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脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces Fragilis)LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖

低聚半乳糖是由2-10个半乳糖基和葡萄糖基通过糖苷键连接的碳水化合物。商业化的低聚半乳糖以乳糖为底物,利用微生物β-D-半乳糖苷酶催化半乳糖基转移反应来生产。低聚半乳糖属于非消化性低聚糖,具有低甜度、低热能、低致龋齿性、选择性的促进人体肠道内有益菌增殖等生理学性质,在食品领域的应用潜力很大。本论文以提高β-D-半乳糖苷酶催化合成的低聚半乳糖的产率为目标,对产β-D-半乳糖苷酶的菌株筛选、发酵条件、β-D-半乳糖苷酶的诱导合成、酶的分离纯化及性质、酶法合成低聚半乳糖的过程和产物分离等进行了系统的研究,试验结果表明:以脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)为出发菌株,甲基磺酸乙酯(EMS)为诱变剂,5-溴-4-氯-3-吲哚-吡喃半乳糖苷(X-gal)作为筛子从诱变后的860个菌落中选育到一株具有较高转苷活力的β-D-半乳糖苷酶高产菌株,菌株编号为脆壁克鲁维酵母(K. fragilis)LFS-8611。以乳糖为底物,由该菌株产生的  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

《工业微生物》2004年03期
工业微生物

碳源对K.fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶合成的影响

β D 半乳糖苷酶 (EC 3.2 .1.2 3)催化乳糖水解生成葡萄糖和半乳糖 ,还可以催化乳糖水解过程中产生的半乳糖基转移至乳糖等受体上 ,形成低聚半乳糖。很多种类的细菌、酵母菌、霉菌都能产生 β D 半乳糖苷酶。来源于不同种类微生物的 β D 半乳糖苷酶催化乳糖水解和半乳糖基转移反应的活力差异很大[1] 。脆壁克鲁维酵母 (K .fragilis)LFS 86 11产生的 β D 半乳糖苷酶具有较高催化半乳糖基转移反应活力 ,该酶催化合成低聚半乳糖的产率较高。  低聚半乳糖具有甜度低、非致龋齿性、非消化性(具有膳食纤维的生理功能 )、对食品加工热处理稳定和促进肠道双歧杆菌增殖等优异的物理化学和生理学性质[3,4 ] 。因此 ,低聚半乳糖作为一种新型的功能性食品配料 ,在食品领域应用潜力很大。  碳源是菌体细胞组成的原料 ,也是菌体生长发育必需的能源物质。某些碳源是酶的诱导物 ,选择适宜的碳源有利于定向促进某些酶的合成 ,提...  (本文共4页) 阅读全文>>

《福建医学院学报》1987年02期
福建医学院学报

使用半乳糖苷酶交联物建立高灵敏度酶免疫测定技术

目前高灵敏度日一D一半乳糖昔酶荧光定量法和这种高回收率、乳糖昔酶交联物的制备法在本室建立。现将方法简述如下:高活力Fab‘一日一D一半光定量法:以4一甲基伞型酮日一D一半乳糖作为酶底物D酶免疫荧光仪(温州鹿城生化仪器厂)测定。小至101.日一D一半乳糖背酶的微量荧,用NaC。。终止酶反应,E IF一工。5检出,比常规比色法灵敏数千倍。比1 983年殆hikawa等的报告也灵敏两倍。其灵敏的原因在于反应体系从150叮下降至50川最终测定体积从2。5ml,反应物中原含。.1%牛清蛋白减少至0.01%,反应时间延长至24小时,使得测定体系微量化,从而提高了灵敏度。2....  (本文共1页) 阅读全文>>

《环境与健康杂志》1988年03期
环境与健康杂志

应用SOS/Umu测试法监测空气颗粒提取物的致遗传毒性

1982年,QuillardetP等报导了一种 监测环境中“致遗传毒性物质”(Genot。- Xjeants)的新方法,称505染色体试验〔,〕, 1985年,OdaY等采用将PSKlooZ质粒导 入TA1535的重建菌株作同类试验,使测试 效果有进一步改善,改进后的方法称505/ Umu试验〔”〕。这一方法已被广泛应用于环 境污染物生物学监测的实际工作中以峨〕。 本法系一种特异性的“半乳糖普酶诱导 法”(简称Umu试验)。产生半乳糖昔酶的结 构基因LacZ系与UmuC基因的操纵子相融 合存在于PSKlo02质粒中。质粒中UottC基 因在正常情况下被受体菌TA 1 535 LexA基 因所产生的阻遏蛋白(Sopre:sor)所封闭。一、旦菌体DNA受损伤,细胞即产生505反应,组成该反应系统的RecA基因产物即转化为具有活性的蛋白水解酶(Protease),该酶可切除阻遏蛋白,使受封闭的Umu操纵子启动,并带动LacZ基因转录...  (本文共3页) 阅读全文>>

《微生物学通报》1989年02期
微生物学通报

大肠杆菌α-D-半乳糖苷酶的提纯及特性

a一D一半乳糖普酶在甜菜工业上用于去除千扰蔗糖回收的棉子糖,在豆类食品加工中则用于降解引起人肠道不适的寡糖类Lll。大肠杆菌a一D一半乳搪昔酶至少包括由其染色体蜜二塘操纵子(mel)和质粒棉子糖操纵子(raf)编码的两大类型(依次简称类型I和11)[Z]。类型11酶具有不同血清型囚。本文以编码类型"酶的再克隆基因为材料,对该酶的提纯及特性进行了研究。 材料与方法 (一)菌种 质粒pFM100及pRU613分别为野生型质粒pRI8801和pl021的raf再克隆质粒t.月,由Mooi和Sehmitt馈赠。两种杂合质拉编码的a--半乳搪昔酶均系组成型酶。菌株C60o(t五r,leu,tlii,supE 44,lae,tonA21)的pFM100转化子为R。。菌株M:,(mel B.,laeY96,mel一B)的pRU613转化子为 BN 107。 (二)培养 采用含600产g/ml氨卡青霉素的LBT培养基。其每升含胰水解蛋白109,...  (本文共6页) 阅读全文>>

中国农业大学
中国农业大学

米黑根毛霉、巴伦葛兹类芽孢杆菌半乳糖苷酶基因的表达及重组酶性质研究

微生物源的半乳糖苷酶在食品、医药、饲料、和环保等工业中有着非常广阔的应用前景,近年来备受研究者们的关注。本文主要研究了米黑根毛霉和巴伦葛兹类芽孢杆菌半乳糖苷酶基因的克隆、表达及重组酶酶学性质,主要结果如下:成功将米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)中α-半乳糖苷酶基因(RmgalB)克隆、表达至毕赤酵母中。RmgalB属于糖苷水解酶36(GH36)家族,开放阅读框(ORF)为2241 bp,编码746个氨基酸且含有2个内含子。重组αα-半乳糖苷酶(RmgalB)经5L发酵罐高密度发酵后酶活力为1953.9U mL-1,为目前报道最高值。RmgalB为同源四聚体结构,单亚基蛋白分子量为83.1kDa,比酶活为505.1 U mg-1。RmgalB的最适温度及最适pH分别为55℃和5.5,该酶在pH 5.5-9.5范围内及在55℃以下保持稳定。RmgalB能完全水解蜜二糖、棉籽糖和水苏四糖,还能水解豆饼中的棉籽寡糖。酶学...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>