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苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白对猪蛔虫作用效果的研究

猪蛔虫是广泛分布于世界各地的大型寄生线虫,繁殖力强,对养猪业危害极大;猪蛔虫也感染人并引起人的疾病,世界卫生组织及一部分国家已将猪蛔虫病纳入人类公共卫生范畴。目前治疗猪蛔虫病的药物较多,如苯咪唑类药物、阿维菌素、噻嘧啶等,虽然其药物作用较好,但其毒副作用大、易残留,对动物和人体有害,在动物生产实际中均属于限制使用的药物;目前尚未见到商用猪蛔虫疫苗。无毒无害无限制使用的抗猪蛔虫药物不仅是畜牧业生产的实际需要,也具有广阔的市场前景。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴胞晶体是广泛使用的微生物杀虫剂,与化学农药相比较,由于其对脊椎动物无毒性而选择性地作用于害虫、对环境无污染且能通过转基因技术应用于农作物而持久地发挥植物保护作用,这些毒素已被应用于有机农业。近些年来的研究证实,其对动物寄生线虫也有强效作用。寻找对猪蛔虫敏感的Bt菌株并将其应用于动物临床实践是本研究的目的。有关Bt对猪蛔虫的作用,国内外尚  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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苏云金杆菌晶体蛋白对猪蛔虫的作用及猪蛔虫重组As37蛋白的免疫保护研究

猪蛔虫病是仔猪常见的多发性寄生虫病,可导致仔猪的腹泻、消瘦、贫血,严重的导致仔猪死亡,严重危害养猪业。目前猪蛔虫病的防治以咪唑类药物驱虫为主,这些药物在治疗猪蛔虫的同时对动物机体均有不同程度的副作用,且不同程度的残留,危害人类健康、污染环境,所以需要寻找防治猪蛔虫病的一种新药。自1972年发现苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对植物寄生线虫具有杀虫活性以来,随后发现Bt伴胞晶体毒素对蛇形毛圆线虫、捻转血矛线虫、日本血吸虫等动物寄生虫的毒性。本研究旨在寻找高毒力的Bt菌株对猪蛔虫进行有效治疗。另外,关于猪蛔虫的免疫研究近年来取得了一定的进展,国外先后报道了猪蛔虫重组抗原的免疫活性;国内在猪蛔虫的免疫上还是空白,尚未见到商用猪蛔虫疫苗。为了更好地防治猪蛔虫,本研究克隆了猪蛔虫rAs37基因,构建原核表达载体进行高效表达,并对表达蛋白的免疫活性进行了分析,为开发猪蛔虫亚单位疫苗打下基础。主要研究工作和...  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达与应用

本文围绕绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达及应用,从以下几个方面进行了研究,取得结果如下:1.绿色荧光蛋白基因gfp在苏云金芽胞杆菌中表达的初探将携带蜡状芽胞杆菌特异启动子的gfpmut3α基因克隆到穿梭载体pHT304后,电转化至苏云金芽胞杆菌BMB171,CryB,IPS78-11,4Q7,HD-80-21中。通过荧光显微镜和Bio-assay Reader对含重组质粒pGFP-304的5个受体菌分别进行荧光检测及定量分析。结果表明,gfpmut3α基因仅在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,CryB,IPS78-11,4Q7中表达并可检测得到菌体发光,并建立了一套适合于苏云金芽胞杆菌的gfp标记与检测方法。2.利用绿色荧光蛋白基因gfp研究芽胞杆菌的启动子活性绿色荧光蛋白基因gfp分别标记苏云金芽胞杆菌的cry3A启动子P_(cry3A),BtⅠ-BtⅡ启动子P_(BtⅠ-BtⅡ)和来自蜡状芽胞杆菌特异启动子P_...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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苏云金芽胞杆菌抗病杀虫和广谱工程菌的构建

本论文用cry3Aa启动子驱动表达的aiiA基因和vip83基因,通过穿梭载体电转化苏云金芽胞杆菌高毒力细胞工程菌株YBT-833-2-1和高毒力野生菌株YBT-1520,构建了一株抗植物软腐病且具杀虫活性的工程菌和一株广谱工程菌。研究了芽胞杆菌CTC菌株伴胞晶体的形态发生,观察到CTC菌株的S-层结构,证实CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体。主要结果如下:1.苏云金芽胞杆菌抗病杀虫工程菌的构建自身诱导物AHLs分子是病源菌数量感知系统中必不可少的成分,苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白可以降解这类信号分子,从而抑制病原菌的致病性。本研究将转录不依赖芽胞形成的苏云金芽胞杆菌cry3Aa基因的启动子替换基因aiiA自身的启动子,构建了基因pro3A-aiiA。基因pro3A-aiiA插入穿梭载体并电转化对鳞翅目害虫高毒力的细胞工程菌株YBT-833-2-1,得到工程菌BMB821A。工程菌BMB821A对自身诱导物AHLs分子的降解...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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苏云金芽胞杆菌AHL内酯酶功能及其抗魔芋软腐病研究

本文主要研究了苏云金芽胞杆菌AHL内酯酶的抗病功能和其本身在苏云金芽胞杆菌中的调控功能。主要研究结果如下:1 苏云金芽胞杆菌中AHL内酯酶的抗病活性检测通过对苏云金芽胞杆菌不同菌株的抗病活性进行检测,发现各菌株之间对大白菜软腐病菌SCG1的致病性抑制活性存在较大差异。从抗病活性较高菌株H_(38)和H_(42)中克隆aiiA基因并在大肠杆菌中表达,表达的AHL内酯酶也能较强抑制大白菜软腐病菌SCG1的致病作用。另外,对这种蛋白的潜在防治对象进行调查时发现植物病原细菌中除了黄单胞杆菌中AHL信号较弱外,其余菌株均有较强的AHL信号存在;在革兰氏阳性细菌和真菌中没有检测到AHL信号分子。2 抗病苏云金芽胞杆菌工程菌的田间应用利用抗病工程菌株BMB686和BMB3439于2003年、2004年及2005年连续3年对魔芋新区与老区进行灌根防治试验,同时以化学农药作为对照。结果表明:抗病工程菌株在老区的相对防效可达32—40%,在新区的相...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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苏云金芽胞杆菌γ-氨基丁酸代谢旁路相关基因簇的结构与功能研究

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)因其杀虫效果好、安全、高效等优点而成为农业生物防治上应用最为广泛的杀虫微生物。Bt与其它芽胞杆菌相比,一个显著特点就是在形成芽胞的同时,还能产生由杀虫蛋白组成的伴胞晶体。有关Bt伴胞晶体形成机制方面的研究主要是集中在杀虫晶体蛋白基因的表达调控上,而从代谢调控的角度研究晶体蛋白形成的分子机制目前尚未见报道。本论文围绕苏云金芽胞杆菌中与γ-氨基丁酸代谢旁路相关基因簇的结构和功能进行了一系列的研究,主要内容包括:本研究从国内分离得到的苏云金芽胞杆菌G03菌株中克隆了gabT和gabD基因,并分别在大肠杆菌中进行了表达和纯化。酶活测定结果表明,GabT和GabD蛋白分别呈现出γ-氨基丁酸转氨酶和琥珀酸半醛脱氢酶的活性。氨基酸序列同源性比对分析发现,这两个蛋白质在蜡样芽胞杆菌群(B. cereus group)中具有较高的相似性,而与枯草芽胞杆菌的相似性较低,分别为5...  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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苏云金芽胞杆菌G03的芽胞形成相关基因对cry基因表达的影响

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)因其杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的杀虫微生物。Bt与其它芽胞杆菌相比,一个显著特点就是不仅能够形成芽胞,同时还能产生由杀虫蛋白组成的晶体。在模式芽胞杆菌枯草杆菌中有关芽胞形成的相关基因研究较深入,而Bt晶体形成机制方面的研究主要是集中在杀虫晶体蛋白基因的表达调控,有关晶体形成与芽胞形成相关基因关系的研究报道极少。本研究利用苏云金芽胞杆菌全基因组序列,初步研究了芽胞形成相关基因与杀虫蛋白基因表达、调控的相互关系。利用携带Mini-Tn10转座子的pIC333构建了B.thuringiensis G03的转座子突变体库,获得了50,000株具有壮观霉素抗性的突变体。筛选获得一株不能产生芽胞和晶体的突变株,命名为G03(spoⅢAE)∷Mini-Tn10。分析Mini-Tn10转座子两端的侧翼序列确定了插入位点位于spoⅢAE基因的前端,并造成了...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>