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膜生物反应器游离细胞催化体系生产丙烯酰胺的研究

丙烯酰胺是一种应用广泛的基础化工原料,随着其市场的不断拓展,对丙烯酰胺的需求不断增长。在丙烯酰胺微生物转化的工业生产中,主要应用传统的固定化细胞批式反应工艺,存在着许多缺点,限制了工业化生产的进一步发展。本论文主要致力于研究和发展一种新的采用游离细胞膜生物反应的工艺及相应的多种过程,最终的目的是实现工业化应用。首先,针对现有的生产菌种,在进一步研究发酵过程规律的基础上,提出了调节pH值,补加葡萄糖和诱导剂的菌体优化培养方案。使发酵液腈水合酶的活力提高到6000U/mL以上,大大高于现有工业生产中的酶活。同时自主开发了的新诱导剂和诱导方案,使腈水合酶酶活进一步提高到7800U/mL以上,酶比活达到390 U/mg(DC)左右。对游离酶动力学行为进行了研究,在提出的双稳态假设的基础上,推导出了描述游离酶催化反应动力学和酶失活动力学的数学模型。同时提出了用微囊化固定化酶的概念来模拟游离细胞腈水合酶的设想,通过关联得到了游离细胞催化反应  (本文共293页) 本文目录 | 阅读全文>>

《电子显微学报》1988年01期
电子显微学报

游离细胞的扫描电镜标本制备

一、制样过程 1.取材、固定、脱水: 应用等温、等渗、低浓度的方法进行预固定。将少量l%戊二醛固定液(0 .IM磷酸缓冲液配制,PH7 .2一7 .4)放37℃孵卵箱中预热,15分钟后倒入培养细胞的培养瓶中(培养液与固定液之比为1:1)〔“」。轻轻摇动培养瓶使培养液与固定液相棍之后,再放入37℃孵卵箱中,对细胞进行巧分钟的预固定。接着低速离心6一7分钟(1000/分),用乳头吸管吸掉3/4上清液,再用乳头吸管往离心管轻轻注入1%戊二醛固定液,达至原来液面高度,业轻轻摇动使细胞分散均匀,固定5分钟。然后,标本按下列步聚进行处理:缓冲液清洗~l%O,04固定(0 .IM碳酸缓冲液配制),2%单宁酸浸渍(双蒸水配制,加8%戊二醛固定液),缓冲液清洗、l%O,0;处理~缓冲液清洗价上升酒精系列脱水(100%需进行三次),醋酸异戊醋替代(进行三次)。细胞经上述每一步骤时,处理5分钟之后,再进行离心。 2.装筐、C02临界点干燥: 将定量滤...  (本文共4页) 阅读全文>>

《电子显微学报》1988年03期
电子显微学报

游离细胞扫描电镜样品制备方法探讨

国外有人曾对游离细胞扫描电镜样品制备技术作过一些研究报告〔”〔“〕,但仍存在不少问题。譬如,如何收集细胞悬液,才不至使细胞变形;如何滴制样品使细胞单层平铺以及直接涂片标本在一系列制片处理过程中细胞不至脱落等。目前国内仅在极少的文章中对这一问题略有涉及〔31刁〕。据此,本文结合我们日常工作,对上述问题进行一些探讨。 材料:采自人体、动物血液、脑脊液、培养细胞及腹腔等脱落细胞。 方法:先将血球计数盖玻片,平均裁为1 .2 x 1 .0。大小,并去掉一角做为标记。然后用70%酒精浸泡洗净。将l%Formvar氯仿溶液滴在已做好标记的载片上30秒后,用滤纸将多余溶液吸干,再置于阴c烤箱内半小时后即可使用。将细胞悬液以1000转/分离心10分钟,去掉部分上清液后,将细胞团块打散‘然后滴在已做膜的载片上静置10一15分钟,用滤纸将表面残存的细胞悬液吸掉,经2 .5%戍二醛固定l小时,0 .ZM磷酸缓冲液冲洗3次,1%O,04后固定1小时,然...  (本文共1页) 阅读全文>>

《微生物学报》1989年06期
微生物学报

纱布固定丛粒藻细胞产烃的研究

微生物合成烃类的研究始于本世纪3。一40年代,主要目的在于阐明微生物在石油形成和有机物富集过程中的作用。随着气相色谱技术的发展,使微量烃类的定性和定量分析较为简易可行,从而促进了查明微生物细胞烃类组份作为其分类特征的研究的发展。现已查明,在藻类(绿藻、篮绿藻、红藻、褐藻和硅藻)、光合细菌和非光合细菌、真菌和酵母菌中均有许多种具有合成微量烃类的能力〔1],而以淡水生的丛粒藻‘(BbrauoiiK往tzig,又译葡萄藻)〔2一习和海水生的盐生杜氏藻(D“彻“e-Ila;alina)〔‘,的产烃量高。 群生的绿藻B.bra“耐i是广泛分布于内陆水域的世界性浮游藻类,已在国外和我国北部湾沿岸、渤海湾沿岸等地的第三纪石油有机物沉积中发现了这种藻类的化石卜9]。该藻含石油烃类高达巧一75沁(细胞干重)〔4·5],故又称为“油藻”。有报告指出,在有石油沉积的地方,几乎所有的有机质都是由B.b,。“ii造成为tl0j。由于该藻有可能提供用作燃料...  (本文共6页) 阅读全文>>

《广东解剖学通报》1989年02期
广东解剖学通报

扫描电镜组织样品制作方法探讨

在制备扫描电镜样品的过程中,常遇到组织、细胞容易脱落和成像不良问题。对如何避免游离细胞在制备过程中脱落和变形的问题,我们已经作了初步的探讨’,关于组织样品制备方法,有关杂志和专著中已有所涉及,而且作了一些研究2一日,但如何使组织在标本台上附着牢固,又不产生充放电而影响成像,还尚未得到解决。因此,我们结合日常实际工作,对上述问题进行了探讨。 材料和方法 一、材料:①采自人体组织,膜、肝、肾、牙齿等,动物如大、狗、兔的心、肝、肾、胃、小肠、管以及豚鼠的内耳等。 ②普通双面胶带(上海产)、单宁酸及常用扫描样品制作试剂。如胃粘小鼠、骨、气分析纯二、方法: (一)单宁酸—胶带法:根据研究需要进行常规取材后,经2.5%戊二醛固定1小时,O.ZM磷酸缓冲液冲洗三次,每次10分钟,1%050‘后固定1小时,双蒸水冲洗30分钟,2%单宁酸二次各15分钟,逐级酒精脱水(30%、50%、70%、90%、100%)各15分钟,醋酸异戊醋15分钟或过夜,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《草业科学》1989年06期
草业科学

黄花苜蓿游离细胞培养的初步研究

黄花首稽(又称南首楷)是豆科一、二年生重要牧草,兼作绿肥和蔬菜〔”,具有较高的应用价值。国内外文献中有关其相近种紫花首精的组织培养报道较多〔6〕,但对黄花首糟的研究甚少。 本文报道我们从愈伤组织得到游离单细胞井再生小细胞团的研究结果。这一技术的建立可用于细胞水平的诱变和筛选,为黄花首猎的遗传育种打一「一定基础。 1材料与方法 无菌实生苗培养黄花首楷种子经常规灭菌后,接种到无任何激素的MS固体培养基中。培养室温度26士2护每天光照10一12小时,光强为1500lx。取7一10天无菌苗的下胚轴及子”f,作为诱导愈伤组织材料。 F胚轴和子叶愈伤组织诱导除去无菌苗茎尖和胚根,取o.scm的下胚轴切段和子叶块,接种于Ms培养基中。其中添加3%蔗糖·0.6%.琼脂·2,4一Dllllg/LBAo.Zmg八。经过一个多月的继代培养后,即可用作细胞悬浮培养的材料。 细胞悬浮培养所用培养基同愈伤组织诱导培养基,只是去掉琼脂。将3.5克的愈伤组织接...  (本文共4页) 阅读全文>>