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CD81在正常、脱离及再复位大鼠视网膜中的表达

CD81是tetraspanins蛋白超家族的成员之一,与细胞间接触的稳定和细胞有丝分裂活性的调节密切相关,但由于发现较晚、作用机制也尚未明确,这个分子近期才引起研究者的关注。本研究的目的是观察CD81在正常、脱离和再复位大鼠视网膜上的表达,以及抗CD81抗体对培养大鼠视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞增殖性的影响。本研究共分为三部分:第一部分,是观察CD81在正常大鼠视网膜上的表达。我们应用抗CD81抗体EAT2对正常大鼠的视网膜组织冰冻切片进行免疫组化染色,发现其神经节细胞层、内丛状层和外丛状层呈网状致密染色,视网膜色素上皮细胞膜表面也有CD81的阳性染色;应用抗CD81抗体H121对神经视网膜和视网膜色素上皮层进行Westernblot分析,进一步证实二者都能表达CD81。此后我们又进行了视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞的体外培养,免疫组化染色结果表明,这两种细胞都能表达CD81。第二部分,我们借助MTT法观察抗CD81抗体  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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视网膜内Kir通道的分布、表达和发育

目的:本研究在mRNA和蛋白水平探讨在牛视网膜内Müller细胞的Kir2.1和Kir4.1的表达和分布及其功能,Kir7.1在牛视网膜色素上皮细胞(RPE)的表达和分布;同时研究三种Kir通道在不同种属大鼠、猴和人的视网膜的分布及在大鼠视网膜中发育情况。方法:从牛神经视网膜和视网膜色素上皮分离mRNA,用RT-PCR,和Northern Blot斑点杂交分析不同亚型Kir2.1、Kir4.1和Kir7.1在牛神经视网膜和RPE的mRNA的表达;从牛神经视网膜和视网膜色素上皮分离蛋白质,用Western Blot斑点杂交分析检测不同亚型Kir蛋白Kir2.1、Kir4.1和Kir7.1在牛神经视网膜和RPE的分布;用间接免疫荧光组织化学和ABC法免疫组织化学在冰冻切片上检测三种Kir蛋白在牛、大鼠、猴和人视网膜中的定位及在不同年龄大鼠视网膜中的发育情况。结果:RT-PCR结果显示Kir2.1 cDNA产物在神经视网膜中强表达,在...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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雌激素对缺血再灌注及慢性高眼压模型大鼠视网膜损伤的保护作用

目的 探讨雌激素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法 60只去势雌性SD大鼠随机分为两组,前房灌注升高眼内压,建立视网膜缺血再灌注(RIR)模型。实验组在升高眼内压前两个小时皮下注射17 β-雌二醇(100 μg/kg),对照组大鼠皮下注射等量的植物油。分别于视网膜缺血前,再灌注后12h、24h、48h、72h采用化学发光法测定血清雌二醇水平,对视网膜进行常规HE染色,观察神经节细胞丢失情况及测量视网膜内层厚度。采用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL法)检测视网膜组织中凋亡细胞的表达。利用免疫组化SABC法检测bcl-2、bax、caspase-3蛋白表达,原位杂交检测caspase-3和NF-κB mRNA在视网膜的表达和定位,及荧光实时定量RT-PCR观察各组大鼠视网膜bcl-2,bax,caspase-3 mRNA表达情况。结果 对照组雌激素水平明显低于实验组。光镜下计数,实...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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雌激素预防早产儿视网膜病变的实验研究

目的:观察生理浓度的雌二醇(E_2)在不同氧环境下,对培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRECs)的影响及对SD大鼠早产儿视网膜病变(ROP)模型视网膜新生血管形成的影响,探讨E_2对ROP的预防作用以及可能的作用机理。方法:1.以培养的BRECs为模型,在正常O_2环境及缺O_2环境下,给予不同生理浓度的E_2(浓度分别为10~(-12),10~(-10),10~(-8)mol/L)或PBS作用不同时间(8h,24h),RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA、一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。硝酸还原酶法测定NO的释放。2.制造SD大鼠ROP模型,分别在高O_2[(75±2)%O_2]饲养(P1-7)及正常空气饲养(P8-14)阶段或全程(P1-14)中,给予皮下注射E_2(lug/rat/day,E_2溶解于乙醇,用PBS稀释为0.1mL/rat)或皮下注射溶媒...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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大鼠视网膜再灌注损伤致细胞凋亡的内质网应激机制研究

目的:探讨视网膜缺血再灌注(RIR)损伤致细胞凋亡的内质网应激(ERS)机制。方法:①建立大鼠RIR模型SD大鼠随机均分为对照组和RIR组,采用前房高压灌注(110 mmHg×60min)的方法建立大鼠RIR模型,应用HE染色观察视网膜组织形态学改变,采用TUNEL法检测视网膜细胞凋亡的情况。②RIR损伤对视网膜ERS标志分子BiP和XBP-1表达的影响SD大鼠随机分成对照组和RIR组(各含再灌注后3 h、6 h、12 h、24 h和72 h共5个亚组,每亚组6只)。应用半定量RT-PCR方法检测BiP mRNA的表达水平。应用免疫组织化学方法检测BiP和XBP-1的蛋白表达。③BiP反义寡核苷酸对再灌注损伤中细胞凋亡的影响玻璃体腔内注射FAM标记的BiP反义寡核苷酸,用荧光显微镜观察其转染情况;SD大鼠随机均分为RIR组、BiP反义组和BiP错义组,于再灌注后12 h、24 h和7 d处死(每亚组6只),用免疫组织化学方法检测...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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牛蛙视网膜Müller细胞的形态、分布及γ-氨基丁酸转运体、谷氨酸转运体EAAC1及代谢型谷氨酸受体的表达

Müller细胞是视网膜中主要的胶质细胞。既往曾认为它在视网膜中只是起支持和营养作用。但是近年来,由于许多新技术如纯化细胞培养技术、细胞内Ca~(2+)成像技术以及膜片钳等技术的发展和应用,日益增多的实验证据表明,Müller细胞比过去的认识更为复杂的多。它与视网膜神经元之间存在着双向通讯,可通过改变细胞外空间神经活性物质的浓度或通过控制神经元的微环境来调制神经元的活动。因此,在视网膜信息处理中起着主动而处于动态的作用。两栖类视网膜Müller细胞的胞体较大,材料易得,是胶质细胞研究的理想标本。本实验以牛蛙视网膜为材料,采用免疫荧光组织化学、共聚焦激光扫描显微镜、Western blotting和膜片钳记录等技术作了以下研究。第一部分 牛蛙视网膜Müller细胞的形态与分布本实验采用免疫荧光组织化学技术通过共聚焦激光扫描显微镜对牛蛙视网膜内胶质细胞纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GF...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>