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大鼠骨髓基质干细胞的分离培养、诱导分化和自体移植治疗心肌梗死的实验研究

干细胞(stem cell)是一类具有自我复制和分化潜能的未分化细胞,在适宜的条件下或给予适宜的信号,可以分化为不同类型的具有特征性形态、特异分子标志和特殊功能的成熟细胞。根据分化潜力的不同,干细胞可以分为全能性干细胞(totipotential stem cell)、多能干细胞(multipotential stem cell)和单能干细胞(unipotential stem cell)。胚胎干细胞是一种多能干细胞,可分化为人体所有的组织和细胞。单能干细胞又称为成体干细胞或组织干细胞,具有组织特异性,只能分化产生所属组织的细胞类型。近几年的研究发现,成体干细胞具有可塑性,在特定的条件下可跨系统、跨胚层分化为其它组织的细胞,称为横向分化(transdifferentiation),这一发现不仅对于细胞生物学理论的发展有着重大的意义,对于各种因素导致的组织和器官缺损性、退行性疾病以及遗传缺陷性疾病的细胞替代治疗也具有深远的影响。成  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军第一军医大学
中国人民解放军第一军医大学

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其造血支持作用的实验研究

研究背景/目的:骨髓基质干细胞是骨髓中除造血干细胞和内皮祖细胞以外的另一种成体干细胞,具有广泛的分化潜能和造血支持作用,是组织工程和基因治疗最有应用潜能的候选细胞之一。目前认为MSC是一异质性的细胞群,已证实至少存在3种形态的细胞,但由于无特征性的表面标记其分离纯化缺乏特异性,它的生物学特性如诱导分化的机理及最终的分化潜能等仍不甚了解,同时其体外培养方法也有待完善。近年来基质干细胞与造血干细胞共同移植加快造血恢复作用及降低GVHD的作用日益受到重视。克隆培养是进一步研究其生物特性的有效方法。本实验拟探讨骨髓基质干细胞克隆的培养方法和研究其对体内外造血支持作用的影响。为骨髓基质干细胞体外大量扩增培养及造血干细胞与基质干细胞共同移植做初步尝试。方法:1.人骨髓基质干细胞的克隆培养及生物学特性的检测以密度梯度离心法和贴壁法分离人骨髓基质干细胞,以套圈法获取克隆源骨髓基质干细胞扩增培养。检测其生物学特性,包括①MSCs的表面标记检测;②...  (本文共65页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

骨髓基质干细胞向软骨细胞分化的实验研究

骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)属于成体干细胞,是一类多能干细胞,在形态上与成纤维细胞、网状细胞、脂肪细胞和内皮细胞的形态相似。MSCs具有多相分化潜能已经被体内外实验验证。MSCs具有向软骨、骨、纤维组织分化的的能力。人MSCs在体外可以被诱导分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞。骨髓基质干细胞分离培养方法:密度梯度离心分离纯化法、全血培养贴壁法、免疫磁珠筛选、流式细胞仪分离等。由于MSCs表型不均一,分别具有间充质细胞、上皮细胞、内皮细胞的特点,目前没有鉴定MSCs的统一方法。在骨髓贴壁培养中最常见的为成纤维细胞和造血细胞,因此实验中一般选择这些细胞具有代表性的抗原进行检测。MSCs常常表现,CD29、CD 44H、CD 71、CD 90、CD 106、CD 120a、CD 124、CD 1 66、SH1、SH2、SH3、SH4、SB10呈阳性。CD 1a、CD 1...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

人21.5kDa MBP基因对神经及相关细胞增殖与凋亡作用的研究

人髓鞘碱性蛋白(Human Myelin Basic Protein,MBP)是神经组织特有的蛋白质,由中枢神经系统(CNS)少突胶质细胞和外周神经系统(PNS)雪旺氏细胞(SC)合成,占髓鞘蛋白质总量的30%,在神经纤维的绝缘和快速传导中发挥重要作用。MBP具有种属、组织细胞特异性和时空表达阶段特异性,对人脑发育、神经细胞分化、髓鞘发生与髓鞘形成具有重要生理作用。MBP不仅存在于神经组织,而且广泛分布于造血系统,其功能更为广泛。在神经科学领域中,MBP及其基因的研究起步早、进展快,迄今仍是人们关注的焦点之一。MBP在神经细胞的生长、发育和分化过程中究竟是促进细胞生长、增殖或是抑制生长、诱导细胞凋亡?这方面的有关研究报道目前国内外尚存争议。弄清楚MBP对细胞增殖和凋亡的确切作用,不仅对人脑发育、神经细胞分化、髓鞘发生与髓鞘形成等基础研究具有重要意义,而且对CNS疾病发病机理与诊治等临床研究无疑具有广泛应用价值。本课题在本实验室系...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

人骨髓基质干细胞永生化及相关研究

骨缺损的修复一直是矫形外科的难题。利用自体骨、异体骨、异种骨、带血管游离植骨进行修复都存在这样或那样的问题。上世纪80年代开始,骨缺损的修复逐步进入了组织工程修复研究的时代。支架材料、生长因子、种子细胞是组织工程的三要素,随着先进制造技术的进步,支架材料的研究已取得突飞猛进的发展,已有人工骨应用于临床。目前种子细胞是制约组织工程发展的瓶颈之一。骨髓基质干细胞因其成体干细胞特征和易获取性,近年来倍受关注。但是,骨髓基质干细胞的分离、纯化、鉴定以及多向分化条件和机理等目前都不十分清楚;另外,由于细胞体外长期培养面临细胞衰老问题,使其无法达到组织工程临床应用需要的细胞数量。随着组织工程研究的逐步深入,对基质干细胞的需求已极为广泛和迫切。不论是基础研究还是临床应用,人们都希望获得稳定的、纯化的、大量具有骨髓基质干细胞生物学表型和功能的种子细胞,以便为基础研究提供标准的细胞,为临床应用提供细胞库,真正实现体外构建组织器官的目的。为了达到以...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

hTRAIL基因修饰成人骨髓基质干细胞靶向脑胶质瘤基因治疗的研究

恶性胶质瘤是原发性中枢神经系统肿瘤中最常见的一种肿瘤,它具有恶性级别进行性升高、高度浸润性的特点。胶质母细胞瘤是其中恶性度最高的,虽然显微神经外科技术、放射治疗及化疗水平的不断提高,但其首诊后的平均生存期仍仅为9-12个月。上世纪90年代初,基因治疗的热潮曾为恶性胶质瘤的治疗带来一线曙光,其中以HSV-TK/GCV系统为代表的基因治疗虽然在动物试验中都取得了良好的效果,然而在Ⅰ期和Ⅱ期临床试验都未取得预期的疗效,这可能是由于病毒载体不稳定、目的基因不能长期表达、自体免疫、靶向性问题和病毒载体无法追踪浸润瘤细胞所致。骨髓干细胞(MSCs)能具有向肿瘤细胞迁徙的能力,而肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)具有特异性诱导肿瘤细胞凋亡的作用。基于以上基础,本研究将MSCs靶向肿瘤迁徙和TRAIL选择性杀伤肿瘤细胞结合探索TRAIL修饰MSCs双重靶向治疗...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>