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免疫磁珠法原代纯化培养人视网膜微血管内皮细胞与周细胞及炎症与缺氧对其PDGF-B/PDGFR-β和Ang-1/Tie2表达的影响

研究背景糖尿病视网膜病变(DRP)是大多数发达国家工作年龄人群致盲的首要原因,是最常见的视网膜血管性疾病。在中国,目前有超过5000万糖尿病患者,并以每年10%的速度增加。世界范围内糖尿病患者人数的增加提示DRP将来依然是视力丧失以及视功能损害的主要原因。DRP的确切发病机制依然未明。周细胞丢失、微动脉瘤形成、非细胞性毛细血管形成是糖尿病患者视网膜早期病变的特征;视网膜新生血管的形成则是增生性糖尿病视网膜病变的基本病变。研究糖尿病视网膜病变的发病机制,是当前研究的一个焦点,也是防治糖尿病致盲的前提条件。病理性新生血管的共同特征包括血管滲透性异常、血管重塑与成熟缺陷,它将加速渗漏、出血以及炎症。在DRP的病理性血管生成过程中,视网膜微血管内皮细胞与周细胞是作用的关键靶点,在DRP发病机制以及发展中具有重要作用。为了在体外研究视网膜微血管内皮细胞与周细胞的特征,已经采用了许多方法进行原代培养,但依然存在纯化、富集的困难。纯化的方法包  (本文共109页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

高浓度葡萄糖对培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的:1.建立人视网膜微血管内皮细胞的体外培养方法;2.检测高浓度葡萄糖对培养的人视网膜微血管内皮细胞屏障功能的影响,并探讨产生影响的机理。材料和方法:1.取眼库提供的正常人视网膜,经洗涤、剪碎、胶原酶消化、细胞滤网过滤,并与标记CD31抗体的免疫磁珠孵育结合,经细胞磁分离系统分离,取得纯化的人视网膜微血管内皮细胞。2.纯化的人视网膜微血管内皮细胞经传代培养,使用小鼠抗人Von Willebrand因子抗体和FITC标记的山羊抗小鼠IgG抗体进行免疫组化和流式细胞术鉴定。3.传代细胞,待细胞融合后随机分为3组,分别更换为葡萄糖浓度5.6mmol/L、15.6mmol/L、25mmol/L的DMEM培养液。4.更换培养液后第3d和第1、2、3、4周,以MTT法观察人视网膜微血管内皮细胞在不同浓度葡萄糖培养液中的活性;细胞电阻计测量人视网膜微血管内皮细胞在不同浓度葡萄糖培养液中的TER;Western Blot法观察人视网膜微血管内...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

视网膜微血管及高眼压对其影响的实验研究

青光眼至今发病机制不明,高眼压仅是一个重要危险因素,已有研究发现视盘周围大血管有直径变细等改变,那作为与视网膜神经节细胞关系更密切的视网膜微血管有无改变以及如何改变呢?本课题拟对此做些探讨。第一部分:正常猕猴与人视网膜血管的比较目的:比较正常猕猴与人视网膜血管的异同,为进一步利用猕猴建立动物模型来研究视网膜血管打下基础。方法:对健康成年猕猴和正常人扩瞳后行眼底荧光血管造影,取猕猴眼球6只和人角膜移植供体剩余眼杯8只的视网膜,用ADP酶法进行血管染色,对两者视网膜血管的走行、血管分级、毛细血管分层以及黄斑区血管拱环等进行比较,测量结果进行统计学检验。结果:猕猴与人眼底荧光血管造影均可见大血管由视盘发出后分成四支分别供应视网膜的四个象限。ADP酶法染色后见视网膜血管自穿出视盘后的一级血管逐渐分支变细,直至五级血管即毛细血管;在视盘旁、赤道部、周边部两者血管面积百分比没有差异;视盘旁血管分为多层,赤道部有两层,且深浅层间相互交通,周边...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

色素上皮衍生因子对视网膜微血管周细胞保护作用及对MAPKs信号通路影响的研究

视网膜微血管周细胞丧失是糖尿病视网膜病变(DR)最早期的特征性病理改变,减少周细胞的凋亡与功能障碍,有望成为治疗早期非增生性DR的有效途径。本研究首先探讨了色素上皮衍生因子(PEDF)对在高糖环境中培养的牛视网膜微血管周细胞(BRP)的增殖活力、细胞周期和凋亡的影响,通过MTS、流式细胞术、Annexin V/PI双染、TUNEL和Hoechst33342染色法证实PEDF能够减缓高糖诱导的BRP生长抑制和细胞凋亡;然后通过western blot法检测ERK、JNK、p38三条主要的MAPKs信号转导通路,发现ERK MAPK和JNK MAPK信号转导通路可能参与了PEDF对BRP的保护作用。体内实验以链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,通过石蜡切片HE染色、透射电镜和视网膜血管消化铺片PAS染色观察视网膜组织病理改变和微血管周细胞数量变化,同时以免疫组化、实时荧光定量PCR和western blot法检测PEDF蛋白和mRNA在糖...  (本文共177页) 本文目录 | 阅读全文>>

《眼科》2013年06期
眼科

视网膜微血管异常的5年发病率及其与高血压的相关性

视网膜微血管异常包括局部和弥漫性视网膜小动脉缩窄,视网膜动静脉交叉压迫和视网膜微动脉瘤等视网膜病变,约2%~15%的老年非糖尿病患者中存在视网膜微血管异常。在“Beaver Dam眼病研究”中,年龄在43~86岁范围内的非糖尿病人群中约2%~14%存在微血管异常[1],其中6%~10%在5年后出现病变进展[2]。在“动脉硬化危险因素社区研究(ARIC研究)”中,年龄在48~72岁范围内的非糖尿病对象中3%~8%存在微血管异常[3]。视网膜微血管异常与很多眼病相关,如青光眼和非青光眼视神经病变[4-5],也与许多系统性血管疾病相关,如高血压[6-9]、脑卒中[10]、脑白质病变、脑萎缩[11]和冠心病[12],而且提示发生这些系统性疾病的危险增加。因此视网膜微血管异常被认为是上述系统性疾病和相关死亡率的独立预测因素[13]。既往关于视网膜微血管异常的大多数研究主要评估视网膜微血管异常的患病率及其与同时存在或发生的系统性疾病的横断面...  (本文共8页) 阅读全文>>

权威出处: 《眼科》2013年06期
《北京中医药大学学报》2013年03期
北京中医药大学学报

加味补阳还五汤对糖尿病大鼠视网膜微血管周细胞凋亡的影响

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy DR)是糖尿病(diabetes mellitus DM)最常见的微血管并发症之一,周细胞丧失等微血管改变是DR早期主要的病理改变。研究表明,周细胞丧失为DR的促发因素[1],凋亡是早期DR周细胞选择性丧失的主要形式[2]。本文拟在前期研究的基础上观察加味补阳还五汤对DM大鼠视网膜微血管周细胞凋亡的影响,进一步深入探讨加味补阳还五汤防治早期DR的机制。1材料1.1动物健康雄性清洁级SD大鼠,鼠龄6周,体重(200±20)g,上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证号:SCXK(沪)2007-0005。1.2主要试剂链脲佐菌素(Streptozotoci STZ,美国Sigma公司);加味补阳还五汤(生黄芪15 g、山药15 g、苍术9 g、桃仁5 g、红花5 g、当归9 g、川芎6 g、赤芍10 g、茯苓15 g、生地15 g、玄参15 g,水煎至50 mL备用,福建...  (本文共5页) 阅读全文>>