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Her-2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒的构建和诱导的免疫效应

恶性肿瘤已成为危害人类健康的常见病,占据人类死亡的第一或第二位原因,在全世界范围内每年大约有700万人死于恶性肿瘤。近年来,恶性肿瘤的发病率不仅逐渐上升,且发病年龄也趋于年轻化。世界卫生组织预测,恶性肿瘤将是21世纪人类的“头号杀手”。其治疗一直是人们关注的热点。恶性肿瘤治疗除传统的手术、放射、化学治疗外,免疫治疗在现阶段占据越来越重要的位置。抗肿瘤疫苗,特别是近年掀起的基因工程载体疫苗向人们展示了诱人的前景。作为肿瘤疫苗的相关抗原,Her2/neu在许多上皮组织起源的恶性肿瘤中过量表达,如:乳腺癌,卵巢癌,胃癌和肺癌等,显示了作为疫苗目标抗原的潜在价值。5型腺病毒载体具有安全,高效等特点,在目前的病毒载体疫苗中占主要地位。为此我们以研制载体疫苗为目的,构建表达Her2/neu基因膜外第一受体区(Her2-ECDs),全长膜外区(Her2-ECD)和膜外跨膜区(Her2-TM)蛋白的重组腺病毒(rAd)载体,观察并比较rAdHe  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

靶向表达IκBαM重组腺病毒的构建及抑瘤作用的体外实验研究

核转录因子 κB (nuclear factor-κB, NF-κB)是一种极其重要的转录激活因子,广泛参与炎症、免疫、细胞增殖和细胞凋亡等多种病理生理过程。大量的研究证明:NF-κB 信号传导途径的激活抑制了 TNF-α等化学试剂诱导的凋亡,在肿瘤细胞抗凋亡机制中扮演了一个重要角色。 本研究室前期研究中构建了表达 IκBαM 的复制缺陷型腺病毒(AdIκBαM)表达系统,并证实重组腺病毒 IκBαM 联合肿瘤坏死因子TNF-α 在体内外能显著抑制 HCC 细胞株 HepG2的生长并诱导该肿瘤细胞凋亡,有望成为一种十分有效的肝癌基因治疗方法。 但腺病毒介导的基因转移缺乏靶向性,从而阻碍了腺病毒载体介导的抗肿瘤基因治疗的临床应用。近年来,利用肿瘤特异性启动子调控目的基因在肿瘤细胞中特异性表达逐渐成为腺病毒介导的靶向性基因治疗研究的热点。 针对肝癌的靶向性基因治疗,最常使用的是 AFP 启动子。但存在转录活性低、适用范围窄等缺陷。近...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
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重组腺病毒HIF-1α基因治疗脑缺血的实验研究

目的:应用最新的腺病毒载体构建系统 AdEasy System 构建含 HIF-1α基因的重组腺病毒质粒 pAdHIF-1α及其对照重组腺病毒空载体质粒pAd,为进一步应用其进行脑缺血的基因治疗奠定基础。 方法:应用 AdEasy System 腺病毒载体构建系统,将 PCR 扩增所得的 HIF-1α基因片段与穿梭质粒 pAdTrack-CMV 进行连接,获得重组穿梭质粒 pAdTrack-CMV-HIF-1α,酶切鉴定,将目的基因 HIF-1α 进行序列测定,硷裂解法提质粒,酶切使其线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 用电穿孔法共同转化到 BJ5183 菌。将重组腺病毒质粒以酶切、PCR 及脉冲场电泳方法进行鉴定。 结果:重组腺病毒质粒经 PacⅠ酶切后可见一条 4.5kb(3.0kb)和一条约 30kb 的条带,表明同源重组成功。将 pAdHIF-1α PCR 产物进行测序检查,证明所扩增条带为 HIF-1α。 结论...  (本文共110页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

鸡源鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因重组腺病毒活载体疫苗研究

本研究分离了鸡源鹦鹉热衣原体,建立了鸡衣原体病PCR诊断方法。利用E1和E3缺失的人腺病毒5型载体,首次在国内外成功构建了含有鸡源鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因的重组腺病毒。并用重组腺病毒对本动物鸡进行了免疫试验和安全试验。(1) 从疑似患鹦鹉热衣原体病鸡分离到衣原体,经涂片观察、接种鸡胚,碘染色试验、磺胺嘧啶钠试验、电子显微镜观察,确定为鹦鹉热衣原体,命名为hnq株,用鸡胚法测定其毒力为1.8×10~(-7)/0.2ELD_(50),CpL株的毒力为5.6×10~(10)/0.2 ELD_(50)。选择CpL株为研究对象。建立了鸡源鹦鹉热衣原体PCR诊断方法,并对其特异性、敏感性和灵敏度进行了验证。(2) 对鸡源鹦鹉热衣原体CpL株MOMP基因进行了克隆和测序,并与禽源鹦鹉热衣原体其他菌株的MOMP基因进行了序列比较。结果表明,与禽源衣原体鸭(GD)株的MOMP氨基酸序列同源性为89.7%;与火鸡(CT1)株MOMP...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

重组腺病毒介导人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因对恶性肿瘤生物治疗的临床前研究

恶性肿瘤因其高发病率、高死亡率近年来一直是严重危害人类健康的重要疾病之一。目前临床上常用的治疗方法(手术、化疗和放疗)都存在一定的局限性,因此需要探索新的更加有效的治疗方法。本室构建的携带人野生型p53基因和肿瘤免疫相关基因GM-CSF、B7-1的重组腺病毒(命名为重组腺病毒BB-102抗癌剂),感染喉癌、肝癌、肺癌、乳腺癌和慢性髓性白血病原代细胞后,能明显抑制癌细胞的增殖并诱导其凋亡,而且体外能诱导自体外周血淋巴细胞生成肿瘤杀伤性的CTL。本实验对该重组腺病毒进行了临床前研究,完成了以下工作:1.重组腺病毒的制备、质量标准和质量控制协助中国药品生物制品质量检定所拟订了《重组腺病毒BB-102制造和检定规程》。在293细胞中分别扩增BB-102以及携带绿色荧光蛋白基因的对照重组腺病毒Ad-GFP;以氯化铯密度梯度超速离心法纯化病毒;以蚀斑分析法测定病毒滴度:按照《中国生物制品规程》之通则和《重组腺病毒BB-102  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

基于重组腺病毒的狂犬病毒基因工程疫苗研究

狂犬病是由狂犬病毒感染引起的以侵犯中枢神经系统为特征的致死性人畜共患传染病。用狂犬病毒疫苗进行预防注射是预防和控制狂犬病发生的有效途径。狂犬病毒疫苗由早期的神经组织疫苗逐步发展,目前广泛采用原代细胞培养疫苗和传代细胞精制纯化疫苗,这些疫苗具有较好的免疫效果,但受生产成本昂贵,运输和贮存必须依赖于低温”冷链”,给药方式等因素限制,不便应用于狂犬病毒的储存宿主即犬、狐狸等各种野生或家养动物的免疫接种。有效免疫接种狂犬病毒的传染源,切断其传播途径有赖于发展新一代的基因工程重组疫苗。重组痘病毒载体和重组腺病毒载体具有宿主范围广,对外界环境有一定的抵抗能力,可口服诱导免疫等共同优点,可被作为基因工程狂犬病毒疫苗的优良载体,而与重组痘病毒狂犬病毒疫苗相比,重组复制缺陷型腺病毒狂犬病毒疫苗更为安全和有效,并能成功地克服在新生动物中可能存在的来自于母体的免疫干扰。研究和开发基于复制缺陷型腺病毒的重组狂犬病毒疫苗将有望有效预防,控制甚至根除我国狂...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>