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IGF-1基因转染骨髓基质细胞应用于牙周组织工程的基础与动物实验研究

因牙周病而丧失的牙周组织的修复再生难度较大,因此要达到牙槽骨、牙骨质和牙周膜的完全功能性再生一直是牙周病学领域研究的热点。传统的牙周治疗只能部分修复牙周组织,近年来发展起来的引导性组织再生技术(GTR)虽可使一定的牙周组织获得再生,但总的看来,尚不能达到牙周组织完全再生的目的。将组织工程技术引入牙周病治疗的研究领域,为牙周组织再生带来新思路。现代的组织工程学包括种子细胞/支架材料、生长因子/支架材料和种子细胞/生长因子/支架材料三种构建方式。但生长因子复合入支架材料时一般需要高温和高浓度的表面活性剂,这会加快蛋白的降解,使其活力降低,重组蛋白的免疫毒性增加。复合入支架材料后由于湿度的变化和苛刻的微环境,生长因子可出现不可逆的聚合、脱氨基和氧化,因此需要大剂量的使用生长因子才能维持生长因子的生物学活性和持续释放,而生产这些蛋白价钱昂贵,且大剂量使用有很多安全危险:如蛋白可能扩散到血液中,在机体其他组织发挥生物学效应等。如果种子细胞  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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血管内皮生长因子(VEGF)基因转染促进骨折愈合的实验研究

【目的】血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)能促进新生血管形成,在骨生成和骨折愈合过程中起着十分重要的作用。细胞因子在体内易被很快降解,全身持续用药极不方便。应用转基因技术将目的基因DNA 片段整合入宿主细胞,使其产生稳定有效的表达,具有积极意义。本实验研究的目的是:(1)了解外源性VEGF 基因表达在成骨细胞增殖、分化和成熟中的作用。(2)寻找外源性VEGF 体内转染的有效途径。(3)了解外源性VEGF 基因表达对于骨折愈合的促进作用,为下一步的实验做准备。【方法】(1)通过大肠杆菌和RPM?4G 质粒纯化试剂盒进行pBLAST49-mVEGF 质粒的扩增、提取、纯化和鉴定。(2)利用阳离子脂质体Lipofectamine 转染将pBLAST49-mVEGF 基因导入体外培养的成骨细胞,观察外源性VEGF 在成骨细胞内的表达,及其对成骨细胞生长曲线、细胞周期、合成分...  (本文共109页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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人肿瘤坏死因子-a基因转染对舌癌细胞生物学行为影响的实验研究

目的:①鉴定、提取和纯化含人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrsis factor-α, hTNF-α)基因的pSV23SHTNF 穿梭质粒。②探索利用阳离子脂质体介导pSV23SHTNF穿梭质粒转染Tca8113 舌癌细胞的最佳方法。③探讨hTNF-α基因转染对舌癌细胞生长的影响及其机理。④探讨干扰素-γ(IFN-γ)与hTNF-α基因转染联合应用对舌癌细胞生长的影响。⑤观察人胚成肌细胞转染hTNF-α基因后hTNF-α的表达水平。方法:①Western blot 分析检测hTNF-α克隆化基因在E. coli K12 MC 1061 大肠杆菌中是否有表达。②采用碱裂解提取法及改进的纯化方法获取高纯度的含hTNF-α基因的pSV23SHTNF 穿梭质粒。③用DOSPER 阳离子脂质体介导pSV23SHTNF 穿梭质粒转染Tca8113舌癌细胞后,用免疫细胞化学染色观察hTNF-α基因表达。④用DOSPER阳离子...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
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hsp90基因热诱导激活通路的初探

热休克蛋白家族中分子量为90kDa的热休克蛋白(Hsp90)是真核细胞胞质中最丰富的蛋白质之一。Hsp90能使在各种应激反应中积累的误折叠蛋白再折叠,并可促进已产生突变的蛋白质降解。Hsp90还参与激素受体、其它转录因子、信号途径和翻译起始阶段的激酶及一氧化氮合酶的成熟、胞内转运和活性调节。因此,研究这类进化上非常保守的蛋白的基因表达调控机制和相关的信号转导是非常重要的。研究表明hsp90基因的两种拷贝hsp90α和hsp90β基因具有不同的组成性和热诱导表达调控机制,热休克因子1(HSF1)在hsp90α和hsp90β基因的表达调控中起关键作用,而磷酸化在HSF1的转录激活活性和失活过程中具有非常重要的作用。细胞中转录因子的磷酸化可以通过多种途径完成,其中三种是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径:胞外信号调节激酶(ERK)途径、c-Jun N-末端蛋白激酶(JNK)途径和p38激酶途径。PKC属于介导信号过程的磷脂依赖性丝/苏...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北医科大学
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不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞免疫生物学特性的影响

目的:肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病,免疫功能与肿瘤的发生发展密切相关。随着对肿瘤发生、发展和治疗的研究,尤其是细胞与分子水平的研究逐步深入,转染抗瘤相关细胞因子基因,已成为探索肿瘤免疫的新热点。肿瘤免疫主要是细胞免疫,CD8~+细胞毒T细胞(CD8~+CTL)和NK细胞是细胞免疫的主体抗瘤细胞。IL-15是1994年发现,与IL-2有许多重叠生物活性的细胞因子;是能显著提高CD8~+CTL细胞和NK细胞增殖和杀瘤活性,而备受关注的抗瘤细胞因子。虽然已有一些关于IL-15基因转染肿瘤细胞对其在动物体内成瘤影响的报道,但原型IL-15基因转染的研究未达到预期的抗瘤效果,曾怀疑是其长信号肽影响分泌所致;转染促其分泌信号肽的改型IL-15基因研究也未达到预期结果。由于已知:CD8~+CTL杀瘤识别的抗原,需要肿瘤细胞表面的HLA I类分子提呈;CD8~+CTL的杀瘤功能活化,需要肿瘤细胞表面HLA II类分子提呈抗原激活的CD4...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
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单链寡核苷酸介导基因定点修复的作用机制研究

人类疾病在本质上都是由于基因结构或表达异常所致,随着人类在分子水平对疾病本质的认识和分子生物学领域的新技术的发展,基因治疗已成为当今生物医学领域最具潜力的疾病治疗手段。理想的基因治疗过程是应用高效的载体介导治疗基因进入目的细胞,特异性整合在宿主细胞染色体的适当位置,在细胞中得到可控、适宜的表达。为了达到这个目的,研究人员发展了多种基因治疗策略,包括病毒载体介导的基因添加策略、基于同源重组技术的基因修复策略、寡核苷酸基因疗法等技术。近年来新兴的寡核苷酸介导的基因定点修复技术,就是其中一种比传统策略更具优越性的基因治疗方法。它通过在DNA水平直接修改错误位点,将缺陷基因恢复正常,使得被纠正的基因能够获得组织特异性的、适宜水平的表达,而且使用寡核苷酸无免疫原性,可以象普通药物一样多次施治。目前应用寡核苷酸进行基因定点修复的研究已在多系统多水平展开,包括细菌、真菌、植物和动物等。研究人员发现,寡核苷酸的这种作用极不稳定,重复性较差,由于...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>