分享到:

猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组基因工程疫苗的研制

囊虫病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫—猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)感染猪或人而引起的人畜共患寄生虫病。是联合国卫生组织列为需要根除的六大疾病之一。目前,研制有效的猪囊虫疫苗来控制和消除流行于世界各地的囊虫病是世界各国普遍关注的焦点。本研究从孵化并激活的猪带绦虫六钩蚴中提取总RNA,利用RT-PCR技术在国内首次克隆了猪带绦虫六钩蚴疫苗侯选基因TSOL18基因。选用近年来发展最快和最具潜能的真核表达系统-毕赤酵母,构建了重组表达载体pPIC9K-TSOL18,电转化毕赤酵母菌种GS115,并用G418抗性梯度筛选法,获得多拷贝重组菌株。对重组菌株用甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,诱导表达的培养上清中表达出大小为12ku和16ku具有反应活性的重组蛋白。用糖苷内切酶H(Endo-H)对TSOL18蛋白分析后表明,目的  (本文共110页) 本文目录 | 阅读全文>>

甘肃农业大学
甘肃农业大学

表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建

囊尾蚴病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫囊尾蚴(Cysticercus cellulose)寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一。囊尾蚴病在中国大部分地区尤其在少数民族地区是一个重要的公共卫生问题,严重威胁着人体健康,不仅如此,猪囊尾蚴病的广泛存在极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行,然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者。Tsol18是猪带绦虫六钩蚴(T. solium oncosphere)阶段特异性表达的抗原,主要在六钩蚴感染中间宿主的早期阶段分泌,其免疫血清在体外试验中能杀死六钩蚴,是猪囊尾蚴病疫苗研制的主要候选抗原之一。在已有的研究中,Tsol18重组蛋白在原核系统中多以包涵体形式表达,给蛋白质的复性和纯化带来许多困难,并且包涵体活性较低、保存期短、降解快,因...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

安徽医科大学
安徽医科大学

猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因密码子优化真核载体的构建及其在体内、外表达的实验研究

目的:构建猪带绦虫六钩蚴期密码子优化TSOL18基因的重组核酸疫苗优化PVAX1/TSOL18,观察其在体外CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株中的表达以及经肌肉接种后在小鼠骨骼肌内的表达,为猪带绦虫囊尾蚴病DNA疫苗的进一步研究奠定基础。方法:按照哺乳动物的密码子使用偏好,对猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因进行优化,使用GeneOptimizer软件对TSOL18基因的氨基酸编码基因进行优化,但不改变氨基酸。根据优化后的基因序列,由南京金思特科技有限公司进行全基因合成。利用PCR扩增该基因序列,将其插入真核表达载体PVAX1,经酶切,测序鉴定。大量提取重组质粒,将重组质粒优化PVAX1/TSOL18经梭华-SofastTM介导,体外转染CHO-K1细胞,通过RT-PCR、细胞裂解物的SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析检测其在细胞内是否有表达,再将密码子优化的PVAX1/TSOL18和PVAX1/TSOL18进行体...  (本文共55页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

猪带绦虫六钩蚴45W-4B和TSO18重组基因工程疫苗的研究

囊虫病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫猪囊尾蚴寄生于人或猪等中间宿主丽引起的人畜共患寄生虫病,在中国大部分地区尤其在少数民族地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大。不仅如此,囊虫病的广泛存在还造成畜牧业的重大经济损失,极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,因而是公认的社会经济病之一。猪囊尾蚴病的免疫预防之所以一直困扰着兽医工作者,主要原因是抗原来源非常有限。羊绦虫45W重组基因工程疫苗的研制成功,为猪囊尾蚴重组基因工程疫苗的研制提供了典范。为了探索猪带绦虫45W-4B和TSO18重组抗原对猪囊尾蚴感染的免疫保护效果,获得具有良好免疫保护作用的重组抗原,用做猪囊虫病的免疫预防,我们进行了本项研究。收集成熟的猪带绦虫虫卵,经孵化和激活后,提取六钩蚴总RNA,设计特异性引物RT-PCR扩增45W-4B和TSO18基因,测序证实扩增产物与国外克隆的猪带绦虫45W-4B和TSOL...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

《华中农业大学学报》2002年03期
华中农业大学学报

猪带绦虫六钩蚴的体外培养

寄生虫的体外培养 (thecultivationofparasitesinvitro)是指人工模拟宿主体内环境 ,使虫体在离体(离宿主 )状况下完成其寄生阶段的生长发育。寄生虫的体外培养不仅有助于描述寄生虫生长发育和形态发生 ,了解维持寄生虫生存的必要条件以及进行生理、生化和致病机理的研究 ,而且从实际意义上讲 ,可以不必饲养感染动物并可随时获得抗原材料。另外体外培养可收集大量寄生虫各期代谢产物 ,对驱虫药物的筛选和研究有一定实用价值。猪带绦虫六钩蚴的体外培养是个极为艰难的过程 ,目前报道资料甚少。由于猪囊尾蚴是一种较为常见的病原体 ,而对其生物学、生理生化、免疫及治疗等方面的研究在一定程度上依赖于培养系统的建立 ,因此笔者进行了如下试验。1 材料与方法1 .1 材 料1 )供试猪带绦虫卵。病人服用“驱绦丸”后 ,排出的新鲜、成熟的孕卵节片 (经鉴定为猪带绦虫节片 ) ,作为供试虫卵。2 )人工胃液及人工肠液。称取 1 2 0m...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》1970年50期
中国兽医学报

猪带绦虫六钩蚴抗原基因的克隆与表达

猪带绦虫六钩蚴抗原基因的克隆与表达翟春生唐雨德顾志香(南京军区军事医学研究所,南京210002摘要以λgt11为载体构建了猪带绦虫六钩蚴cDNA文库,从中筛选出5株表达六钩蚴抗原成分的重组噬菌体。将其中的六钩蚴cDNA与表达质粒pGEX-4T2连接,在TG1大肠杆菌中高效表达,获得了2株表达GST-六钩蚴抗原融合蛋白(Mr分别为5×104和6×104)的工程菌。在LB营养液中添加1%乳糖和0.2%葡萄糖,工程菌的表达效果优于用IPTG诱导的效果。融合蛋白约占工程菌总蛋白的23%。关键词猪带绦虫cDNA文库基因克隆融合表达中图分类号S852.734Q78猪囊虫病是一种分布较广、危害严重的人畜共患寄生虫病,不仅给养猪业带来了巨大的经济损失,而且已构成严重的公共卫生问题。近年来,国内外学者对本病的免疫预防做了许多探索。用囊虫制作的“虫苗”有一定预防效果[1,2],用六钩蚴抗原接种可使宿主获得完全保护[3]。但是,要获得足够的囊虫或六钩...  (本文共3页) 阅读全文>>

《吉林农业大学学报》1950年40期
吉林农业大学学报

脑囊虫病人血清对猪带绦虫六钩蚴活力影响的研究

脑囊虫病人血清对猪带绦虫六钩蚴活力影响的研究耿进明,刘德惠,郑连舫(吉林农业大学囊虫病研究所长春130118)摘要本试验利用二甲基噻唑二苯基四唑法染色,判定六钩蚴的活力。结果表明,对照组六钩蚴的活力为27.3%~98.2%;试验组六钩蚴的活力为14.1%~70.9%。试验组与对照组之间差异极显著。关键词脑囊虫病,猪带绦虫,六钩蚴EffectofSerafromNearocysticercosisPatientsontheOncosphereachtivtyofTaeniaSodium¥GengJinming;etal.(Dept.ofAnimalScience,JilinAgriculturalUniversity,Chanchun130118)Abstract:Experimentresultsshowedthattheoncesphereactivityofcontrolgroupwas27.3%~98.2%,andtheo...  (本文共3页) 阅读全文>>