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用重组工程技术修饰E.coli染色体及建立新型重组疫苗载体研究

重组活菌载体疫苗是将所需的特异性抗原基因插入活细菌染色体或质粒载体中,提呈抗原以达到预防一种或多种疾病的新型疫苗。活菌载体疫苗在诱发机体产生黏膜免疫方面具有独特优点,也可产生细胞免疫和体液免疫应答。目前,作为该类疫苗载体的细菌主要是以减毒的微生物(如沙门氏菌)为主,该类疫苗载体存在临床上的毒副作用等问题。因此,有必要研究和建立更加安全有效的新型细菌疫苗载体。以正常大肠杆菌作为传染病疫苗载体或者肿瘤治疗载体的研究近年来受到了关注。大肠杆菌的遗传背景清楚,在体内无毒副作用,安全性好。其染色体DNA含有4.6×10~6个碱基,可以作为建立多价疫苗的一种大的载体。为了解决大肠杆菌的染色体DNA修饰、抗原基因有效表达、没有黏附侵袭能力的问题,本课题从以下四方面开展了研究:一、建立修饰大肠杆菌染色体DNA的技术平台,二、筛选外源基因在染色体上的高效表达位点,三、建立具有黏附和侵袭能力的重组大肠杆菌新菌株,四、重组疫苗载体的动物免疫评价。本研  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京师范大学
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寡核苷酸重组工程和CRISPR-Cas9联合介导的恶臭假单胞菌KT2440基因组编辑

重组工程也叫?-Red/ET同源重组技术,它是一种基于?噬菌体来源的重组酶催化DNA之间的同源重组而实现基因克隆与修饰的的一种基因工程操作手段。该技术实验过程操作简单,不需要克隆操作,不受到制性内切酶酶切位点以及DNA分子大小的限制,可以实现对基因组精确修饰的目的。而单链寡核苷酸重组工程技术可以在基因组上实现多个位点的同步编辑,相比于传统的重组工程更加简便和快捷。CRISPR-Cas系统(成簇规律间隔的短回文重复序列和CRISPR相关蛋白)属于细菌与古细菌在长期进化演变过程中形成的一种可以针对噬菌体的感染、质粒接合以及转化等基因导入而形成特异性的防御机制。目前,II型CRISPR-Cas9系统是研究的主要焦点,也是最广泛使用的基因编辑系统。该技术在基因组改造方面具有很高的编辑效率以及可编程性,现在已经成为一种在实验室中被广泛使用的基因编辑工具。恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonas putida KT2440)是一种最...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京师范大学
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寡核苷酸重组工程和CRISPR-Cas9联合运用于大肠杆菌基因组编辑

重组工程即为重组介导的基因工程,是指采用λ噬菌体来源的重组酶催化DNA之间的同源重组,因此,也称之为λRed重组工程。该技术由于操作简单,快速高效而成为实行DNA克隆和DNA修饰的一种常用基因工程手段。单链寡核苷酸重组工程可以在细菌基因组实行多个位点的同步编辑,相比传统的重组工程具有更加高的基因编辑效率。CRISPR-Cas系统,其中CRISPR是成簇规律间隔的短回文重复序列,而Cas是CRISPR相关蛋白,该系统正迅速成为从细菌到人类细胞系的基本编辑策略。CRISPR-Cas系统的特征在于具有几乎相同序列的定向重复,这些重复序列之间的间隔序列,被发现和很多能够侵入细菌的噬菌体DNA的部分序列相同,约50%的细菌和80%的古细菌通过CRISPR-Cas这一获得性免疫系统来防御病毒和其他入侵的核酸。CRISPR 系统中来自Streotococcus pyogenes SF370 TypeⅡCas9蛋白研究最为透彻,应用最为广泛,该...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品科学》2006年12期
食品科学

工业微生物菌种改良与重组工程技术

工业微生物菌种改良技术经历了诱变、遗传重组和基因工程技术改良菌种等三个发展阶段,第二代基因工程技术——基因打靶技术具有定位性强、打靶后新基因随染色体DNA稳定遗传的特点,使人们可以有目的地去改造生物的遗传物质,创造有利于生产的微生物新品种。重组工程技术是在大肠杆菌体内利用...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国改革》1996年01期
中国改革

坚持走集约化之路 实施“百家资产重组工程”

资产重组是推进改革开放和规模经济发展的最佳结合点,也是市直工业改制、改组、改造的突破口。今年以来,江苏...  (本文共2页) 阅读全文>>

《江苏警官学院学报》2014年03期
江苏警官学院学报

关于推进城市巡逻体制重组工程的思考——以扬中市公安局巡务区建设为视角

在实施城市巡逻体制重组工程的过程中,扬中市公安局紧密结合本地实际,提出了以巡务区建设引领城市巡逻体制改革的思路,通过整合警力资源、打破警种壁垒、重组巡逻力量、细化防控责任,逐步形成了指挥与管理相统一...  (本文共4页) 阅读全文>>