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人前列腺癌相关新基因PC-1启动子的克隆与分析

摘要PC-1基因是由本室周建光研究员发现并克隆的,该基因在雄激素非依赖性和高恶性程度的前列腺癌细胞中表达上调;在前列腺组织特异性表达;表达受雄激素信号转导途径调控。目前对其在转录水平的表达调控还不清楚,为此开展了PC-1基因启动子的克隆与分析研究。首先用PCR方法从前列腺癌细胞染色体上获得了PC-1基因翻译起始位点上游5-kb的序列,将其克隆在表达载体pGL3-basic上,随后克隆了一系列启动子5’侧翼缺失的表达载体。瞬时转染前列腺癌细胞发现5-kb启动子区的转录活性最高,在雄激素撤除的培养条件下,该启动子比前列腺特异性抗原6-kb启动子的转录活性还高。研究发现5-kb的启动子区表现出了较强的前列腺细胞特异性转录调控的能力,这种特异性调控主要是由PC-1翻译位点上游4kb~5kb的调控区来实现的,4kb~5kb的调控区还体现出了增强子的特征。另外还证明了在PC-1翻译起始位点上游第345-359位15bp的碱基是雄激素受体反应  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

雄激素受体及其亚型在前列腺癌进展中的实验研究

目的:1.建立雄激素非依赖性LNCaP前列腺癌细胞模型;2.研究雄激素受体及其亚型在LNCaP前列腺癌进展中的作用。3.研究雄激素非依赖性LNCaP前列腺癌细胞的凋亡。方法:1.在常规RPMI 1640培养液中,对依赖雄激素生长的父代LNCaP前列腺癌细胞进行连续传代培养,依传代次数的不同,依次建立LNCaP C-33,C-51和C-81三种前列腺癌亚细胞株。然后用双氢睾酮和氟他胺在体内和体外实验中对上述三种LNCaP前列腺癌亚细胞株的生长特性及其雄激素依赖性进行研究,以论证所建立的前列腺癌细胞模型。2.用RT-PCR和Western Blot方法检测三种LNCaP前列腺癌亚细胞株中AR mRNA和AR蛋白的表达水平。3.放免法检测不同LNCaP前列腺癌亚细胞株的PSA分泌。4.Western Blot方法检测DHT对不同LNCaP前列腺癌亚细胞株PSA分泌的影响。5.MTT法检测不同LNCaP前列腺癌亚细胞株的细胞活力。6.D...  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

前列腺癌雄激素非依赖的发生机理及熊果酸治疗作用的实验研究

在欧美国家中,前列腺癌(PCa)的发病率占男性恶性肿瘤的第一位,肿瘤致死的第二位。我国前列腺癌的发病率也呈明显的上升趋势。雄激素阻断是PCa 治疗的最有效方法。但不幸的是,约80%的PCa 在去雄治疗后的18 个月左右发生雄激素非依赖性生长,而失去治疗作用,癌肿继续生长并恶化,病人死于该病。雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的发生成为PCa 治疗中最棘手的问题。AIPC 发生的机制比较复杂,目前多认为雄激素受体(AR)的扩增和突变及甲基化所导致的经典的AR 激活途径的活性增高是其主要原因。尽管一些雄激素抵抗性前列腺癌有AR 表达的增高,但研究显示:PCa 在雄激素非依赖发生前后AR 基因扩增率很低,不足于单独解释AIPC 的进展,而突变的细胞也只占所有肿瘤细胞的一小部分,无法解释肿瘤整体上的雄激素非依赖状态。而在原发肿瘤中有AR 的扩增,其对雄激素撤除仍然有反应,在激素非依赖性肿瘤,针对AR 的治疗也没能逆转其雄激素非依赖性。可...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

G蛋白偶联受体介导雄激素对前列腺癌细胞快速作用的非基因组机制

目的:体外研究G蛋白偶联受体介导的雄激素(双氢睾酮,DHT)对人前列腺癌PC3细胞内Ca~(2+)水平及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性产生的快速非基因组效应,并探讨其机制。方法:应用钙荧光指示剂Fura-2/AM检测细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]i);Western blot方法检测MAPK家族成员(ERK1/2、JNK和p38)的活化水平;MTT assay检测DHT快速作用对细胞增殖的影响。结果:DHT可以在一定范围内浓度依赖性地诱导PC3细胞[Ca~(2+)]i快速升高,而且也能快速诱导ERK1/2、JNK的磷酸化,但是对p38的磷酸化却表现为快速的抑制作用;当细胞外无Ca~(2+)或使用L-型钙离子通道阻断剂预处理细胞,DHT不能诱导这种快速效应;用AR拮抗剂醋酸环丙氯地孕酮预处理细胞,对该快速效应无影响;用蛋白合成抑制剂放线菌酮预处理细胞,DHT仍能诱导[Ca~(2+)]i快速升高;用睾酮-牛血清白蛋白复合物...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

雄激素、雌激素与IL-6和IL-8促卵巢癌细胞增殖分子机制的研究以及Raf激酶抑制蛋白与卵巢癌转移关系的初步探讨

目的:卵巢癌(Ovarian Cancer,OVCA)中90%以上起源于卵巢表面上皮,流行病学调查、实验研究及临床资料分析表明OVCA的发生、发展与雌激素和雄激素关系密切。近年来研究表明,白细胞介素-6(Interleukine-6,IL-6)和白细胞介素-8(Interleukine-8,IL-8)在OVCA中高表达,提示这两种细胞因子可能在OVCA的发生、发展中起着十分重要的作用。目前关于雄激素、雌激素及IL-6、IL-8两种细胞因子在OVCA中作用的机制尚不十分清楚。本课题探讨了这两种性激素与这两种细胞因子对上皮性OVCA细胞增殖作用的影响,并对雄激素、雌激素与IL-6、IL-8两种细胞因子间可能存在的相互调节作用及相关分子机制进行了研究。另外,OVCA转移是影响其预后的主要原因,但有关其侵袭和转移的分子机制尚不明确。近期研究发现Raf激酶抑制蛋白(Rafkinase inhibitor protein,RKIP)在前列腺...  (本文共144页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
中国人民解放军军医进修学院

雄激素、雄激素受体水平和AR基因多态性与老年男性高血压及PAOD的相关研究

高血压是最常见的心血管病。近50年来我国高血压患病率明显增高,尤其是60岁以上老年人群。周围动脉硬化闭塞病与心脑血管疾病有共同的危险因素,是全身血管系统性动脉硬化的标志。男性性别是独立的心血管危险因子,这提示雄激素与心血管病之间可能存在一定的关系。一些临床研究已初步显示:冠心病、高血压和肥胖者有着较低的雄激素水平。体内雄激素是通过雄激素受体发挥生理作用。雄激素受体的活性则通过雄激素受体基因调控。雄激素受体(CAG)n多态性与雄激素水平的关系并不十分明确。我们采用流式细胞技术研究淋巴细胞雄激素受体,并建立了该项技术的检测方法。通过雄激素-雄激素受体-雄激素受体基因三个环节来阐明雄激素的生物学效应与高血压的关系。为防治高血压和动脉硬化提供新策略。第一部分雄激素、雄激素受体水平与老年男性高血压及PAOD的相关研究目的:研究雄激素、雄激素受体与老年男性高血压和周围动脉硬化闭塞病的关系。方法:随机抽取北京万寿路地区323例60-92岁的男...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>