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苏去金杆菌的分离、cry/cyt基因鉴定及杀线虫活性的研究

农业有害生物每年都对农作物的生产造成严重的损失,尤其是鳞翅目、鞘翅目、双翅目等害虫及植物病原真菌、寄生线虫等的危害最为严重。苏云金杆菌制剂是目前应用最为成功的一类微生物杀虫剂,在防治植物病害方面也取得了一定的进展。深入挖掘我国丰富的苏云金芽孢杆菌资源,分离克隆新型高毒力的杀虫蛋白基因,对构建高效广谱工程微生物和培育转基因抗虫植物具有重要的理论意义和应用价值。本研究从我国20 省市自治区共采集178 份土样,采用常规稀释平板法,并结合伴孢晶体的复红染色鉴定苏云金杆菌,共分离获得苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)51株。对51 株Bt 分离菌株的cry 基因进行了PCR 鉴定。以cry1,cry2,cry3,cry4,cry-n,cry7,cry8,cry11,cry13 和cyt 的通用引物作PCR 分析,研究结果表明:4 株含有cry4,12 株含有cry7,4 株含有cry8,4 株含有cry1,2  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
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苏云金芽孢杆菌vip3A基因及杀虫防病工程菌研究

营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins,VIPs)是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thruingiensis,Bt)在对数生长中期分泌的一类新型杀虫毒蛋白,它对鳞翅目昆虫具有较广谱的杀虫活性。Vip3A蛋白通过诱发细胞凋亡,最终导致昆虫死亡,这种作用机理与Bt杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,ICPs)的作用机理完全不同。本文对实验室保存的菌株进行vip3A基因的检测,克隆了vip3A—WB5基因并在大肠杆菌中得到高效表达。应用生物信息学对vip3A—WB5基因的序列进行了分析。将vip3A—WB5基因导入具有防病、内生和促生功能的野生枯草芽孢杆菌中,构建了多功能工程菌。用PCR方法对本室保存的菌株筛选获得30株含有vip3A基因。从中挑选对夜蛾科(Noctuidae)害虫具有较高毒力的WB5菌株,进行vip3A基因的克隆和测序。克隆得到的vi...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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苏云金芽孢杆菌cry1le1和cry8基因的研究

cry1Ie1基因是我国鉴定分离并经国际命名的一种新型的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白基因。该基因在Bt菌株中沉默,编码719个氨基酸组成的蛋白,对小菜蛾(Plutella xylostella)、玉米螟(Ostrinia furnacalis)和大豆食心虫(Leguminivora glycinivorella)等害虫具有较高的杀虫活性。本研究通过PCR扩增的方法,以cry1Ie1全长基因为模板,分别得到不同末端缺失的基因片段,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达,得到6种末端缺失的蛋白。通过对小菜蛾和玉米螟生物测定确定Cry1Ie1蛋白对小菜蛾的最小活性区N端在45-104氨基酸位点之间,C端在633-648氨基酸位点之间。N端的45个氨基酸对于玉米螟的杀虫活性的是必需的,而C端活性区应在633-648氨基酸位点之间。最终明确1-648氨基酸对小菜蛾和玉米螟均与全长蛋白...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
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苏云金芽孢杆菌WB9的研究

本文对土壤中分离的苏云金芽孢杆菌WB9菌株的生理生化特性、小菜蛾和甜菜夜蛾的致病力测定、编码活性因子的基因分析、杀虫蛋白基因的克隆和表达、工业培养基的室内摇瓶优化筛选以及茶尺蠖的室内外防治试验等进行了较为系统深入的研究。采用醋酸钠法加热处理和抗生素的分离方法,对收集自武夷山自然保护区非耕作区的200个土壤样品进行了分离,得到12株苏云金芽孢杆菌菌株,出菌率为6.0%。对WB9菌株的室内致病力测定结果表明其对小菜蛾具有高致病力、对甜菜夜蛾具有较高的致病力。以库斯塔克亚种的8010和8311菌株以及鲇泽亚种的No.1菌株为对照,对新分离的WB5、WB7和WB9菌株的12项经典生理生化指标进行了测定。测定结果显示WB9和WB5分别与库斯塔克亚种8010和鲇泽亚种No.1的生理生化反应特性表现相同,仅在个别反应上有强弱差异。由此推测,WB9和WB5可能分属库斯塔克亚种和鲇泽亚种。采用PCR及PCR-RFLP技术对WB9的ICP、VIP、...  (本文共147页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
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苏云金芽孢杆菌的肠毒素及其安全性研究

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis简称Bt)是一种昆虫病原细菌,因其产生的毒素对多种害虫有特异的毒杀作用而发展成为一种成功的微生物杀虫剂,广泛用于农林及卫生害虫的生物防治。Bt商业化应用已有60多年的历史,多年以来,Bt制剂一直被认为是安全的生物杀虫剂,因为最初认为它仅对鳞翅目昆虫有毒性,而对哺乳动物和非靶标生物无毒。但是,随着对Bt研究的深入,每年都有新的菌株和毒素被鉴定出来,其杀虫谱也越来越宽广。现在认为,Bt含有的多种毒素不仅对无脊椎动物节肢动物门的鳞翅目、双翅目、鞘翅目、直翅目、膜翅目、半翅目、等翅目等16个目有毒性,还对线性动物门、原生动物门、扁形动物门中的有些种类有杀虫活性,其中也有一些对人及哺乳动物有害。这对“Bt仅对鳞翅目昆虫有毒性”的安全性基础产生了很大冲击。另外,Bt与作为病原菌的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus简称Bc)在形态、生理及基因组等很多方面具有高度的相似性。近...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
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苏云金芽孢杆菌的重要功能基因

害虫抗性问题已经成为苏云金芽孢杆菌的重要研究课题。不少研究者在寻找新的苏云金芽孢杆菌主要杀虫基因—cry。PCR-RFLP技术已被证实可以快速分析鉴定苏云金芽孢杆菌菌株的cry和cyt基因型。本研究在继承前人已经成功建立的cry1-cry4、cry7、cry9和cry10鉴定体系基础上,发展了cry5、cry6、cry8和cry11的PCR-RFLP鉴定体系,进而采用上述PCR-RFLP技术鉴定了苏云金芽孢杆菌6株标准菌株和30株武夷山分离株的cry1-cry11基因类型。结果发现,88.9%、61.1%和2.8%的菌株分别含有cry1、cry2和cry11类基因,从供试菌株中检测到22种cry基因亚型(cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1Ad、cry1Ba、cry1Cb、cry1Db、cry1Ea、crylEb、cry1Fa、cry1Fb、cry1Ga、cry1Gb、cry1Ka、cry1La、cry1Ia、cr...  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>