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硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡抑制转移及其机制的实验研究

第一部分硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究目的 研究硒酸酯多糖对人骨肉瘤细胞在体内外的抑瘤和诱导凋亡作用及对其细胞周期的调控。方法 分别采用0、30、60、120μg/ml硒酸酯多糖干预人骨肉瘤细胞株(OS-732)1、2、4、6天后MTT法在酶联免疫检测仪测光吸收值,绘制细胞生长曲线,计算细胞抑制率。并与酯多糖抑瘤率比较。形态学观察:荧光染色法,采用丫碇橙(AO)与溴化乙啶(EB)双重染色法染色上述硒酸酯多糖干预后的骨肉瘤细胞,在荧光显微镜下观察早期、晚期凋亡细胞的形态,计算细胞凋亡率。透射电镜下观察作用后早、晚期凋亡细胞。采用碘化丙啶(PI)染色药物作用后的骨肉瘤细胞,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡比例及细胞周期。提取硒酸酯多糖干预后骨肉瘤细胞株DNA,Agarose电泳观察细胞DNAladder形态。2×107人骨肉瘤细胞株接种于3组各7只4周龄裸鼠皮下,次日起腹腔给予生理盐水、低浓度组(4mg/kg/d)、高浓度  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

细菌氧化还原蛋白AZURIN重组子构建、纯化及诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡机制的初步研究

骨肉瘤(Osteosarcoma)是一种好发青少年的恶性骨肿瘤,占恶性骨肿瘤住院病人的35~44%,因其恶性程度高、转移早,疗效差,一直是临床骨科医生研究的难点、焦点和热点。随着新辅助化疗的积极开展、配合积极的手术治疗(如保肢手术的开展),使骨肉瘤的生存质量和预后明显改观,国外五年生存率已达到了80%以上;国内因为肺部及远处转移、局部复发和化疗、放疗的严重毒副作用和并发症,以及耐药问题等而使治疗效果尚不乐观,即使在比较好的骨肿瘤治疗中心,虽已有明显进步,五年生存率也只在60%左右,与国外相比仍有不小的差距。寻求一种经济、安全、行之有效、毒副作用小或者可以减少或降低现有药物剂量的方法用于骨肉瘤的治疗已成为患者、临床医生、生物学家和药物学家们共同的愿望。随着分子生物学技术、免疫技术的迅速发展,人们现在对肿瘤的生物治疗寄予厚望。免疫治疗,基因治疗和微生物纯化产物治疗肿瘤正成为目前和将来研究和应用临床的热点。微生物病原体能引起人类和动物...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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HA表位标记的azurin基因真核表达载体的构建及其转染人骨肉瘤U2OS细胞的实验研究

研究背景骨肉瘤(osteosarcoma)是最常见的原发性骨恶性肿瘤之一,转移发生早,预后差。目前临床上对骨肉瘤的治疗多采用手术、化疗等综合治疗,使得患者的五年生存率较以前显著提高。大剂量化疗带来的严重副反应以及多药耐药等问题使得骨肉瘤的治疗难以完全治愈。最近,使用活致病菌、减毒致病菌或致病菌的纯化产物用于肿瘤治疗是研究热点之一。微生物病原体感染能引起人类和动物体内恶性肿瘤的退变,但活菌因其产生明显的毒性和副作用限制了其在人类肿瘤治疗中的应用。因此,目前倾向于寻找具有抗肿瘤作用的致病菌的纯代谢产物用于癌症治疗。azurin就是近年发现的一种很有前途的抗肿瘤生物蛋白之一。azurin最初是从铜绿假单胞菌分泌的一种参与细胞氧化还原反应中的电子  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中科技大学
华中科技大学

PIN1反义基因对人骨肉瘤的抑制作用

【目的】(1)探讨Pin1蛋白的表达与骨肉瘤组织生物学行为之间的关系;(2)克隆正、反义人PIN1基因(hPIN1)及构建hPIN1基因正、反义真核表达载体;(3)观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。【方法】(1)用免疫组织化学ABC法对42例骨肉瘤组织中Pin1蛋白的表达进行检测;(2)应用RT-PCR技术从人骨肉瘤细胞系MG-63细胞总RNA中成功扩增出0.990kbp包含hPIN1基因编码区的cDNA序列,按正、反方向加上BamHⅠ及HindⅢ双酶切位点后形成正、反义hPIN1基因,然后连入含BamHⅠ及HindⅢ双酶切位点的pIRES2-EGFP表达质粒上,构建正、反义hPIN1基因的重组真核表达质粒phPIN1。经BamHⅠ及HindⅢ双酶切后证实正、反义表达载体构建成功;(3)用不同量(0、20、50、100、200、250μl)的以pIRES2-EGFP质粒为载...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

人骨肉瘤多药耐药细胞模型的建立及蛋白质组学分析

骨肉瘤是最常见的恶性骨肿瘤,儿童和青少年多发,预后极差。目前的治疗主要是以手术、化疗为主的综合治疗。临床上发现骨肉瘤细胞对化疗药物的耐受,特别是交叉耐受是导致化疗失败的主要原因,因此,近年来骨肉瘤多药耐药机制的研究已逐渐成为人们研究的热点。然而针对骨肉瘤多药耐药机制的研究尽管在基因水平上已取得了不少进展,但还不能完全解释多药耐药现象。蛋白质组学是后基因组时代新兴的学科,应用差异蛋白质组学的方法对骨肉瘤多药耐药细胞蛋白质组进行研究有可能为骨肉瘤多药耐药机制提供新的线索。1、人骨肉瘤多药耐药细胞模型的建立及生物学特性分析:以人骨肉瘤细胞MG-63为亲本细胞,小剂量阿霉素经过6个月诱导,成功建立了人骨肉瘤细胞的多药耐药模型,并进行了相关生物学特性分析:(1)多药耐药MG-63/DXR100与其亲本细胞相比,细胞表面突起较多,细胞内大量糖原样空泡及脂滴,粗面内质网更为丰富。(2)MG-63/DXR100仍有较强的增殖能力,但较亲本细胞增...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国医科大学学报》1988年05期
中国医科大学学报

人骨肉瘤的超微结构研究

骨肉瘤亦称成骨肉瘤,多发生于青少年的四肢长骨千翁端,其特点是肿瘤细胞能直接产生肿瘤性骨质,恶性度甚高。本文就6例骨肉瘤病例进行病理学和超微结构的研究,分析瘤细胞和基质的形态特征和各型瘤细胞的组织发生。材料与方法 在手术过程中,切取0.5 X 0.5 x 0.5cm3的癌组织,立即浸饱于2 .5%戊二醛冷藏固定液中,进行前固定(4“C)2小时。在低温条件下将癌组织一分为二,一块经福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜检查。另一块再修整成小于lmm”的数小块,经缓冲液漂洗后,用1%四氧化锹后固定(4。C)2小时,逐级脱水,E环nslZ包埋,聚合,超薄切片,铀铅双重染色,电镜观察。 观察结果病理学观察 6例骨肉瘤中,骨母细胞样骨肉瘤4例,纤维母细胞样骨肉瘤2例。瘤细胞呈显著的多形性及异型性,大小不等。骨母细胞样瘤细胞及核多呈卵圆形。纤维母细胞样瘤细胞及核多呈梭形或多边形。所有的瘤细胞胞核均大而深染,核膜粗厚,染色质颗粒粗大,常见...  (本文共4页) 阅读全文>>