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血管紧张素Ⅱ1型受体短发夹环RNA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的血管平滑肌细胞(VSMC)是血管壁的主要组成部分。已证实,VSMC的异常增殖是动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄等的主要病理基础,在血管内膜增生及血管重塑中起重要作用。因而抑制VSMC过度增殖,对预防和治疗术后再狭窄有重要意义。1998年2月Fire和Mello首次在《Nature》杂志上发表了把双链RNA(dsRNA)注射入一种线虫(Caenorhabditis elegans)内,结果dsRNA诱导了基因靶向专一性的转录后基因沉默(PTGS),他们将这种现象称为RNA干扰(RNAi)。RNAi能高效特异的阻断基因的表达,其机制正在逐步阐明,RNAi不但是基因功能研究的一种有力工具,还为基因治疗提供了新的治疗手段。近几年来国际上RNAi的研究取得了很大进展,已在小鼠和人等哺乳动物的体外培养细胞中利用RNAi技术成功阻断了特异基因的表达,这为人类治疗某种基因过度表达或某种突变基因表达引起的疾病提供了一种新方法。肾素—血管紧张素  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

RNA干扰沉寂survivin表达及其对肝癌细胞凋亡和相关信号传导通路的影响

细胞凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis,IAP)家族是一类分布广泛、结构相关的抗凋亡蛋白,存在于病毒、酵母和哺乳动物细胞中,具有高度保守性。近期发现的survivin蛋白属于IAP家族成员,同样具有抑制细胞凋亡的特性,但它区别于其它IAP的特征是仅在肿瘤细胞中表达,而在正常成人组织中不表达;而且其表达与肿瘤的恶性程度及病人的预后密切相关。乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)是乙肝病毒X蛋白的结合蛋白,研究表明它与survivin关系密切,是survivin的协同作用分子,在survivin抑制细胞凋亡的过程中具有重要作用。RNA干扰(RNAi)技术是最近广泛用于抑制基因表达的新技术,主要用于基因功能和基因治疗学等方面的研究。本研究应用RNAi技术,研究在肝癌细胞株HepG2中转染针对survivin和HBXIP的siRNA后,survivin与HBXIP mRNA转录水平和survivin蛋白表达的变化;...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
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SARS冠状病毒N蛋白的细胞定位及其RNA干扰研究

目的: 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与 SARS 冠状病毒不同长度核衣壳蛋白区段融合表达的 pEGFP-C1 重组载体,对 293 细胞进行瞬时转染,显微镜下观察核衣壳蛋白不同区段在细胞内的定位;构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与 SARS 冠状病毒(SARS-CoV)各结构蛋白的融合表达载体以及各结构基因的短发夹状 RNA(shRNA)表达载体,将两种重组载体共转染 293 细胞后观察 shRNA 对 SARS 冠状病毒结构蛋白表达的影响。 方法: 首先用两种蛋白分析软件 Prosite 和 PredictNLS server (prediction and analysis of nuclear localization signals , Columbia University Bioinformatics Center)分析 SARS 冠状病毒核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N 蛋白)序列,...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

RNA干扰抑制细胞色素P450 2E1基因表达及降低诱导剂肝细胞毒性的研究

肝脏中的微粒体乙醇氧化系统(microsomal ethanol oxidizing system,MEOS)主要是作用于乙醇的代谢,其中最重要的部分是乙醇可诱导的细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP 2E1),CYP 2E1在乙醇和其他异源性物质导致肝毒性的发生中起着关键作用。CYP 2E1的活性可以被许多内源性物质所诱导,如皮质类固醇、酮体和游离脂肪酸等。也可以受饥饿、糖尿病、肥胖、高脂血症、酒精性和非酒精性脂肪性肝病等多种病理生理状态所影响。CYP2E1基因表达的调节是复杂的,涉及到转录、转录后或转录后的事件。一些研究显示少量的乙醇诱导增加CYP2E1蛋白的水平和活性,而酗酒则可导致CYP2E1 mRNA水平的增高。当CYP2E1基因过度表达时,肝细胞内发生了氧应激反应,产生活性氧基团(reactive oxygen species,ROS)从而导致了脂质过氧化反应,最终致使肝细胞破坏(...  (本文共192页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

RNA干扰表达载体抑制宫颈癌HPV16-E6基因表达的研究

目的:探讨RNA干扰表达载体(small interference RNA expression vector)对宫颈癌细胞中HPV16-E6基因的抑制作用,通过体外实验和雌性裸鼠体内实验了解我们构建的载体能否特异性的沉寂宫颈癌细胞中的HPV16-E6基因及其时效性。方法:1.利用计算机辅助设计软件,设计合成含有针对HPV16-E6基因特定序列的56nt寡核苷酸片段,并将其定向克隆入真核表达载体,得到重组质粒E6-1、E6-2、E6-3。2.脂质体法转染宫颈癌caski和siha细胞株,经G418筛选获得阳性克隆株。应用荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR)技术及流式细胞仪(flow cytomety)检测转染前后及不同时间点HPV16-E6mRNA的变化、HPV16-E6蛋白表达及细胞凋亡的情况。3.通过细胞生长曲线及克隆形成试验了解转染前后细胞生物学行为的变化。4.裸鼠皮下接种肿瘤细胞成...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

RNA干扰逆转肿瘤多药耐药的实验研究

肿瘤细胞对抗癌药物产生抗药性是化疗失败的一个主要原因。多药耐药性(multidrug resistance MDR)是肿瘤细胞引起抗药性的最主要的原因,MDR基因编码的产物p-糖蛋白(permaeability-glycopritein,p-gp),是一类特殊的跨膜蛋白质,它可以将已进入细胞内的化疗药物泵出,使肿瘤细胞内药物浓度降低。传统的膜转运蛋白调节剂环胞霉素A、钙通道阻滞剂如异搏定等,由于严重的毒副反应而限制了其临床应用。探讨通过特异性封闭MDR-1基因,抑制MDR-1mRNA的表达,使p-gp合成减少,达到逆转MDR的目的,是MDR-1治疗研究的热点。目前MDR基因治疗的策略主要有:反义脱氧寡核苷酸(antisense ologodeoxyribonucleotides ASODN)、核酶技术、反义RNA技术。RNAi(RNA interference)技术诞生以来,作为基因沉默的一种新技术,不仅用于基因功能分析,而且作...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>