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靶向毒素DT_(389)-hbFGF的克隆表达及对人晶状体上皮细胞毒性研究

后囊混浊(PCO)是白内障囊外摘除术后引起视力下降的最常见的并发症,目前没有一种方法可常规应用于临床来阻止其发生,Nd:YAG激光后囊切开不仅可增加病人的经济负担,而且其所致的视网膜脱离、黄斑损伤等严重并发症可成为患者再度视力下降的根源。因此阻止PCO的发生比治疗显得更加重要。研究证实:术中残留的晶状体上皮细胞(LECs)增殖、迁徙并合成细胞外基质是PCO发生的主要机制,因此清除LECs是阻止PCO发生的根本。LECs不仅可分泌bFGF还可高表达具有高度亲和力的FGF受体;bFGF可终生在晶状体赤道部诱导上皮细胞分化为晶状体纤维,促进LECs的增殖;LECs受损后释放的bFGF与其表面受体结合可刺激其自身的增殖是PCO形成的重要因素。白喉杆菌外毒素(DT)不仅具有很强的细胞毒性而且其酶活性区、跨膜转运区、细胞膜受体结合区三者在结构上彼此独立,适于基因重组免疫毒素的构建及保持毒性功能。因此,本实验利用基因工程技术保留白喉毒素N端3  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

《眼科新进展》2017年10期
眼科新进展

17-β雌二醇对H_2O_2诱导氧化损伤的晶状体上皮细胞的保护作用

晶状体上皮细胞结构及功能的正常对维持晶状体透明度至关重要,一旦晶状体上皮细胞发生氧化损伤或凋亡,极易形成白内障。因此,抑制晶状体上皮细胞凋亡是预防白内障发生的关键[1-2]。17-β雌二醇具有很强的抗氧化能力,可以有效清除活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),抑制人体多个组织、器官的细胞凋亡,已经应用于预防和治疗心血管系统、内分泌系统、生殖系统及神经系统相关疾病[3]。研究证实,17-β雌二醇具有维持细胞内膜性结构(线粒体、内质网)正常功能的作用,通过减少细胞的钙内流、抑制脂质过氧化及抗凋亡作用维持晶状体正常结构[4-5]。本研究通过在培养基中加入外源性活性氧H2O2诱导晶状体上皮细胞凋亡,探讨17-β雌二醇对H2O2诱导的氧化损伤晶状体上皮细胞的保护作用。1材料与方法1.1实验材料和试剂人晶状体上皮细胞(美国ATCC公司),胎牛血清、17-β雌二醇(美国Sigma公司),活性氧分析试剂盒H2 ...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国际眼科杂志》2009年04期
国际眼科杂志

晶状体上皮源生长因子对高浓度葡萄糖诱导凋亡晶状体上皮细胞的保护作用

0引言 白内障是糖尿病最常见的眼部并发症之一。Taka-mura等[1]根据糖尿病大鼠模型出现LECs凋亡推测凋亡可能由高糖引起,这提示抑制LECs凋亡是控制糖尿病性白内障的一个有效策略。近年来,晶状体上皮源生长因子(lens epithelium-derived growth factor,LEDGF)以其优越的抗(外)环境应激能力受到诸多学者瞩目[2]。本实验通过高糖诱导建立LECs凋亡模型,并进一步研究LEDGF抗体在LECs凋亡过程中所发挥的作用,以探讨糖尿病性白内障的发病机制。1材料和方法1.1材料 试剂:美国GIBco BRL公司的DMEM培养基,制成含200mL/L胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)培养液;Annexin-v-FITC凋亡检测试剂盒;人LEDGF亲和纯化抗体(Biosis公司)。仪器:美国Becton-Dickinson公司FACSort型流式细胞仪;日本OLYPUS公司AU2700型全自动...  (本文共2页) 阅读全文>>

《国际眼科杂志》2008年04期
国际眼科杂志

高浓度葡萄糖体外对人晶状体上皮细胞整合素连接激酶表达的影响

0引言整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是一种具有多种生物学活性的信号通路中的整合素受体的细胞效应分子,参与了生物体内多种信号通路,包括整合素、生长因子和Wnt信号传导通路,在细胞外基质介导的信号传导中发挥重要作用。它通过与整合素β亚单位结合与整合素共同介导细胞与细胞外基质的连接,影响细胞外信号向下游的传递,对细胞的生长、分化、移行、凋亡、黏附、增殖以及细胞周期等进行调控。在肿瘤、肾纤维化等研究方面ILK得到了广泛关注。ILK在糖尿病引起的并发症中的作用正得到越来越多的重视。在糖尿病肾病方面的研究发现,糖尿病患者的肾小球中,ILK在肾小球系膜中表达增高,可能与肾小球的纤维化有关[1];在高浓度葡萄糖(简称高糖)作用下小鼠的肾小球系膜细胞ILK的表达增高,酶活性增强[2];短时间的高糖暴露使人肾小球系膜细胞中ILK表达增高,PKB/Akt磷酸化水平增加,抑制了高糖应...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国际眼科杂志》2008年08期
国际眼科杂志

人晶状体上皮细胞成纤维细胞生长因子受体蛋白的检测(英文)

I NTRODUCTIONWith the continuous development of molecular biologicaltechniques,the effects of basic fibroblast growth factor(bFGF)and its receptor on human lens epithelial cells(HLECs)became increasingly known by researchers.It ishopeful to control the amount of its protein and the biologicaleffects by using its antagonist or synergist in the future.Ourprevious study[1]has confirmed that there is the expression ofbFG...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国际眼科杂志》2008年07期
国际眼科杂志

碱性成纤维细胞生长因子基因在人晶状体上皮细胞内的表达

0引言后囊混浊的原因主要是由术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)增殖造成的,LEC的增殖原因为术后炎症刺激和损伤修复所致,细胞因子在这方面起重要作用。在人LEC中可检测到碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)蛋白[1],同样在白内障LEC中也存在[2]。而bFGF可促进LEC的增殖和纤维化[3],因此从基因表达方面对其进行研究,以探讨后囊混浊的发病机制。1材料和方法1.1材料新鲜眼球,巩膜剪开后固定、脱水、石蜡包埋,取材3μm。硅化的盖玻片小块放在24孔培养板上,细胞悬液滴在其上,培养数日,取出盖玻片,中性树脂贴于载玻片上。术中取下的前囊片,其细胞面朝上贴于载玻片上,室温干燥,放于700g/L乙醇中。1.2方法bFGF cDNA探针全长1410bp,由军事医学科学院提供,采用地高辛标记cDNA探针进行实验。冰箱取出细胞爬片和囊膜片,...  (本文共2页) 阅读全文>>