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L-异亮氨酸高产菌的选育及其发酵条件研究

本论文根据代谢控制发酵理论,研究了L-异亮氨酸高产菌选育及其发酵条件。主要研究内容和结果如下:(1) 应用“纸层析—色斑洗脱比色法”和“化学比色法”对发酵液中L-异亮氨酸进行了定量分析研究,确立了L-异亮氨酸定量测定条件和计算方法。以高速氨基酸分析仪测定结果为参比,用化学比色法测定结果的准确度比纸层析一色斑洗脱比色法高,且应用化学比色法测定L-异亮氨酸的含量较为方便。(2) 以黄色短杆菌HL41为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)和紫外线诱变处理,经摇管初筛、摇瓶复筛、遗传标记验证、单菌落分离和连续传代,筛选出一株L-异亮氨酸生产菌株ISW330(Met~-+AEC~r+α-AB~r)。该菌株在未经优化的条件下可积累L-异亮氨酸9.18g/L。(3) 确定了亲株ISW330和AS1.495原生质体形成和再生及进行原生质体融合的最佳条件,采用原生质体融合技术最终筛选出一株带有目的遗传标记的L-异亮氨酸高产菌SW0370(Leu~-  (本文共140页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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高产L-异亮氨酸菌种的选育及其发酵条件研究

本论文根据代谢控制发酵和代谢流分析理论,研究了高产菌L-异亮氨酸选育及其发酵条件。主要研究内容和结果如下:应用“薄层层析法”“HPLC”对发酵液中L-异亮氨酸进行了定量分析研究,确立了L-异亮氨酸定量测定条件和计算方法。采用“HPLC-UV法”、“HPLC-OPA法”以及高速氨基酸分析仪进行了L-异亮氨酸含量的测定对比,OPA法测定结果的准确度比UV法更高。应用HPLC法测定L-异亮氨酸是一种比较方便而且较为准确的方法。以黄色短杆菌T6-13为出发菌株,经硫酸二乙酯(DES)和紫外线诱变处理,摇管初筛、摇瓶复筛、遗传标记验证、单菌落分离和连续传代,筛选出一株L-异亮氨酸生产菌株AJS406(Met-+α-ABr)。该菌株在未经优化的条件下可积累L-异亮氨酸9.2g/L。确定了亲株AJS406和F9114原生质体形成和再生及进行原生质体融合的最佳条件,采用原生质体融合技术最终筛选出一株带有目的遗传标记的L-异亮氨酸高产菌IA412...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津科技大学
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L-异亮氨酸产生菌的融合育种选育及其关键酶与发酵条件的研究

本论文根据代谢控制发酵理论,研究了L-异亮氨酸生产菌的选育及其发酵条件。主要研究内容和结果如下:(1)建立了发酵液中L-异亮氨酸定量测定的偏最小二乘分光光度法,并对该方法的应用条件进行了研究。以高速氨基酸分析仪测定结果为参比,用偏最小二乘分光光度法测定结果的准确度比纸层析—色斑洗脱比色法高,且方法较简便。(2)确定了亲株ISW330和AS1.495原生质体形成和再生及进行原生质体融合的最佳条件,采用原生质体融合技术最终筛选出一株带有目的遗传标记的L-异亮氨酸高产菌SW0370(Leu~-+Met~-+AEC~r+á-AB~r)。该菌株在未优化条件下可产L-异亮氨酸14.27g/L。经验证,菌株SW0370的遗传性能稳定。(3)初步研究了菌株SW0370发酵过程中关键酶苏氨酸脱氨酶的提取、测定方法与调节性质。在得到的酶活测定与提取方法的最佳条件的基础上,分别考察了不同L-异亮氨酸浓度和不同氨基酸对酶活力的影响。(4)研究了菌株SW...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

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L-异亮氨酸产生菌的选育及其发酵条件的研究

本文以代谢控制发酵理论为指导,重点研究了L-异亮氨酸产生菌的选育及其发酵条件。主要研究内容和结果如下:(1)建立了发酵液中L-异亮氨酸定量测定的“纸层析-色斑洗脱比色法”,并对该方法的应用条件进行了研究。(2)以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)TL411为出发菌株,经硫酸二乙酯(DES)和紫外线(UV)诱变处理,定向选育出一株L-异亮氨酸生产菌株WYJ1(Met~-+AEC~r+α-AB~r),在未经优化条件下摇瓶分批发酵96h,可产L-异亮氨酸8.2g/L。(3)研究了菌株WYJ1的摇瓶分批发酵条件。应用均匀设计和MATLAB软件获得该菌株优化的种子培养基和发酵培养基配比,并对种子培养条件和发酵培养条件进行了研究。在优化条件下,菌株WYJ1摇瓶分批发酵96 h,可产L-异亮氨酸16.7g/L。(4)利用5L罐分批发酵数据,对发酵过程进行了代谢流分析。基于物流平衡原理,初步建立了发酵过程的代谢流分析方法;...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
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L-异亮氨酸产生菌的选育及发酵条件优化

本论文应用代谢控制发酵原理,以前人在L-异亮氨酸产生菌选育中未选用过的栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)ATCC17965为出发菌株,进行L-异亮氨酸产生菌的选育,继而研究了摇瓶条件下的最适培养基组成和发酵条件,并运用代谢流量分析的原理研究了出发菌株及其突变株在L-异亮氨酸形成阶段的代谢流量分布,对它们的流量分布图进行了比较和分析。主要内容和结果如下:1.研究了测定发酵液中L-异亮氨酸的方法——纸层析—分光光度法,确立了此方法适宜的测定条件,此方法的平均回收率为99.25%,适合发酵液中L-异亮氨酸的准确测定。2.以栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)ATCC17965为出发菌株,经化学和物理诱变处理,用磺胺胍(SG)、L-亮氨酸甲酯(Leu-ME)、α-氨基-β-羟基戊酸(AHV)、乙硫氨酸(Eth)等结构类似物及琥珀酸为唯一碳源平板定向筛选,成功选育出一株...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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L-异亮氨酸产生菌的选育及发酵条件研究

L-异亮氨酸在医学领域、食品加工业、光学领域中具有广泛的应用空间,具有非常重要的经济价值。本论文在代谢控制发酵理论指导下,以黄色短杆菌Brevibacteriumflavum i10505(Met-+Ethr+α-ABr)为出发菌株进行了菌种选育,并对L-异亮氨酸高产菌的发酵条件进行了优化。主要研究内容和结果如下:(1)通过紫外诱变处理,筛选出含有丙氨酸、蛋氨酸或赖氨酸的双重氨基酸营养缺陷型或三重氨基酸营养缺陷型菌株,并进一步对其进行α-氨基丁酸(α-AB)抗性筛选、S-2-氨基乙基-L-半胱氨酸(AEC)结构类似物抗性诱变,来解除L-异亮氨酸代谢途径中的反馈抑制和反馈阻遏,在此基础上筛选出一株含抗性多标记的高产菌株B.flavumKM011(Met-+LysL+Ethr+α-ABr+AECr),在未经优化条件下摇瓶分批发酵48h,可积累L-异亮氨酸8.67g/L。(2)利用单因素优化和正交设计优化培养基,考察甜菜碱、VB5、V...  (本文共79页) 本文目录 | 阅读全文>>