的病毒样颗粒(Virus-like parricles,VLPs)等疫苗免疫[2]。1 H5Nx亚型AIV流行现状1.1 H5N 2亚型AIV流行情况Xu等[3]1996年在我国广东省水禽中首次发现H5N1亚型高致病性AIV。1997年在中国香港活禽市场和东南亚禽群爆发了高致病性H5N1流感病毒。2004年在台湾、日本、越南等首次报道感染H5N1。2004年东南亚地区累计已经有60个国家发现禽类中存在流行性H5N1流感病毒。2005年HPAI H5N1在中国西部青海湖区爆发水禽感...  (本文共4页) 阅读全文>>