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VEGF反义寡核苷酸转染对胆囊癌肿瘤血管生成影响的研究

目的:探讨在原发性胆囊癌组织中VEGF、Flt-1和KDR在mRNA和蛋白水平的表达及其与原发性胆囊癌临床病理特征的关系。方法:21例原发性胆囊癌和10例胆囊腺瘤样息肉新鲜组织标本取自2002年8月-2004年3月浙江大学医学院第二附属医院外科手术切除的有明确病理诊断的病例。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化染色在mRNA和蛋白水平检测VEGF、Flt-1和KDR在原发性胆囊癌和胆囊腺瘤样息肉的表达情况,并分析VEGF、Flt-1和KDR免疫组化阳性表达的病例与胆囊癌肝浸润、淋巴转移、病理分级和Nevin分期等临床病理特征的相关性。结果:在胆囊癌和胆囊腺瘤样息肉组织中VEGFmRNA阳性表达率为90.47%(19/21)和20%(2/10);Flt-1mRNA阳性表达率为71.42%(15/21)和0%(0/10);KDRmRNA阳性表达率为85.71%(18/21)和10%(1/10);两组相比差异显著(P0.0  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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肿瘤表达谱基因芯片筛选胆囊癌肿瘤相关基因的研究

目的:使用肿瘤表达谱基因芯片筛查胆囊癌组织标本的异常表达基因。为胆囊癌临床诊断芯片的开发提供数据基础。并验证表达谱芯片筛查胆囊癌基因的可靠性。方法:收集4例新鲜胆囊癌组织标本和对应的正常对照组织,低温冷冻保存后提取总RNA,分别标记荧光探针后与含4069个基因的BiostarH-40s型肿瘤表达谱芯片杂交。杂交后进行图像扫描和数据分析。并使用real-time PCR对筛查结果进行验证。结果:共筛查出共同表达的异常基因61条,涉及肿瘤发生发展的各个方面。其中表达下调的基因17调,表达上调的基因44条。其中:原癌基因和抑癌基因9条;细胞凋亡相关的蛋白7条;DNA合成和修复、重组蛋白6条;细胞信号和传递蛋白13条;代谢12条;蛋白翻译合成6;其他8条。选取其中5条基因利用real-timePCR进行扩增,结果证实所选基因在胆囊癌中均有异常表达,与基因芯片的表达情况一致。结论:基因芯片技术能够低消耗、高灵敏度、高通量地分析细胞内基因的...  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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人胆囊癌裸鼠原位模型的建立、单克隆细胞株的分离及双自杀基因体内外杀伤作用的研究

第一部分:人胆囊癌裸鼠原位移植瘤模型的建立目的 利用组织块法建立技术较为成熟的人胆囊癌裸鼠原位移植瘤模型,了解其生长特点、镜下形态、超微结构、染色体分析及肿瘤标志物的表达等生物学特性,同时利用免疫组化法检测瘤组织中一些与侵袭和转移相关的蛋白表达。材料和方法 人胆囊癌细胞GBC-SD培养于加入10%新生牛血清的RPMI1640培养液中,胰酶消化后将约2×10~6(0.2ml)个GBC-SD细胞注射于裸鼠皮下成瘤,取所成肿瘤组织剪成小块接种于裸鼠皮下,建立组织块法皮下移植瘤模型;同时将瘤组织块接种于胆囊,胆囊原位成瘤后取出瘤组织,同法接种于下一只裸鼠的胆囊,如此反复传代,建立原位移植瘤模型:裸鼠衰竭时处死尸解,观察肿瘤生长和转移情况,并取瘤组织做常规病理切片显微镜下观察,做超薄切片透射电镜观察,SP免疫组化法检测与转移及侵袭相关的蛋白表达,实体瘤直接法行染色体分析,取原位瘤、皮下瘤模型及正常对照裸鼠的血清,酶联免疫法检测相关的肿瘤标...  (本文共145页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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胆囊癌相关基因表达及联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸对胆囊癌细胞调亡的影响

背景:胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤,占胆道系统恶性肿瘤的25%,而且发病率有逐年增多的趋势。胆囊癌的治疗效果很不理想,除发现晚、诊断率低外,胆囊癌对放疗、化疗不敏感,使胆囊癌预后极差。寻求新的更有效的肿瘤标记物和治疗方法是生物医学的重要课题。凋亡是维持机体组织形成和内平衡的关键因素,这一过程紊乱所导致的细胞过度生长和突变是肿瘤发生发展的基础。细胞凋亡受基因调控,与其密切相关的三个基因家族即Bcl-2家族、Caspase家族和IAP家族。Survivin是IAP家族的新成员,作为一种凋亡抑制因子,它选择性地在人类常见恶性肿瘤中高表达,而在正常组织中不表达,与肿瘤的侵袭性和临床进展过程有关,是目前国内外分子生物学研究的热点。Bcl-2是最早发现的抑制凋亡的蛋白,通过抑制细胞正常性的生理死亡(细胞凋亡),使某些本应该被清除的细胞的生存得以维持,破坏细胞总量的动态平衡,而导致肿瘤病灶的产生。Caspase家族是—组蛋白酶,介导即将死...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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野生型p53基因转染对人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡诱导、生长抑制及基因表达谱调控的研究

第一部分:人胆囊癌细胞系GBC-SD p53基因突变的研究目的 对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞,应用免疫细胞化学SP法和PCR产物直接测序技术,分别从蛋白质和分子水平检测其p53基因状况,为深入研究GBC-SD细胞系生物学行为奠定基础。方法 应用细胞培养技术,体外培养人胆囊癌GBC-SD细胞。通过免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;以GBC-SD细胞基因组DNA为模板,PCR技术扩增p53基因4,5,6,7,8,9外显子,对所得产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,进行正、反向直接测序分析。将测序结果通过NCBI网站应用Blast软件,与基因库中人类p53基因序列进行同源性对比分析。结果 体外培养的GBC-SD细胞在含10%灭活新生牛血清的RPMI-1640培养液中生长状态良好。细胞经爬片生长并固定后,免疫细胞化学SP法染色显示P53蛋白过表达;PCR技术成功扩增p53基因4,5,6,7,8,9外显子,对PCR纯化...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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胆道癌全基因组杂交分析的研究

背景胆道癌(Biliary tract carcinoma BTC)包括胆囊癌(Gallbladder CarcinomaGBC)和胆管癌(Bile duct carcinoma BDC),由于胆道癌难以早期发现,出现症状时往往已处于中晚期,手术根治率低、预后差。因此胆道癌的分子生物学研究日益受到人们的重视,希望能够从分子水平上找出胆道癌的发生、发展的原因,以提高胆道癌的早期诊治水平。胆道癌的发病机理尚不清楚,目前的研究提示可能与多基因、多步骤协同作用有关。以前对胆道肿瘤的细胞遗传学和分子生物学研究,主要集中在单个或几条基因的改变,如目前研究较多的与胆道癌相关的癌基因有ras、c-erbB-2、bcl-2、c-myc、bax,HER-2/neu,c-met及Fas基因等,抑癌基因有p53、p16、nm23、p27,DPC4及Rb基因等;但是对于染色体上全基因组的增加却知道得很少。而且,促进胆道肿瘤发生和发展的分子学基础至今还不清...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>