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鸡钙代谢调节相关基因的克隆重组与表达研究

本研究以新扬州鸡为研究对象,根据已发表的基因序列设计引物,利用逆转录多聚酶链反应等分子生物学技术进行了新扬州鸡降钙素、甲状旁腺激素和D28k钙结合蛋白等三个主要钙代谢调节物基因cDNA的扩增与真核表达质粒的构建,并通过腿部肌肉注射导入构建质粒,测定血清中降钙素、甲状旁腺激素、雌二醇浓度及血钙、血磷的浓度,以观察真核表达质粒在鸡体内的表达效果,不仅为今后从事鸡体内钙营养代谢调控机制的研究提供了必要的物质条件与技术手段,同时也为鸡育种过程中钙代谢调节相关基因研究及应用基因增强疗法治疗鸡钙代谢性疾病提供了重要的基础材料。1.钙代谢调节相关基因的克隆与测序将取自四只450日龄新扬州鸡的新鲜鳃后腺、甲状旁腺和小肠粘膜上皮组织提取总RNA后,利用新设计的引物通过逆转录多聚酶链反应进行扩增,并对扩增得到的产物进行了酶切鉴定与序列分析。结果:①用SV Total RNA Isolation System从前述三个组织样品中提取得到了总RNA,以  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
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银耳遗传转化系统的建立及三个品质基因的转化

银耳(Tremella fuciformis Berk.)又称白木耳,是一种已大面积人工栽培、被人们普遍接受的滋补食品。本研究应用基因工程技术,遗传转化高赖氨酸蛋白基因、人乳铁蛋白基因、人胰岛素基因和蜜蜂抗菌肽基因,以期进一步提高银耳的营养保健品质。文献检索结果,从1976年至今,未见银耳遗传转化方面的研究报道。1 建立了银耳遗传转化系统研究出银耳遗传转化的标记基因:研究了银耳、大肠杆菌和农杆菌对13种抗生素的敏感性,筛选出银耳芽孢敏感的两种抗菌素——潮霉素、卡那霉素,确定潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)、新霉素磷酸转移酶基因(nptII)作为银耳遗传转化的筛选标记基因;测定了银耳的β-半乳糖苷酶(lac z)和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)的活性,确定GUS作为银耳遗传转化的报告基因。通过诱变,获得二个营养缺陷型菌株,其中一个是肌醇缺陷型,可应用于营养缺陷型标记的研究。建立银耳原生质体制备与再生系统:应用正交设计优化银耳原生质体的制...  (本文共187页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的碱性蛋白酶基因的表达研究

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42是一株从成都市尘活垃圾中分离出的菌株经过多次诱变后获得的碱性蛋白酶高产菌株。该菌株发酵液不但脱毛效果很好,而且胶原水解活性很低,因此在皮革工业中将有很好的应用前景。从该菌发酵液中已经分离纯化出能够独立完成脱毛过程的碱性蛋白酶DHAP,并且克隆到相应的蛋白酶基因AP。为了进一步证明AP基因编码的蛋白酶能否单独完成生皮的脱毛过程和建立能产生脱毛碱性蛋白酶的基因工程菌,本论文开展了以下4个方面的研究工作:建立枯草杆菌转化系统,克隆芽孢杆菌的强基因启动子,构建AP基因表达质粒,以及融合的AP基因在枯草杆菌WB600中的异源表达。在枯草杆菌的转化系统的研究中,首先完成了短小芽孢杆菌UN-31-C-42和枯草杆菌WB600的生长曲线和它们对抗生素的敏感性的测定,结果表明,它们对卡那霉素都敏感,因此可以选择卡那霉素抗性基因作为这2种菌转化时的标记基因;短小芽孢杆菌对氯霉素敏感...  (本文共171页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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小鼠Lrp5基因表达调控的研究

低密度脂蛋白受体相关蛋白5(low densjty lipoprotein receptor re]ated protein5,LRP5)是细胞表面的受体蛋白,属于低密度脂蛋白受体家族,可通过与相应配体结合参与受体介导的细胞内吞作用而实现多方面的功能。LRP5基因全长cDNA是1998年分别由Merck实验室和Bayer研究中心克隆的。Merck实验室是在建立胰岛素依赖性糖尿病基因候选区域物理图和转录图时从肝脏的cDNA文库中分离得到LRP5基因的。Bayer实验室是在分离成骨细胞发育相关基因时从成骨细胞cDNA文库中分离到该基因的。研究标明LRP5基因丧失功能突变(包括错义,无义及移码突变)导致骨质疏松-假性神经胶质瘤综合征(Osteoporosis-Pseudoglioma Syndrome,OPS),该综合征的主要临床表现为幼年型骨质疏松和假性神经胶质瘤,并发现携带LRP5基因突变的杂合子骨密度显著低于对照组。Lrp5基因...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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Maspin基因表达调控的初步研究

前列腺癌是威胁男性生命的主要疾病之一,关于其侵袭和转移的分子机制需要更深入的研究。Maspin是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,在前列腺癌的侵袭与转移中起着非常重要的作用。Maspin表达于正常的哺乳动物上皮细胞中,在原发性前列腺癌细胞中表达下降,在转移性前列腺癌中表达缺失。对maspin基因功能的研究表明:Maspin在体外可以抑制人前列腺癌细胞的侵袭和移动,体内可以抑制裸鼠前列腺癌细胞的生长与转移。而且,Maspin是一有效的血管生成的抑制剂。把前列腺癌细胞LNCaP植入裸鼠的皮下,再用外源性的重组Maspin治疗裸鼠,发现Maspin可以抑制肿瘤细胞的生长和血管的生成。Maspin不仅在侵袭和转移水平抑制前列腺癌的发展,还可以增强肿瘤细胞的凋亡。无论是体外还是体内,内皮细胞中maspin基因的过表达都可以诱导内皮细胞的凋亡,其诱导作用可以被Caspase的抑制剂阻断。Maspin的表达谱及其生物学功能都说明,Maspin...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

家蚕两种类型乙酰胆碱酯酶基因的分析

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC3.1.1.7.)是昆虫神经传导中的一种关键酶,在胆碱能神经突触间,通过催化神经递质乙酰胆碱(acetylcholine,ATCh)来维持神经冲动的正常传递。AChE是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标。由于杀虫剂的大规模长期的使用,不仅带来巨大的环境污染,而且导致许多种昆虫对杀虫剂产生了抗性。家蚕是农业生态系统中对农药十分敏感的重要经济昆虫,也是我国农药登记中所列环境生态的非靶标生物之一。农、林害虫中约有70%的种属于鳞翅目,而家蚕作为鳞翅目昆虫的代表已有长久历史,所以研究家蚕的乙酰胆碱酯酶基因,可为开发对害虫高效而对环境没有污染的新型药剂提供科学依据,不仅可以缩短药剂研发周期,大幅降低研发成本,还可望开拓农林害虫新的防治途径。本研究以家蚕乙酰胆碱酯酶作为研究对象,初步研究了家蚕乙酰胆碱酯酶的生化特性,并设计了特异性的引物,首次扩增得到家蚕两种类型的ace...  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>