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基因工程菌株里氏木霉合成t-PA发酵条件及r-PA基因在甲醇毕赤酵母中表达的研究

论文首先以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)为研究对象,对其生物合成组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)的发酵条件和发酵动力学进行了研究,并对里氏木霉重组t-PA的分离纯化及其性质进行了探索;然后进行了t-PA突变体的研究,获得了t-PA突变体r-PA基因,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中进行了表达。采用稀释平板分离法对基因工程菌株Trichoderma reesei进行了分离纯化,对平板上生长良好的单菌落进行摇瓶液态发酵,以t-PA的酶活力为指标,挑选高产菌株,选得的Trichoderma reesei(8)号菌株t-PA产量最高,且遗传稳定性良好。对Trichoderma reesei(8)生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的代谢调节机制进行了研究。在基础发酵条件下,L-山梨糖、D-蔗糖、可溶性纤维素、C  (本文共149页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品与发酵工业》2005年07期
食品与发酵工业

里氏木霉以稻草和麸皮为基质产木聚糖酶的研究

木聚糖酶可以水解植物材料中的半纤维素。木聚糖酶作为一种工业酶制剂,已在北美和欧洲大量使用,近几年来,木聚糖酶在食品、纺织、饲料、能源、制浆造纸工业中显示了广阔的应用前景[1]。应用木聚糖酶在纸浆生物漂白中,可减少环境污染;而作为饲料添加剂,可消除“抗营养因子”戊聚糖,提高配合饲料的营养价值;此外,可生产出具有高附加值的功能性食品甜味剂———低聚木糖。自然界中,能合成木聚糖酶的微生物有细菌、放线菌和真菌。里氏木霉Rut C-30是野生的里氏木霉QM6a的诱变株,是一种腐生丝状真菌。国内已对里氏木霉Rut C-30液态发酵产木聚糖酶进行过研究[2~4]。本文对里氏木霉Rut C-30固态发酵产木聚糖酶的条件进行了研究,并对其粗酶液的特性进行了分析。1材料1·1菌种里氏木霉(Trichoderma reesei)Rut C30,CICC13052(56765),由中国工业微生物菌种保藏中心(CICC)提供。1·2底物木聚糖:Sigma...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物技术通报》1989年07期
生物技术通报

酶和发酵工程

892141在小麦茎杆上用reesei木霉QM9414生产户葡糖昔酶:位置及其一些动态特性〔英〕/A。ebal,C.…了Aeta Bioteehnol一198名,8(4)一341一348〔译自DBA,1988,7(24),88一12163〕 采用磨碎、筛滤小麦茎杆进行批量生产研究了从里氏木霉(Triohoderma reese£)QM9414生产户葡糖普酶的条件。颗粒大小影响细胞内和外菌丝体的提取物中酶的产生,但对结合在胞壁上的酶却不重要。里氏木珊以小麦茎杆为唯一碳源生长12天。到第7天胞壁的酶活性及蛋白质含量就表现出典型图谱,随后的48小时中两种特性迅速增加。细胞中和外菌丝体提取物中产葡糖普酶生物合成的Goneticin抑制相类似。用4一硝基苯一产D一毗喃葡糖普作为底物进行了动力学研究,研究表明存在两种蛋白质,它们催化同一反应,但具有不同的表观Km值。另外该酶可能具有多个催化中心。游离细胞和细胞提取物户葡糖节酶的动力学参数分别...  (本文共22页) 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

外源漆酶基因在里氏木霉中的表达及其应用基础研究

由血红密孔菌(Pycnoporus sanguineus)产生的漆酶耐热性能良好,具有重要工业应用价值,但该菌所产漆酶活力较低,不适于规模化生产。本文采用基因重组技术,使外源漆酶基因在里氏木霉(Trichoderma reesei)中高效表达,并对重组里氏木霉的产酶性能及其在秸秆、有机污染物降解方面的应用进行了研究,主要结果如下:根据里氏木霉的密码子偏好性对来自血红密孔菌的漆酶基因进行了优化,并将其与里氏木霉强启动子Pcbh1、终止子Tcbh1和潮霉素抗性基因连接得到重组质粒pCH-1ac;再通过农杆菌介导技术,将此质粒转化到里氏木霉细胞中。对影响农杆菌介导转化效率的主要因素进行了研究,发现在共培养温度24 ℃,共培养基pH5.2,里氏木霉孢子浓度为107个/mL,共培养周期为60h条件下,介导转化效率最高。通过潮霉素抗性筛选及复筛得到9个重组转化子。对重组里氏木霉染色体DNA进行聚合酶链式反应(PCR)验证,表明外源漆酶基因已...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

里氏木霉内质网蛋白折叠途径改造与异源蛋白BGLA和Lcc1的表达研究

里氏木霉是纤维素酶生产的主要工业菌株,其胞外蛋白分泌量可达40g/L以上;同时,其也是异源蛋白表达的良好宿主。然而,里氏木霉表达异源蛋白的产量往往低于内源蛋白,该问题的瓶颈可能发生在蛋白翻译后的折叠分泌过程中。内质网是分泌蛋白合成和成熟的重要场所。分泌蛋白进入内质网后,分子伴侣Bip1协助蛋白折叠,二硫键异构酶Pdi1和氧化还原酶Ero1帮助形成二硫键;此外,其糖基化状态也是检测蛋白折叠和分选的重要信号。糖苷酶Gls2切除糖链A分支的葡糖残基,如蛋白正确折叠,则继续分泌;若折叠错误,则甘露糖苷酶Mns1切除B分支最末端的甘露糖残基,激活内质网关联降解途径(ERAD),运出内质网,在细胞质内被降解;或者由UDP-葡糖基转移酶Gpt1在A分支上重新添加葡糖残基,促进蛋白继续循环折叠。对内质网蛋白折叠途径相关基因进行遗传改造,可有助于促进里氏木霉蛋白折叠和分泌,从而构建高效生产纤维素酶菌株。β-葡萄糖苷酶(BGL)能够将纤维二糖水解成...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

昆明理工大学
昆明理工大学

不同材料诱导里氏木霉产纤维素酶能力的比较及机理研究

木质纤维素是世界上储量最多的可再生生物质资源,它具有分布普遍、来源丰富的特点。在化石燃料资源面临着不可再生、自然环境逐渐恶化的形势和危机下,采用方便廉价的木质纤维素生产乙醇等液体燃料和相关化学产品,可以有效缓解人类面临的能源和环境两大危机,改善对化石能源的依赖,降低对自然环境的破坏,促进全球经济的可持续发展。自然环境中生活着大量以木质纤维素为碳源的微生物,它们可以利用自身分泌到胞外的纤维素酶来降解环境中的木质纤维素供自身生长繁殖。基于此,我们可以通过这些微生物来对木质纤维素资源进行开发利用。这是对地球上取之不尽用之不竭的木质纤维素资源开发最合理有效的途径,这种利用方式还具有对环境破坏小的优势。丝状真菌对自然环境中的木质纤维素的降解扮演着非常重要的角色,发挥着重要的作用。所以,对木质纤维素酶进行酶系组成和诱导表达这两方面的研究对于未来高效利用木质纤维素资源具有非常重要的理论意义和应用价值。影响木质纤维素酶基因表达纤维素酶的第一因素...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>