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传染性法氏囊病病毒对CEF细胞某些基因表达的影响和传染性喉气管炎病毒的重组

本论文包括三个部分:1)传染性法氏囊病病毒(IBDV)对鸡成纤维细胞(CEF)某些基因表达的影响和病毒在法氏囊与粪便中的定量研究;2)传染性喉气管炎病毒(ILTV)的重组;3)新城疫病毒(NDV)的分型研究。第一部分:本实验用IBDV感染鸡成纤维细胞(CEF),采用定量实时RT-PCR选检出一个在IBDV感染过程中稳定表达的基因,并以此作为内参基因,用于测定CEF细胞中其它基因表达变化以及病毒在感染鸡的法氏囊和粪便中的定量研究。用IBDV感染CEF细胞,在7天的感染时间中选择了十二个基因进行检测,这些基因编码:β-actin,28S rRNA,18S rRNA,GAPDH,β-2-microglobulin,TBP,PRKG1,IL-13Ra,DDX1,UBC,Ovotransferrin和G6PDH。实验结果表明,β-actin,28S rRNA,18S rRNA和GAPDH基因在感染期间是稳定表达的,β-actin基因是中丰  (本文共177页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽药杂志》1991年02期
中国兽药杂志

鸡传染性法氏囊炎疫苗的研究2512株弱毒在CEF细胞上的稳定性试验

自1987年开始至1990年研究IBD一2522株细胞疫亩以来,生产工艺已经定型,技术比较熟练,生产及检验规程(草案)已经拟定,并根据此规程标准完成了小批量和中试生产。本试验的重点是有关I色D一2512株在CEF细胞上有限代次及稳定性问题,现将试验结果报告如下。 材料和方法 种毒:本厂IBD一2512株CEF细胞冻干毒,效价为104·SED5o/0.2毫升。 阳性血清:自制,标定效价为1,640。用2512株CEF3代毒反复加强免疫21日龄雏鸡后获得。 强毒:由中国兽药监察所提供的C:F4。 种蛋:由本厂动物室提供,经监测IBD、Mn、MG阴性。 1一7日龄雏鸡:由本厂动物室提供 (无IBD母源抗体)。 常规方法消化制备CEF细胞,每毫升含细胞10乃一150万个。接种10一15ml/瓶37℃静止培养,24一48小时后,选健康单层细胞接毒,比例5%,加人维持液,37℃培养观察CPE变化,待CPE达细胞表面80%以上时收冻于一10℃...  (本文共2页) 阅读全文>>

《病毒学报》2011年02期
病毒学报

表达HIV-1六种基因的非复制型重组痘苗病毒在CEF细胞中遗传稳定

痘病毒载体是目前HIV疫苗研究的重要载体[1-5]。本科室构建的新型非复制型痘苗病毒载体缺失了痘苗病毒天坛株决定人宿主范围及一些毒力相关的基因[6]。它在人源细胞中不能完成病毒的复制周期或者复制能力明显减弱,但在鸡胚成纤维细胞(CEF)中增殖良好,是一个安全有效的新型痘苗病毒载体。HIV-1非复制型重组痘苗病毒疫苗(rNTV-C)以本科室构建的新型非复制型痘苗病毒为载体,以HIV-1中国流行株B'/C重组亚型(CN54株)的基因为目的基因。在病毒载体的J片段插入gp160与gag-pol融合基因,在A片段插入RTN(rev、tat、nef三个基因以同一读码框连接),六种基因重组到同一病毒中进行表达,该重组病毒命名为rN-TV-C。其中gag-pol基因为天然结构,pol基因缺失了逆转录酶基因和整合酶基因等有潜在危害的组分;tat基因选择了只含主要抗原决定簇的第一个外显子;其他基因都为完整基因。早期表达的调控蛋白(Rev、Tat、...  (本文共9页) 阅读全文>>