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组织工程化角膜上皮与内皮的构建和移植

角膜作为眼球光学系统的重要组成部分,其上皮的完整性和透明度是良好视力的基本要求,临床上常见各种原因所引起的角膜缘干细胞及角膜上皮的损伤和缺失,使患者视力下降或致盲。上世纪九十年代以来,随着细胞培养技术和组织工程技术的兴起,组织工程化人工角膜、角膜上皮、内皮:基质细胞植片的构建与移植研究也正在兴起。为探索从根本上解决角膜疾患的新方法与途径,本研究用人流产儿、家兔和山羊角膜体外分离角膜缘干细胞、角膜基质细胞和内皮细胞;采用无饲养层细胞培养体系和冻存的角膜缘干细胞构建家兔和山羊角膜上皮组织,并自体移植到角膜缘干细胞完全缺失的动物模型角膜表面,恢复病损角膜上皮;同时,探索来源于自体的表皮干细胞替代角膜缘干细胞用于角膜上皮重建的可行性;利用体外快速扩增获得角膜内皮细胞,以羊膜和角膜基质为载体构建组织工程化角膜内皮组织,为组织工程角膜内皮层移植实验奠定基础。实验研究主要取得以下六个方面成果和进展:1.流产儿角膜细胞经体外分离培养可甩于组织工  (本文共155页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

角膜缘干细胞体外培养体系的建立

近年来,人们对角膜缘干细胞的科学认识使得眼表疾病的治疗取得了突破性进展。除了常用的羊膜移植和角膜缘干细胞移植,生物组织工程学的发展提供了另外一种崭新的可供选择的治疗方式:培养的角膜缘干细胞移植。目前角膜缘干细胞组织工程的研究正在广泛开展,合理的体外培养体系是取得良好结果的最重要的前提。本研究旨在建立完善的人角膜缘干细胞组织工程复合体的体外培养体系,为进一步的临床应用作准备。为此我们首先采用兔对角膜缘干细胞的培养进行了初步摸索,之后建立了人角膜缘成纤维细胞滋养层的制备方法,最后建立了完整的以羊膜为载体的人角膜缘干细胞培养体系,并采用人角膜缘成纤维细胞作为滋养层,以进一步提高生物组织工程复合体在临床应用的安全性。天津医科大学博士研究生学位论文细胞悬液中间质细胞的含量;扫描电镜观察去除上皮的角膜缘基质表面,以确认能充分去除上皮细胞:采用细胞克隆形成试验检测细胞悬液形成克隆的能力。在进行两种方法的比较时,通过免疫组织化学技术观察两种方法...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

冻存山羊角膜缘干细胞构造角膜上皮移植及检测研究

角膜上皮完整性的维持依赖于表浅细胞不断脱落和基底层细胞不断增殖来完成,上皮细胞持续不断的水平向心运动和垂直向上运动源于角膜缘基底层的干细胞增殖和分化。因此,角膜缘干细胞对正常角膜生理功能的稳定起重要作用。许多研究报道体外培养角膜缘干细胞构建上皮植片,可以满足临床移植的需要。但是这些报道中,多采用3T3细胞做饲养层促进上皮细胞的增殖,由于3T3细胞是来自胎鼠的成纤维细胞,其在临床应用有将异种动物疾病传播给人类的危险。另外,目前培养角膜缘干细胞用于重建角膜上皮的研究与临床应用,都是在培养结束后就直接应用于临床,需要患者的身体状况与培养结束后细胞的最佳生长状态相吻合,否则,就会导致整个操作和手术失败。如果能够将培养好的角膜缘干细胞在体外保存一定时间,于不同时间根据患者的身体状况,解冻细胞再继续培养,将极大地方便其临床应用与研究。近年来成体干细胞可塑性的报道不断涌现,几乎所有哺乳动物的成体干细胞都具有横向分化潜能。但是角膜缘干细胞体外诱...  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国际眼科杂志》2018年09期
国际眼科杂志

角膜缘干细胞体外培养的研究进展

0引言角膜的正常结构和功能的维持依赖于角膜缘干细胞的不断增殖、分化和移行,角膜缘干细胞一旦受到损伤,如化学烧伤、热损伤等会引起部分或完全的角膜缘干细胞缺失,角膜上皮的自我更新能力随之下降,从而导致结膜上皮和新生血管向角膜生长、角膜慢性炎症以及纤维组织内生等病理改变[1],临床可表现为角膜上皮的反复缺失、角膜结膜化和血管化等症状,最终导致角膜失去透明性和屈光功能。角膜缘干细胞缺失是导致角膜混浊以及各类角膜移植手术失败的主要原因,临床主要采用角膜缘干细胞移植的方法治疗角膜缘干细胞缺失,近些年研究人员对角膜缘干细胞的体外培养、鉴定、移植技术等方面做了大量研究,其中如何高效体外扩增角膜缘干细胞成为研究的重点与焦点,本文就角膜缘干细胞定位、获取方法以及体外扩增方式等进行综述。1角膜缘干细胞的定位及培养1.1角膜缘干细胞定位角膜缘为透明角膜与不透明巩膜的移行区,宽约1.5~2.0mm,从解剖学上看,其前界位于连接角膜前、后弹力层止端的平面,...  (本文共4页) 阅读全文>>

《现代生物医学进展》2014年29期
现代生物医学进展

《自然》:标记、修复及培养角膜缘干细胞或有新方法

英国《自然》杂志上,美国科学家发表的最新研究指明了一种生物标记物,其能够用来分离进而修复受损眼睛的干细胞,这些干细胞位于角膜和眼白交界处的角膜缘上。与此同时,另一篇发表在《自然》杂志上的论文,描述了一种培养角膜缘干细胞的方法。这些研究结果都将有助于改善角膜疾病的治疗。角膜缘干细胞(LSC)的发现,是近几十年来眼科学最重要的进展之一。在世界范围内,由于发炎、遗传疾病或者烧伤所导致的LSC缺失,是一个主要的失明原因。移植健康组织往往是病患们唯一的治疗选项,可是如果LSC不够多,移植就会失败。而且,尽管LSC已是目前公认的角膜上皮的成体干细胞,其相关理论基础与临床研究也发展迅速,但是医学界对LSC的了解仍显滞后,现有治疗手段也缺少精确定位LSC的方法。美国马塞诸塞州波士顿儿童医院马库斯·弗兰克与娜塔莎·弗兰克和他们的研究团队,日前发现了一种名叫ABCB5的蛋白质,其能够作为标...  (本文共1页) 阅读全文>>

《右江民族医学院学报》2007年06期
右江民族医学院学报

角膜缘干细胞体外培养的研究进展

角膜上皮细胞具有自我更新的能力,眼表的正常结构和功能的维持有赖于角膜缘千细胞的不断分化、增殖、移行来完成。随着眼表疾病研究有突破性进展,角膜缘干细胞在眼表中的重要性越来越受到人们的重视,角膜缘干细胞体外培养的研究也日渐增多。笔者现就角膜缘干细胞的体外培养与临床应用作一综述。1概述角膜缘干细胞是角膜上皮增殖、分化、移行的源泉。角膜缘干细胞具有其他干细胞所具有的特殊的生物学特性,并通过向心性移动和角膜上皮基底细胞的分裂、迁移,来补充角膜表面脱落的上皮细胞,完成上皮细胞的更新这一动态的平衡过程。目前认为角膜缘M笔t栅栏内的网状蜻上皮是角膜上皮干细胞的位!所在。1971年伪vanger等川提出角膜缘M笼t姗栏的概念并观察到此处细胞向角膜中心水平移动。1986年段hermer等[2]利用特异性64KD角蛋白(K3)的手段,正确定位角膜缘上皮干细胞的存在。1987年E加to等[3]通过比较角膜不同部位细胞在体外培养的生长情况,也进一步证实角...  (本文共3页) 阅读全文>>