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人β-神经生长因子基因转染体外培养猫角膜内皮细胞促进其分裂再生的实验研究

目的:通过Effectene~(TM)脂质体介导将自行构建的人β-神经生长因子真核表达载体(pcDNA4-β-NGF)转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中,证明人β-NGF基因不仅能在体外培养的猫角膜内皮细胞中得以表达并具有促进该细胞分裂再生的作用,为人角膜内皮病的基因治疗提供依据。方法:一、人β-NGF基因由单一外显子编码,利用PCR方法从正常人血基因组DNA中克隆出该基因,并连接于pcDNA4B真核表达载体上,构建重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF,转入JM109大肠杆菌感受态细胞,筛选、酶切鉴定及计算机自动序列分析证明该基因为目的基因。二、组织块培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层,通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫组织化学染色及透射电镜观察鉴定细胞的种类及纯度。三、通过Effectene~(TM)脂质体介导将自行构建的人β-神经生长因子真核表达载体(pcDNA4-β-NGF)转染  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

人血小板源性生长因子基因B转染体外培养猫角膜内皮细胞的生物学效应

目的:通过EffecteneTM脂质体介导将自行构建的人血小板源性生长因子基因B真核表达载体(pcDNA_4-PDGF-B)转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中,证明人PDGF-B基因不仅能在体外培养的猫角膜内皮细胞中得以表达并具有促进该细胞分裂再生的作用,为人角膜内皮病的基因治疗提供依据。方法:一、采用逆转录聚合酶链反应从健康产妇胎盘mRNA中扩增出PDGF-B基因片段,并连接于pcDNA_4B真核表达载体上,构建重组真核表达载体pcDNA_4-PDGF-B, 转入JM109大肠杆菌感受态细胞,筛选、酶切鉴定及计算机自动序列分析证明该基因为目的基因。二、组织块培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层,通过细胞形态学观察、神经特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体免疫组织化学染色及扫描和透射电镜观察鉴定细胞的种类及纯度。三、通过EffecteneTM脂质体介导将自行构建的人血小板源性生长因子基因B真核表达载体(pcDNA4-...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

《武汉生物工程学院学报》2012年03期
武汉生物工程学院学报

哺乳动物卵巢组织体外培养研究进展

雌性哺乳动物卵巢内含有数量庞大的原始卵泡群,其规模在胚胎发育后期或出生前就已确定且不可更新,代表着雌性整个的繁殖潜力。然而随着个体的发育,大部分都由于退化而损失,只有不到0.1%的数量能最终发育至受精阶段进而受精产生后代[lj,对数以万计的卵巢卵泡而言,是一种极大的浪费。随着克隆和转基因技术的发展,对卵母细胞的需求越来越大,光靠回收窦腔卵泡中的卵子以不能满足需求。通过体外培养卵巢组织或卵泡,复苏卵巢中占主导地位的腔前卵泡的生长,可以为辅助生育技术、转基因及其他生物工程技术提供大量的潜在的额外的同种质卵母细胞来源,对于提高高遗传和经济价值的家畜以及在科研上具有重要价值的动物的繁殖潜力,珍稀或濒危动物的保护以及人类生育能力的保存和辅助受孕具有重大意义。影响卵巢组织体外培养效果的因素有很多,本文主要就激素对卵巢卵泡体外培养的影响,及卵巢组织体外培养的应用做一综述。1激素对卵泡发育的影响1.1促性腺激素促性腺激素是卵泡发育过程中的重要调...  (本文共4页) 阅读全文>>

《云南畜牧兽医》1992年04期
云南畜牧兽医

旋毛虫体外培养及冷冻保藏的研究进展

l体外培养 寄生虫传统研究方法,主要是观察寄生虫的形态,生活灵、移行过程以及寄生虫与宿主之间的关系.随着科学技术进步,为了更深刻地了解寄生虫的生态学、发生学、生物化学、免疫学等问题,逐渐发展了体外培养的方法.原虫的体外培养已很普遍,蠕电体外培养亦发展车.快. 11寄生虫体外培养的意义 寄生虫的体外培养是指人工模拟宿主体内环境条件从而使虫体在离体(即离宿主)状态下完成其寄生阶段的发育.应用体外培养方法,可研究维持虫体生存的必要营养条件并进而研究虫体的物质代谢及寄生虫与宿主的关系;可在实验条件下方便在研究寄生虫的形态发生及生长发育的动态,并可与在宿主体内在发育进行比较,有助于了解结构和功能的关系,可制备寄生虫排泄分泌(Es)抗原及组织抗原并进而用于寄生病的免设诊断及免疫预防等研究,是一种简便、快速、有效筛选、研究驱杀药物的方法. 1,2从肌幼虫向成虫的培养 早在1914年,Keilty就用一连续的流动系统培养旋毛虫脱囊幼曳,他以仅含...  (本文共3页) 阅读全文>>

北京协和医学院
北京协和医学院

低能量激光对体外培养干细胞及毛囊生长的促进作用及Wntl0b/β-catenin信号通路的实验研究

研究背景低能量激光(low level laser,LLL)是一系列波长在600-1100nm,能量密度1-10J/cm2,功率密度为3-90mW/cm2的激光。低能量激光疗法(low level laser treatment,LLLT)不仅能够促进组织修复再生,还能够增强体外培养细胞的活性。有研究表明,LLLT对于部分细胞的增殖及迁移起到显著促进作用,是细胞体外扩增的有效手段。但目前研究尚未明确LLLT用于体外细胞扩增的最适参数。此外,LLLT因其促进毛发生长的作用,已在临床已被作为改善秃发症状的辅助治疗手段。然而产生这些生物学效应的机制仍不十分明确,成为限制LLLT应用一个重要因素。本研究旨在探索LLLT促进体外培养细胞扩增的最适参数,并探索其促进毛发生长的作用机制,为LLLT在临床更精准的应用奠定理论基础。研究目的1、探求LLLT对体外培养干细胞,主要是人脂肪干细胞(Adipose derived stem cells,...  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国际生殖健康/计划生育杂志》2010年02期
国际生殖健康/计划生育杂志

窦前卵泡的分离与体外培养

卵泡是哺乳动物卵巢内的基本功能单位,为卵母细胞生长发育及成熟提供微环境。哺乳动物卵巢皮质层内储存着大量的窦前卵泡,包括原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡,这些卵泡体积小,数量众多,适于冷冻保存。但其中只有不到1%能发育成熟并排卵,其余均在发育过程中闭锁退化。随着人类辅助生殖技术的发展,通过体外培养及体外成熟技术获得大量成熟并具有受精能力的卵母细胞已成为可能。这可以帮助因疾病必须切除卵巢,或必须行放、化疗可能损伤卵巢功能的女性患者保存生育能力。由于窦前卵泡是潜在的获得卵母细胞的巨大的来源,而且卵泡的发生和卵母细胞发育是一个多阶段复杂的生理过程,探讨其分离及体外培养技术可做为一种研究工具观察卵子的发生及其体内生长调控机制,不仅可以对人类卵母细胞发育调控有新的认识,对于保存女性生殖能力及濒危物种也有巨大的意义。由于体外模拟体内生长环境进行培养十分困难,因此,目前的研究重点主要在窦前卵泡的培养上。窦前卵泡的分离窦前卵泡的分离、回收是卵母细胞开...  (本文共4页) 阅读全文>>