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山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及体外分化潜能的研究

骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是来自于骨髓的两种干细胞之一,在人、小鼠、大鼠、兔、猪等许多物种的研究证明了该类干细胞具有体外分化为多种细胞表型的能力,有望成为未来细胞/基因治疗、组织工程的主要种子细胞之一。但是,迄今未见关于山羊,特别是成年山羊骨髓间充质干细胞分离、培养、分化等方面的系统研究报道。本研究目的在于阐明山羊骨髓间充质干细胞的生物学性能及其分化潜能,以便未来利用该类细胞作为疾病细胞/基因治疗的模型,以及利用该类细胞作为细胞生物反应器体外生产生物活性物质,进而建立山羊骨髓间充质干细胞细胞系。为此,本试验利用成年关中奶山羊为对象,较为系统全面地研究了其骨髓间充质干细胞的分离、培养、扩增、形态学、生长特性、细胞表面标志,以及体外诱导分化能力。结果如下: 1. 本试验应用贴壁分离法或密度梯度离心法成功分离获得关中奶山羊髂骨骨髓间充质干细胞,体外培养到第21 代,仍然保持其干细胞的特  (本文共143页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
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山羊骨髓间充质干细胞生物学特性、冷冻保存及基因转染研究

骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是一类能高度增殖和自我更新,并具有多向分化潜能的成体干细胞。目前,已在人、小鼠、大鼠、兔、猪、牛和羊等物种进行了研究,证明该类细胞在一定条件下能分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、脂肪细胞、肝细胞、血管内皮细胞、神经细胞和星形胶质细胞等多种成体细胞。另外,研究还发现BMSCs转染效率较高,是一种理想的核移植供体细胞。因此,BMSCs有望成为未来细胞/基因治疗、组织工程的主要种子细胞之一。但是,迄今关于山羊BMSCs分离培养、冷冻保存以及转基因等方面的系统研究报道甚少。因此,本试验利用黄淮山羊为对象,较系统全面地研究了BMSCs的分离培养、生长特性、细胞表面标志、体外诱导分化能力、冷冻保存体系以及基因转染效率等。具体研究内容如下:1.山羊BMSCs的分离培养和生物学特性研究从增殖情况、基因表达和分化潜力三方面对山羊BMSCs的生物...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
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犬脐带和大熊猫骨髓来源间充质干细胞的分离培养和分化潜能的初步研究

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞群体,根据其分化阶段,干细胞可分为胚胎干细胞、成体干细胞。间充质干细胞属于成体干细胞的范畴,目前研究的间充质干细胞大多来源于人或动物的成体组织中。间充质干细胞的可获得性,可扩增性及可多向分化性使其具有良好的研究及应用前景。本研究拟从犬脐带和大熊猫骨髓分离间充质干细胞,并研究其生物学特性和分化潜能,所得结果如下:一、犬脐带源间充质干细胞的分离培养和分化潜能研究试验对比组织块贴壁与酶消化法对间充质干细胞分离的影响。结果显示二者均能从犬脐带组织中分离得到成纤维样细胞,细胞贴壁生长,呈形态相对均一的梭形细胞,但组织块法获得的细胞活力强,增殖快,体外条件下能稳定传代至第19代,而酶消化法分离得到的细胞传代至第2代表现老化,不能增殖。组织块培养法获得的传代细胞呈平行排列生长或漩涡状生长,细胞生长曲线呈S形,细胞群体的倍增时间约为57h。分别对分离得到的犬脐带成纤维样细胞进行成骨成脂两个方向的诱导。成骨...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

河南农业大学
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兔骨髓间充质干细胞体外分化为胰岛细胞的研究

糖尿病是一种严重危害人类健康的以高血糖为主要特征的慢性代谢性疾病。胰岛移植是是最有希望治疗糖尿病的方法之一,但胰岛移植后,胰岛的功能会在半年到几年内逐渐消失,且面临着供体缺乏和免疫排斥的问题。骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是骨髓中除造血干细胞之外的另一类具有高度增殖和自我更新能力以及多向分化潜能的成体干细胞,易于体外分离、培养及扩增,在特定的条件下可以分化为胰岛细胞,且避免利用胚胎干细胞涉及的理论问题和诱导性多潜能干细胞所产生的技术安全性问题,是一种理想的组织工程种子细胞。然而如何使BMSCs稳定、高效地定向分化为胰岛细胞,并搞清楚相关诱导方案中BMSCs分化为胰岛细胞的分子调控机制是一个巨大的挑战。本研究以1月龄日本大耳白兔为实验对象,体外分离、培养、扩增兔BMSCs,观察兔BMSCs形态变化,免疫细胞化学法鉴定兔BMSCs;建立稳定的兔BMSCs定向分化为...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
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山羊骨髓间充质干细胞体外分离培养与鉴定的实验研究

背景与目的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)来源于中胚层,主要存在于全身的结缔组织与器官间质中,以骨髓中的含量最多。骨髓间充质干细胞具有自我更新的能力与多向分化、增殖的潜能。骨髓间充质干细胞因为具有可于自体获得、易培养、移植后能够长期存活并且不会出现排斥反应,可被外源基因转染并长期表达的优点,近年来成为组织工程、细胞治疗、基因治疗及器官移植的研究热点,在多学科多领域做为一种理想的种子细胞得到了广泛应用。但是骨髓间充质干细胞虽然在体内的来源比较广泛,但是数量极少,并且随着身体机能的下降与个体的衰老,数量会逐渐减少。而组织工程与细胞工程开展的首要条件是种子细胞的获取和培养传代,如何能够在体外获得足够数量和较高纯度的种子细胞极其重要。而且目前尚没有对骨髓间充质干细胞进行直接鉴定的方法。通过本研究拟建立一种体外分离培养、扩增骨髓间充质干细胞的理想方法,并且观察其生长特性...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

河南农业大学
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兔骨髓间充质干细胞培养、冻存及体外分化为胰岛β细胞的研究

糖尿病作为严重危害人类健康的一类代谢性疾病,世界上患病人口逐年增多。胰岛移植可以治疗糖尿病,却面临着供体缺乏和移植免疫排斥问题,细胞替代治疗的可行性显著。研究发现,胚胎干细胞(ESCs)、诱导多潜能干细胞(iPS)以及成体干细胞(AS)可以体内、外诱导分化为胰岛素分泌细胞,分化细胞可改善、逆转糖尿病动物的高血糖症,为移植细胞替代治疗糖尿病提供了可能性。骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)是存在于骨髓腔内非造血干细胞类的成体干细胞,可以避免利用胚胎干细胞涉及的伦理问题和诱导性干细胞所产生的技术性问题。如何诱导BM-MSCs稳定、高效地分化为功能完全的胰岛β细胞是目前亟待解决的问题。本试验拟在体外分离培养兔BM-MSCs的基础上,对冻存细胞的增殖能力、生物学特性进行鉴定,优化并建立稳定的兔BM-MSCs体外定向分化为胰岛β细胞的诱导方法与技术体系。1.采用红细胞裂解液法分离获取兔骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),基于其贴附塑料基质细...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>