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67kDa层粘连蛋白受体反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞侵袭转移的实验研究

目的 采用细胞培养的技术体外培养四种卵巢癌细胞株,观察其生长特点、镜下形态及分裂增殖能力差别。并分别收集四种卵巢癌细胞采用免疫细胞化学和RT-PCR的方法检测各株细胞中67kDa层粘连蛋白受体(67kDa LN-R)的表达情况,确定67kDa LN-R表达阳性的细胞株,为进一步研究其在卵巢癌侵袭转移机制中的作用奠定理论基础。方法 复苏冻存卵巢癌细胞株HRA、SKOV3、3AO、OVCAR3,分别培养于加入10%新生牛血清、1×10~5 IU/L青霉素、100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养液中,在37℃、5%二氧化碳培养箱中培养并传代至对数生长期。根据四种细胞分裂增殖情况绘制生长曲线,并利用Giemsa染色观察比较四种细胞形态差别。将四种细胞分别制成细胞飞片,采用免疫细胞化学的方法检测67kDa LN-R蛋白表达情况,分别收取10~6个卵巢癌细胞,运用RT-PCR半定量的方法检测各株细胞mRNA水平67kDa LN-R的  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
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MDM2-p53反馈环对卵巢癌细胞药敏性的影响及机制

[目的]:卵巢癌是恶性度最高的妇科肿瘤之一,其病死率居妇科肿瘤之首,严重威胁着妇女的健康和生命安全,其治疗以手术和化疗为主,但晚期卵巢癌五年生存率仍低于30%,导致卵巢癌化疗失败的主要原因是卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药性。顺铂耐药与否,患者的平均生存时间和复发率有显著差别。提高卵巢癌的化疗敏感性,降低化疗耐药尤其是对最常用的化疗药物顺铂的耐药性是改善临床预后的关键,因此,从基因水平寻求新型有效的治疗方案是当今肿瘤研究的热点。对卵巢癌的耐药正在研究中,其机制非常复杂,许多因素可在不同的细胞水平参与耐药的发生,许多改变可在高度耐药的卵巢癌细胞中同时出现。MDM2(murine double minute 2)最早发现于鼠3T3成纤维细胞系,它能导致此细胞系的自发转变。后来在一系列人类肿瘤组织中发现其表达,人类MDM2定位于12q13-14,其表达的调节相当复杂,并且有不同的mRNA剪切形式。目前至少已发现7种不同的mdm2mRNA和...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
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树突状细胞影响CIK细胞体内外特异性杀伤卵巢癌细胞的研究

第一部分目的:1、脐带血CD34~+干细胞及单核细胞来源DC的数量、免疫表型及功能比较;2、负载卵巢癌细胞系总RNA抗原DC对CIK细胞在体外特异性杀伤的影响。方法:1、利用免疫磁珠法纯化脐带血CD34~+干细胞,贴壁法纯化脐带血单核细胞;2、分别在干细胞培养体系内加入SCF、FL、GM-CSF、IL-4及TNF-α,单核细胞培养体系内加入GM-CSF、IL-4及TNF-α以诱导成熟DC;3、计算干细胞组扩增DC的数量;4、利用流式细胞仪检测DC的免疫表型,观察两组来源不同DC的特异标志、表面黏附分子及HLA分子的表达有无差异,以混合淋巴细胞反应检测两组来源不同DC在功能上有无差异;5、Trizol提取卵巢癌细胞系SKOV3及HO8910的总RNA作为肿瘤抗原,转染脐带血CD34~+干细胞来源的DC;6、在脐带血单个核细胞培养体系内加入γ-INF、IL-1β、OKT-3及IL-2,诱导CIK细胞,计算扩增并利用流式细胞仪检测免疫...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
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Survivin在卵巢癌中的表达及其反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡的实验研究

凋亡即细胞的程序性死亡,其调节机制的紊乱将导致肿瘤的发生。Survivin是新近发现的一种凋亡抑制基因,其表达的蛋白是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族的新成员。与其它IAP家族成员不同的是,Survivin具有独特的结构,只有一个杆状病毒IAP重复序列(baculovirus IAP repeat,BIR),而无羧基末端的环指结构。其表达于多种常见肿瘤细胞中,而不表达或低表达于正常成人组织。Survivin通过直接抑制Caspase-3、Caspase-7,或干扰Caspase-9的活性,从而阻断线粒体途径和死亡受体途径两条主要凋亡途径的最后通路;还可通过有丝分裂纺锤体的微管调节细胞周期的G_2/M期。在Survivin表达阳性的肿瘤中,其平均凋亡指数(apoptosis index,AI)显著低于Survivin表达阴性的肿瘤,因而认为Survivin具有抑制凋亡和促进细...  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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人腹膜间皮细胞的原代培养与鉴定卵巢癌细胞腹膜侵袭与转移机制的研究

目的 为建立肿瘤细胞向腹膜转移的体外侵袭模型,建立改良的人腹膜间皮细胞消化培养法。方法 用0.1%胰酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化人大网膜组织,经去除红细胞后培养。在培养过程中以倒置显微镜观察细胞形态变化;HE染色观察细胞形态,并计算细胞纯度;扫描电子显微镜(SEM)观察细胞超微结构;免疫组织化学法鉴定细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察含不同成分的培养液对间皮细胞生长的促进作用。结果 分离培养的细胞为多角形,汇合时呈铺路石样排列;培养细胞的纯度达96%以上;SEM下见细胞表面大量的微绒毛;免疫组化显示,细胞角蛋白、波形蛋白抗原阳性,白细胞CD_(45)、第Ⅷ因子相关抗原阴性;所有被鉴定特征均符合间皮细胞的特点。氢化可的松(0.4%)、胰岛素(10μg/ml)对间皮细胞的生长有明显的促进作用。结论 胰酶+EDTA消化法是一种简单、高效、重复性高的分离腹膜间皮细胞的方法。RPMI—1640、20%小牛血清、0.4%氢化...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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高强度聚焦超声及声动力学效应对卵巢癌细胞的体外效应

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,死亡率高居妇科恶性肿瘤之首。虽然以手术和化疗、放疗为主的传统治疗方法在不断地改进,同时免疫治疗和基因治疗的临床试验研究也已经开始,但是效果并不理想。因而,众多的学者仍在致力于寻找新的治疗方法。作为现代医学的重要组成部分,超声医学尤其超声诊断在临床中一直发挥着重要的作用,但超声治疗的发展却相对较为缓慢。在近几十年来,由于超声仪器的改进,超声治疗开始活跃起来,主要表现在超声外科、超声热疗、冲击波和超声体外碎石等,近几年来又出现了高强度聚焦超声、声动力学治疗、超声促进基因转导等几个新的发展方向,其中高强度聚焦超声治疗已经在临床上用于多种肿瘤的治疗。但是在卵巢癌中,关于高强度聚焦超声治疗的研究较少,而关于声动力学治疗的研究目前尚未见到。本实验选用卵巢癌细胞株进行了部分相关体外实验研究,分为三部分,论文一探讨了高强度聚焦超声对卵巢癌细胞的体外抑制效应,并在此基础上探讨了吐温80的超声增敏作用和超声治疗...  (本文共128页) 本文目录 | 阅读全文>>