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人β-神经生长因子基因转染体外培养猫角膜内皮细胞促进其分裂再生的实验研究

目的:通过Effectene~(TM)脂质体介导将自行构建的人β-神经生长因子真核表达载体(pcDNA4-β-NGF)转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中,证明人β-NGF基因不仅能在体外培养的猫角膜内皮细胞中得以表达并具有促进该细胞分裂再生的作用,为人角膜内皮病的基因治疗提供依据。方法:一、人β-NGF基因由单一外显子编码,利用PCR方法从正常人血基因组DNA中克隆出该基因,并连接于pcDNA4B真核表达载体上,构建重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF,转入JM109大肠杆菌感受态细胞,筛选、酶切鉴定及计算机自动序列分析证明该基因为目的基因。二、组织块培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层,通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫组织化学染色及透射电镜观察鉴定细胞的种类及纯度。三、通过Effectene~(TM)脂质体介导将自行构建的人β-神经生长因子真核表达载体(pcDNA4-β-NGF)转染  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

人血小板源性生长因子基因B转染体外培养猫角膜内皮细胞的生物学效应

目的:通过EffecteneTM脂质体介导将自行构建的人血小板源性生长因子基因B真核表达载体(pcDNA_4-PDGF-B)转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中,证明人PDGF-B基因不仅能在体外培养的猫角膜内皮细胞中得以表达并具有促进该细胞分裂再生的作用,为人角膜内皮病的基因治疗提供依据。方法:一、采用逆转录聚合酶链反应从健康产妇胎盘mRNA中扩增出PDGF-B基因片段,并连接于pcDNA_4B真核表达载体上,构建重组真核表达载体pcDNA_4-PDGF-B, 转入JM109大肠杆菌感受态细胞,筛选、酶切鉴定及计算机自动序列分析证明该基因为目的基因。二、组织块培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层,通过细胞形态学观察、神经特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫组织化学染色及扫描和透射电镜观察鉴定细胞的种类及纯度。三、通过EffecteneTM脂质体介导将自行构建的人血小板源性生长因子基因B真核表达载体(pcDNA4-...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

山羊角膜上皮细胞与角膜内皮细胞分离培养研究

各种角膜疾病和外科损伤都会导致角膜细胞受损,当损伤超过其生理代偿时,就会发生角膜病变,严重时会导致角膜盲。目前角膜移植是治疗此类角膜疾病比较成熟的方法,但受到了供体角膜缺乏、术后并发症、角膜供体老龄化等条件的限制。将自体或异体角膜细胞体外培养构建组织工程化人工角膜移植,既可解决临床应用供体短缺问题,又可为角膜体外药理或生理研究提供大量材料。本研究通过体外分离培养山羊角膜上皮细胞和角膜内皮细胞,并研究其体外生长特性和接种羊膜载体培养情况,为组织工程人工角膜的构建奠定理论基础。1.山羊角膜上皮细胞的体外分离培养与鉴定通过比较组织块和酶消化法培养山羊原代角膜缘上皮细胞,发现酶消化法更适合原代角膜缘上皮细胞的分离纯化培养。获取的山羊角膜缘上皮细胞形态为多角形,具有较强的增殖能力,体外培养能传20多代,细胞冻存后仍具有细胞冻存前的形态和活力。经免疫组化和RT-PCR检测,培养的角膜缘上皮细胞表达K3/K12、p63、Cx43、ABCG2和...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

《柳州医学》2009年03期
柳州医学

角膜内皮细胞功能及其临床意义

角膜内皮细胞对角膜透明性有着至关重要的作用,角膜的高度透明是实现视觉器官正常生理功能的重要条件之一,而解剖形态完整和生理功能正常的角膜内皮层则是保持角膜透明的关键。故临床眼科医生在任何内眼手术中,均要十分注意对内皮细胞的保护。同时术前也要极为注意对其活性的检测研究。近年来由于各种新技术在眼科领域的应用和生物技术的发展,对角膜内皮细胞活性的检测研究也逐渐深入。1角膜内皮细胞的功能作为角膜最内层的内皮层是由单层内皮细胞所组成,它前附着于后弹力层,后与前房水接触,内皮从角膜中央到周边可被分为四个区:Ⅰ区:占角膜中央8.6~9mm的大片区域;Ⅱ区:宽度仅150~500um;Ⅲ区:宽度50~150um;Ⅳ区包括最周边部分,与角膜的小梁网毗邻,宽50~100um[1]。角膜内皮细胞是通过其主动的代谢性液泵作用,把房水与角膜基质隔开的生理屏障,其泵-漏系统可防止过多的水分和溶质通过,使角膜基质保持相对脱水的状态,维持其透明性。这一作用的实施,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《临床眼科杂志》2017年01期
临床眼科杂志

非接触式角膜内皮细胞计与A型超声角膜测厚仪中央角膜厚度测量值的比较

中央角膜厚度(central corneal thickness,CCT)测量在眼科临床工作中日益受到重视。为避免准分子激光屈光矫治术后继发性圆锥角膜的发生,角膜厚度测量已成为术前一项常规而且必须的检查项目。非接触式角膜内皮细胞计是一种常用的角膜厚度测量仪器,本研究中我们对准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)手术患者术前及术后同时使用非接触式角膜内皮细胞计和超声角膜测厚仪测量其中央角膜厚度,并进行比较研究。资料与方法一、一般资料20例(40只眼)拟行双眼LASIK手术的近视眼患者参加此研究,平均年龄(26.6±5.2)岁(范围:18~60岁),术前平均等效球镜(球镜+1/2柱镜)(-6.20±1.65)D(球镜范围:-3.75 D~-10.00D)。入选标准:无眼部疾病史(如圆锥角膜、青光眼、眼底病变等);两周内未曾佩戴角膜接触镜;无既往眼部手术史。二、手术方法常规术前手术准备,0.5%盐酸丙美卡因(Alcaine;Alcon...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国冶金工业医学杂志》2015年01期
中国冶金工业医学杂志

原发性急性闭角型青光眼患者角膜内皮细胞的变化

原发性急性闭角型青光眼患者的眼压高、前房浅、房水闪辉,这些都可以损害角膜内皮细胞。若角膜内皮细胞损伤过多,则失去代偿功能而造成角膜水肿和大泡性角膜病变,严重者需手术治疗。因此,原发性急性闭角型青光眼对角膜内皮细胞的影响至观重要。本文通过分析原发性急性闭角型青光眼患者角膜内皮细胞情况和特殊形态改变,指导疾病的诊断和治疗。1资料与方法1.1临床资料所有患者均为2013年8月至2014年3月来我院就诊的门诊及住院患者,原发性急性闭角型青光眼55例(55只眼),其中男19例(19只眼),女36例(36只眼),年龄54~83岁。所有患者均排除了角膜疾病、角膜接触镜配戴史、手术史和糖尿病等眼部疾病和全身疾病史。根据中华医学会眼科学会青光眼组1978年制定的诊断标准进行青光眼的诊断。对照组为健康成人53例(53只眼),其中男24例(24只眼),女29例(29只眼),年龄55~80岁。对照组与原发性急性闭角型青光眼组(急闭组)的年龄和性别经统计...  (本文共2页) 阅读全文>>