分享到:

日本结楼草(Zoysia japonica Steud.)植株再生体系建立与DREB1A基因转化研究

本研究通过单因素实验和多因素正交实验探讨了多个因素对日本结缕草(Zoysia japonica Steud.)不同外植体愈伤组织诱导及生长的影响,建立了高效的离体植株再生体系。在此基础上,通过基因枪轰击和农杆菌侵染对日本结缕草的遗传转化进行了研究,确立了两种转化方法的技术路线,并且将DREB1A基因转入日本结缕草不同品种中,以期获得更为抗旱、耐寒、耐盐碱的日本结缕草转基因新品系。通过近4年的研究,在以下几个方面取得了进展:1、建立了日本结缕草离体植株再生体系。以成熟种子诱导愈伤组织,单因素实验和正交实验结果表明,选用品种‘Zenith’,在MS培养基中以植物凝胶作为凝固剂,添加2,4-D 5mg/L、6-BA或KT 0.1mg/L及CuSO_4 2.5mg/L的组合效果最好。无菌实生苗各部分中,胚轴的胚性愈伤诱导培养基可选用2~3mg/L的2,4-D,添加0.05mg/L 6-BA;MS培养基添加2~4mg/L 2,4-D即可诱  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

安徽农业大学
安徽农业大学

几种草坪草转基因及体细胞无性系变异的研究

本试验以成熟种子为试材,优化了日本结缕草愈伤组织诱导及分化再生及农杆菌介导遗传转化的关键因子,在此基础上进行了 bt 基因转化日本结缕草的研究;在建立了高羊茅高效再生体系的基础上,将体细胞无性系变异技术与诱变技术相结合进行了高羊茅优质突变体的研究。结果如下: 1)以破除休眠的日本结缕草和高羊茅成熟种子为外植体,通过单因素和多因素试验确定了两种草坪草愈伤组织诱导、继代和分化的最佳培养基。结果表明,日本结缕草愈伤组织的诱导培养基为含 2,4-D 1 mg/L+NAA 3mg/L 的 MS 培养基;继代培养基为含2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L 的 MS 培养基;分化培养基为含 6-BA 3 mg/L+KT 3.5mg/L 的 MS 培养基;生根培养基为含 NAA 0.3mg/L 的 MS 培养基。高羊茅愈伤组织的诱导培养基为含 2,4-D 5 mg/L+6-BA 0.2 mg/L 的 MS 培养基;分化培养基...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京林业大学
北京林业大学

日本结缕草(Zoysia japonica Steud.)悬浮再生体系的建立与超低温保存研究

以日本结缕草(Zoysia japonica Steud)品种‘Zenith’和来源于山东和辽宁的野生材料‘Liaoning’、‘Shandong’为试验材料,进行了悬浮体系建立、体胚诱导和遗传转化和超低温保存的研究,以期建立起高频再生体系,并对体系进行长期稳定的保存,为结缕草细胞工程和基因工程奠定了理论和实践基础。主要成果如下:1.建立并优化日本结缕草悬浮体系。淡黄色、颗粒状、结构松散的胚性愈伤组织适合悬浮培养,悬浮培养基是液体MS2(MS+2 mg/L2,4-D)。初期,条件培养基与新鲜培养基比例以1:3为宜。同一克隆的愈伤组织,随着继代次数的增加,体系建立需要的时间变短。2.显微观察发现,悬浮培养前期,散出细胞多为长条形具有明显的大液泡;随着时间的延长,椭圆形细胞逐渐增多,细胞内颗粒状的内含物逐渐增多;悬浮体系建立后,细胞为椭圆形,细胞质浓厚,无明显的大液泡,内含物丰富。3.悬浮体系的生长曲线分为滞后期、对数生长期、静止期...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京林业大学
北京林业大学

日本结缕草铝胁迫转录响应及ZjOMT功能研究

随着全球环境气候的变化以及工业化和城市化程度的提高,南方土壤酸化加剧,对植物的生长造成了很大的危害,对人类生存环境和生活品质产生了很大影响。培育抗铝的植物品种并应用到生产生活中是一种比较直接的方法,并且具有生态、环保、经济的优势。日本结缕草是一种优良的暖季型草坪草,广泛生长在南北方的广大地区,它能在含铝量比较高的酸化土壤中生长良好,是一种耐铝的植物。为了揭示日本结缕草耐铝的分子机制,本研究对日本结缕草铝胁迫下响应的转录组进行了分析,在此基础上研究了日本结缕草ZjOMT基因的序列和功能特征,并在大肠杆菌和拟南芥中进行表达。主要结果如下:(1)日本结缕草铝响应转录组分析通过铝处理和未处理的日本结缕草转录组测序,获得了 34,743个Unigenes,其中14,555个为差异表达基因,包括4,845个下调基因和9,710个上调基因。差异表达基因中93.17%的基因为已知基因,其中314个基因尚未被注释,已经被注释的的基因中,包含大量的...  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京林业大学
北京林业大学

日本结缕草根际真菌及根系在盐胁迫下的转录组学研究

日本结缕草(Zoysia japonica)是非常重要的草坪草,耐逆性强、管理粗放及观赏性高等特点使得它被广泛应用于各种草坪的建植中。目前,己经有了大量关于结缕草的研究报道,包括优良品种选育、耐盐与耐低温的研究、病害防治的研究、分子标记的开发等等。结缕草的优良品质与根际环境中的微生物作用有很大的关系,然而,目前对结缕草耐盐性及根系微生物的研究还相对较少。因此,本项研究利用二代高通量测序的手段在两方面对结缕草的耐盐性进行研究。第一部分内容的研究是通过高通量测序获得大量根际真菌的基因信息,为以后筛选菌株研究真菌增强结缕草耐盐性提供研究基础;第二部分内容是获得大量结缕草耐盐候选基因,为结缕草本身耐盐的研究提供工作基础。研究的主要结果如下:1.通过Illumina的HiSeqTM2000测序平台,测得自然状态下生长的结缕草根系及根际微生物转录组。共获得5.49 Gb的数据量,拼接和组装后共得到了 68,024个unigenes,平均长度...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京林业大学
北京林业大学

日本结缕草滞绿基因(ZjSGR)的功能研究

较短的绿期是限制日本结缕草(Zoyisa japonica)进一步推广应用的关键,同时日本结缕草的基因资源尚未得到有效开发利用,其叶绿素降解途径及调控机理尚不明确。滞绿基因是调控叶绿素降解的一类重要基因,在植物衰老和响应环境胁迫中也发挥着多方面的调节作用。本研究的目的旨在从日本结缕草中分离得到滞绿基因,鉴定其功能,并分析其调控机理,进而为基因工程育种提供依据。本研究主要围绕基因和启动子的克隆、生物信息学分析、基因表达模式、亚细胞定位、转基因过表达、滞绿突变体恢复、转基因株系的生理生化分析、启动子活性分析、叶绿体超微结构观察和RNA-seq测序分析等方面开展了研究,得到如下研究结果:1.ZjSGR及其启动子的克隆。利用染色体步移的方法克隆得到ZjSGR的gDNA序列(KP148820)和cDNA序列(KP148819),同时获得ZjSGR基因编码区上游1029bp的启动子序列。生物信息学分析表明ZjSGR属于滞绿基因家族,启动子包...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>