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胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的实验研究

胰腺癌恶性程度极高,预后极差,消耗着巨大的社会卫生资源。目前对胰腺癌的传统治疗手段效果仍不尽如人意。探索新的有效治疗手段,提高胰腺癌的预后,是目前急需攻克的重要课题。MUC1是胰腺癌肿瘤相关抗原,可在胰腺癌表面异常表达,VNTR是MUC1最具免疫原性的结构,可诱发宿主产生MUC1特异、MHCⅠ限制的CTL,特异性地杀伤肿瘤细胞。本文以VNTR为靶抗原构建胰腺癌核酸疫苗,探索疫苗所诱生的免疫应答,以进一步研究疫苗对胰腺癌的治疗作用。实验共分为三部分:第一部分 胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的构建和体外转染实验研究目的:以人胰腺癌肿瘤相关抗原MUC1的最具免疫原性的序列片段VNTR为靶抗原,将其编码基因克隆于真核表达载体pcDNA3.1/Myc-his(+) A质粒中,构建胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗。疫苗构建后进行体外转染试验,了解VNTR基因在哺乳动物细胞中的表达。材料和方法:首先对VNTR编码基因进行了重组设计,氨基端  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

MUC1-VNTR核酸疫苗抗胰腺癌的体内外实验研究

胰腺癌是各种恶性肿瘤中恶性程度极高的肿瘤之一,其病因至今不完全明确。目前胰腺癌的治疗仍以手术为主,但是手术只能切除肉眼可见的病灶,对转移和微小的病灶无法去除,而这些转移和微小病灶正是造成胰腺癌复发和患者死亡的主要因素。因此寻找对胰腺癌有效治疗手段,是目前国际上的研究热点之一。本文在前期研究的基础上,进一步研究MUC1-VNTR核酸疫苗抗胰腺癌的体内外效应。实验分为两个部分:第一部分MUC1-VNTR核酸疫苗抗胰腺癌的体内实验研究第一节小鼠胰腺癌细胞系panc02-MUC1构建研究目的:构建表达MUC1的小鼠胰腺癌细胞系panc02-MUC1。材料和方法:小鼠胰腺癌细胞系panc02由美国MD Anderson Cancer center赠送,表达全长MUC1的质粒pcDNA3-MUC1由美国匹兹堡大学Dr.Finn赠送。体外以Lipofectamine2000脂质体转染pcDNA3-MUC1质粒到小鼠胰腺癌细胞系panc02中,...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华实验外科杂志》2005年09期
中华实验外科杂志

胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗的构建和体外转染

MUC1是胰腺癌肿瘤相关抗原,可在胰腺癌表面异常表达[1,2],以MUC1为靶抗原的疫苗,可诱发宿主产生MUC1特异、MHCⅠ限制的CTL,特异性地杀伤肿瘤细胞。VNTR是MUC1最具免疫原性的结构[36]。我们以此为基础探讨胰腺癌核酸疫苗的构建,以进一步研究对胰腺癌的治疗作用。材料与方法1.材料:质粒构建过程中的限制性内切酶EcoRI图2pcDNA3.1VNTR/Myc his(+)A重组质粒测序图讨论VNTR是MUC1多肽骨架上保守的连续重复序列,为20肽,含有B细胞表位和T细胞表位,是MUC1最具免疫原性的结构单位。每个MUC1含有20~125个VNTR,是MUC1疫苗发挥作用的基本功能单位[35]。但是目前研究的MUC1疫苗大多属于多肽疫苗和DC疫苗。而肿瘤核酸疫苗可在宿主细胞内持续表达内源性抗原,通过MHCⅠ类抗原加工途径,诱生抗原特异的CD8+CTL,以MUC1最具免疫原性的序列片段的编码基因构建核酸疫苗,可能会获得...  (本文共3页) 阅读全文>>

昆明医学院
昆明医学院

多发性骨髓瘤MUC1-VNTR核酸疫苗的实验研究

【目的】观察MUC1 VNTR核酸疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答,并研究MUC1 VNTR核酸疫苗能否抑制荷载多发性骨髓瘤小鼠肿瘤细胞的生长,保护荷瘤小鼠,以探讨MUC1 VNTR核酸疫苗的特异性抗肿瘤作用及临床应用前景。【方法】质粒pcDNA3.1-MUC1由前期实验中构建,体外以Lipofectamine2000脂质体转染peDNA3.1-MUC1质粒到小鼠多发性骨髓瘤细胞系653中,转染细胞再经G418压力筛选单克隆细胞株653-MUC1。BALB/c正常小鼠,随机分2组:分别为MUC1组(pcDNA3.1-2VNTR免疫组)、Neo组(pcDNA3.1免疫组)。各组小鼠第0周经脾脏注射100μg/μl质粒。脾脏免疫后,第5周以同一质粒经右腿胫前肌再次免疫小鼠。脾脏免疫后第1,2,4,6,8周自小鼠眼眶(内眦静脉)采血,ELISA动态检测血清中抗VNTR特异性抗体的水平。第2次免疫后4周,取脾细胞悬液,LDH...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华肝胆外科杂志》2006年07期
中华肝胆外科杂志

GM-CSF增强胰腺癌MUC1-VNTR核酸疫苗免疫效果的研究

抗原特异性免疫应答的诱生在很大程度上取决于机体对该抗原分子的处理和递呈的效率。任何促进疫苗DNA的摄取、翻译和抗原的有效加工和提呈的分子疫苗设计和免疫策略都可能上调疫苗的免疫效果〔‘,2〕。本文以粒细胞巨噬细胞集落刺激因子中华肝胆外科杂志2006年7月第12卷第7期Chln J Hepatoblliary Surg.Jul 2006.vol.12,No.7(ranuloeyte一maerophage elony stimulating faetor,GM一CSF)作为免疫佐剂,研究其对自行构建的胰腺癌豁液蛋白核芯肚连续重复序列(variable numbersof tandem repeats of mueinl,MUCI一VNTR)核酸疫苗免疫效果的增强作用。材料与方法 1.材料:rmGM一CSF、MUCI单克隆抗体VU3C6、羊抗鼠二抗购自华美公司。PcDNA3.1一VN-TR/Myc一his(+)A质粒我们早先已自行构建,...  (本文共4页) 阅读全文>>

《外科理论与实践》2008年03期
外科理论与实践

MUC1-VNTR基因修饰树突细胞对胰腺癌细胞株体外杀伤效应的研究

胰腺癌预后很差,探索新的治疗手段十分必要。我们已构建黏液蛋白核芯肽-连续重复序列(MUC1-VNTR)基因核酸疫苗,初步实验证实该核酸疫苗具有一定的免疫原性,免疫小鼠后可诱发MUC1特异的免疫应答[1]。本研究主要通过模拟体外杀伤试验,探讨MUC1-VNTR基因转染的人外周血来源的树突细胞(DC)体外诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)对人胰腺癌细胞的特异性杀伤作用。材料与方法一、材料IL-4、GM-CSF及TNF-α购于R&D公司;抗CD3、CD4、CD86、CD209及HLADR荧光抗体购于Chemicon公司;IFN-γ、Gramzyme B Elispot试剂盒于BD公司;Cytotox96Non-Radiactive Cytotoxityssay试剂盒购于Promega公司;Lipofectamine2000于Invitrigen公司;VNTR单克隆抗体VU3C6购Chemicon公司;VNTR多肽GVTSAPDTR-APG...  (本文共4页) 阅读全文>>