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胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构与功能分析及其突变体的研究

猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneurnonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae.APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。APP最主要的毒力因子是其分泌到细胞外的外毒素——Apx毒素。为了进一步了解该毒素的结构与功能的关系以及为拓展重组毒素蛋白的应用奠定坚实的理论基础,本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,利用原核表达载体pGEX-6P-1对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA在E.coli中进行了原核表达以及与表达转录后活化基因apxⅡC的APP—E.coli穿梭载体pGZRS-38进行了共表达。表达产物都以包涵体形式存在。包涵体蛋白经过洗涤、变性、复性和纯化后,使重组蛋白在体外氧化重折叠并恢复到了天然蛋白状态。通过未活化蛋白以及活化后蛋白的溶血试验,证实了活化基因apxⅡC的产物对ApxⅡ毒素溶血活性是必需的。  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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胸膜肺炎放线杆菌血清1型ApxIA N-端多肽免疫原性的确定及表达该多肽的血清7型重组菌株的构建

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪传染性呼吸道疾病,给世界养猪业造成了严重的经济损失。预防和控制该病的主要措施是疫苗免疫接种。目前商品化的全菌灭活疫苗和亚单位疫苗能够减轻同源血清型菌感染猪引起的临床症状并降低死亡率,但不能降低发病率、慢性感染和阻止肺部病变,对异源血清型菌的感染也不能提供完全的交叉保护。可以说,目前采用灭活苗和亚单位疫苗免疫不是最好的选择,迫切需要更安全、高效的新型疫苗来预防和控制该传染病的发生与流行。与灭活疫苗和亚单位疫苗不同,自然感染或试验感染能够诱导抗任何异源血清型的保护。这样,弱毒活疫苗也许是解决当前商品化疫苗不足的一种可行方法。构建胸膜肺炎放线杆菌突变株的传统方法存在很多缺陷。利用化学或转座子介导的突变方法存在随机性,只适合于表型发生明显...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东农业大学
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猪胸膜肺炎放线杆菌分子流行病学研究

猪传染性胸膜肺炎(Porcine pleuropneumonia)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种高度传染性、致死性呼吸道病,以急性出血和慢性的纤维素性坏死性胸膜炎病变为主要特征。本病对各种猪均易感,在新引进猪群多呈急性爆发,其发病率和死亡率常在20%以上,最急性型的死亡率可高达80%~100%。该病在我国的发生呈逐年上升趋势,已成为危害养猪业最严重的疾病之一,给我国养猪业造成严重的经济损失。本研究根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因设计一对引物,扩增特异的650bp 核酸片段,建立了PCR 检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法。特异性试验结果表明,12 个血清型的放线杆菌参考菌株均能扩增出650bp 特异性的核酸片段,而大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体、伤寒沙门氏菌和支气管败血性波氏杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,PCR 的最低检出限量为500 个...  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

胸膜肺炎放线杆菌ApxⅢA基因的克隆表达及毒力因子免疫原性的测定

猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病。白1957年Pattison首次报道本病以来,该病在世界范围内广泛流行,并给各国养猪业带来了严重的经济损失。由于APP极易产生耐药性,疫苗接种是防控本病的主要措施。目前,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病。但由于APP血清型较多,灭活疫苗的保护效果十分有限。因此,开发新型疫苗已经成为研究热点。本研究通过基因工程方法,重组表达APP的一种毒力因子,制备了重组亚单位疫苗,并进行了免疫保护效果的探讨。研究表明,APP分泌的外毒素(ApxⅠ、ApxⅢ)和外膜蛋白(Omp)等不仅是APP重要的毒力因子,同时也是重要的免疫原性因子。1成功构建了重组表达载体pET-ApxⅢA。并将3种重组表达...  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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猪胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ基因工程突变株构建及其生物学特性研究

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪传染性呼吸道疾病,给世界养猪业造成了严重的经济损失。预防和控制该病的主要措施是疫苗免疫接种。目前商品化的全菌灭活疫苗和亚单位疫苗能够减轻同源血清型菌感染猪引起的临床症状并降低死亡率,但不能降低发病率、慢性感染和阻止肺部病变,对异源血清型菌的感染也不能提供完全的交叉保护。可以说,目前采用灭活苗和亚单位疫苗免疫不是最好的选择,迫切需要更安全、高效的新型疫苗来预防和控制该传染病的发生与流行。与灭活疫苗和亚单位疫苗不同,自然感染或试验感染能够诱导抗任何异源血清型的保护。这样,弱毒活疫苗也许是解决当前商品化疫苗不足的一种可行方法。构建胸膜肺炎放线杆菌突变株的传统方法存在很多缺陷。如利用化学或转座子介导的突变方法存在随机性,只适合于表型发生明...  (本文共120页) 本文目录 | 阅读全文>>

《浙江农业科学》2017年01期
浙江农业科学

桑树APX基因的克隆及在拟南芥的遗传转化研究

利用同源克隆、RACE技术,克隆到桑树APX全长为1 207 bp,包含867 bp的开放阅读框,预测其编码蛋白分子量为31...  (本文共5页) 阅读全文>>

《广西植物》2012年03期
广西植物

菘蓝APX基因克隆及序列分析

为进一步研究菘蓝APX基因的功能,构建了菘蓝APX基因真核表达载体。从菘蓝植株中提取总RNA,逆转录为cDNA,根据APX基因在该类植物中的同源性设计简并引物,利用PCR方法钓取...  (本文共4页) 阅读全文>>