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组织工程化角膜上皮与内皮的构建和移植

角膜作为眼球光学系统的重要组成部分,其上皮的完整性和透明度是良好视力的基本要求,临床上常见各种原因所引起的角膜缘干细胞及角膜上皮的损伤和缺失,使患者视力下降或致盲。上世纪九十年代以来,随着细胞培养技术和组织工程技术的兴起,组织工程化人工角膜、角膜上皮、内皮:基质细胞植片的构建与移植研究也正在兴起。为探索从根本上解决角膜疾患的新方法与途径,本研究用人流产儿、家兔和山羊角膜体外分离角膜缘干细胞、角膜基质细胞和内皮细胞;采用无饲养层细胞培养体系和冻存的角膜缘干细胞构建家兔和山羊角膜上皮组织,并自体移植到角膜缘干细胞完全缺失的动物模型角膜表面,恢复病损角膜上皮;同时,探索来源于自体的表皮干细胞替代角膜缘干细胞用于角膜上皮重建的可行性;利用体外快速扩增获得角膜内皮细胞,以羊膜和角膜基质为载体构建组织工程化角膜内皮组织,为组织工程角膜内皮层移植实验奠定基础。实验研究主要取得以下六个方面成果和进展:1.流产儿角膜细胞经体外分离培养可甩于组织工  (本文共155页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

以纤维蛋白为基质网架的组织工程角膜上皮的构建及移植实验研究

目前,对角膜缘干细胞缺损的难治性角膜上皮损伤的治疗大多数采用角膜移植术。但是,由于角膜组织来源于异体或自体,异体来源的角膜上皮会与患者角膜缘中的免疫细胞发生免疫排斥反应,导致手术失败;而自体来源的角膜上皮移植会受到数量限制,又造成健眼的损伤。组织工程学技术的发展和研究成果表明,组织工程人工角膜上皮将成为攻克这一难关的希望所在。本研究在以往研究工作的基础上,深入地进行了组织工程角膜上皮的构建与角膜上皮缺损移植修复方面的研究,为人角膜上皮缺损移植修复的治疗奠定了实验室基础。本研究采用细胞生物学和组织工程学技术,成功地分离、培养了角膜缘干细胞和角膜上皮细胞,制备了纤维蛋白细胞外基质网架,这不仅为构建组织工程化角膜上皮提供细胞外基质网架,也为其它人工组织、器官的研究提供了新的支架材料。以纤维蛋白为基质网架,构建了组织工程化角膜上皮,经形态学检测结果显示,所构建的人工角膜上皮与天然角膜上皮极为相似,呈现出动态的增殖、分化过程。在此基础上,...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京医科大学
南京医科大学

体外重建人角膜上皮的实验研究

目的 利用羊膜作为体外培养人角膜上皮的载体,为临床上重建角膜表面提供理想的角膜上皮移植片方法 以脱水保存的羊膜作为载体,通过体外培养人角膜缘上皮细胞,并使其在体外形成角膜上皮组织。结果 培养的角膜上皮组织经组织学、细胞超微结构的观察,证实体外培养的角膜上皮组织与生理状态下的角膜上皮组织相近。结论 利用羊膜作为载体的体外培养的角膜上皮组织片可作为较理想的角膜上皮移植材料。  (本文共42页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国海洋大学
中国海洋大学

组织工程人角膜上皮的体外重建、鉴定及其在新西兰兔角膜上皮移植中的作用研究

人角膜上皮(Human Corneal Epithelium,HCEP)位于角膜最前端,由多层细胞构成,其组织学结构的完整性对于维持角膜的生理功能至关重要。人角膜上皮细胞(Human Corneal Epithelial Cell,HCEPC)是角膜抵御外来致病因子侵害的第一道重要防线,不仅能维持角膜的透明性,还能吸收氧气和营养为角膜供氧/养。HCEP具有自我更新能力,其完整性和更新能力取决于位于角膜缘基底部的角膜缘干细胞(LimbalStem Cell,LSC)的不断增殖与分化。眼球表面的烧伤、灼伤、严重机械创伤、病原体感染、角膜缘部位冷冻治疗、接触镜的长期佩戴以及眼瘢痕性类天疱疮等各种原因均可导致LSC损伤或功能障碍。角膜缘干细胞缺陷症(Limbal Stem Cell Deficiency,LSCD)表现为LSC增殖能力丧失,导致持续性角膜上皮缺损、角膜缘屏障功能下降,致使结膜上皮侵入角膜、新生血管形成,进而影响角膜的光学...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

高糖环境对角膜上皮修复和角膜缘干细胞活性影响的实验研究

目的利用角膜缘干细胞体外模型和Ins2Akita糖尿病小鼠模型,研究高糖环境对角膜缘上皮王细胞活性以及角膜上皮修复的影响。方法1.采用小鼠角膜缘上皮干/祖细胞系(TKE2)作为体外细胞模型,在培养基中添加终浓度为30mM的葡萄糖进行处理,模拟糖尿病角膜病变的高糖微环境,通过相差显微镜观察、MTT、干细胞克隆形成、Annexin V-PI和8-OHdG (DNA单链断裂标记)免疫染色等实验,观察高糖环境对角膜上皮干细胞形态变化、克隆形成能力、细胞增殖、凋亡、DNA稳定性等方面的影响。2.选择同龄成年雄性C57BL/6小鼠(正常对照组)和Ins2Akita小鼠(糖尿病组)各10只,比较2组小鼠在体重、血糖水平的差异;刮除小鼠角膜中央2mm的上皮,观察并比较角膜上皮在损伤后0h、24h、48h、64h、76h、88h、100h、136、172h的修复情况,并通过透射电镜、HE一染色、TUNEL (凋亡)标记染色、8-OHdG对角膜上皮...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

角膜缘干细胞体外培养体系的建立

近年来,人们对角膜缘干细胞的科学认识使得眼表疾病的治疗取得了突破性进展。除了常用的羊膜移植和角膜缘干细胞移植,生物组织工程学的发展提供了另外一种崭新的可供选择的治疗方式:培养的角膜缘干细胞移植。目前角膜缘干细胞组织工程的研究正在广泛开展,合理的体外培养体系是取得良好结果的最重要的前提。本研究旨在建立完善的人角膜缘干细胞组织工程复合体的体外培养体系,为进一步的临床应用作准备。为此我们首先采用兔对角膜缘干细胞的培养进行了初步摸索,之后建立了人角膜缘成纤维细胞滋养层的制备方法,最后建立了完整的以羊膜为载体的人角膜缘干细胞培养体系,并采用人角膜缘成纤维细胞作为滋养层,以进一步提高生物组织工程复合体在临床应用的安全性。天津医科大学博士研究生学位论文细胞悬液中间质细胞的含量;扫描电镜观察去除上皮的角膜缘基质表面,以确认能充分去除上皮细胞:采用细胞克隆形成试验检测细胞悬液形成克隆的能力。在进行两种方法的比较时,通过免疫组织化学技术观察两种方法...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>