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GFP在南方根结线虫(Meloidogyne incogita)拮抗菌Alcaligenes faecalis研究中的应用

植物寄生线虫是农业生产中重要的传染性病原之一,使作物减产从而给农业生产带来重大损失。至今对线虫的防治还是以化学杀线剂为主,由于化学杀线剂的高毒、高残留对人类健康及环境造成潜在威胁,因此发展以微生物为主的生物杀线剂成为未来的发展方向。BC2000就是一株分离至根际土壤的线虫拮抗菌株。一系列室内和田间试验结果表明,BC2000作为植物生长促进剂和抗线虫生防菌剂具有潜在的应用价值,为了解该菌株在环境中的定殖、活动能力及作用方式,利用一个特殊标记对该菌株进行监测是很有必要的,而编码绿色荧光蛋白(GFP)的gfp基因就是一个最具应用前景的标记物。本研究以GFP作为拮抗菌BC2000的荧光标记物,通过标记菌表达的绿色荧光来监测它在根际及植物组织的定殖活动,并对标记菌株的生物学特性及生防功能进行研究。用16S rRNA基因克隆、测序及序列分析比对的方法,鉴定该菌株为粪产碱菌(Alcaligenes faecalis)。进而利用一个带gfp和l  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(植物研究所)
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酵母拮抗菌的抑病机理及生防效力改良的研究

相对于酵母拮抗菌的使用来说,人们对其作用机理了解得还不是很清楚。而了解拮抗菌的抑菌机理却是增强拮抗菌的生防效果以及进行拮抗菌筛选标准的重要前提。本文主要研究了酵母拮抗菌Pichia membranefaciens、Cryptococcusalbidus以及Crytococcus laurentii对水果采后软腐病、褐腐病以及青霉病的防治效果,拮抗菌与病原菌之间的相互作用,并对酵母拮抗菌与外源物质配合使用,以及通过遗传改良途径来提高酵母拮抗菌生防能力等进行了初步研究。实验结果如下:1、 酵母拮抗菌P.membranefaciens、C.albidus以及C.laurentii能在果实伤口大量繁殖。采用扫描电镜技术,观察发现在桃果实伤口处P.membranefaciens能紧密地吸附在软腐病菌Rhizopous stolonfier的菌丝体上;C.laurentii与青霉病菌 Penicillium expansum在苹果果实伤口处...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(植物研究所)
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酵母拮抗菌的抑病效力、规模化培养及相关机理研究

我们实验室从果实表面分离获得的酵母拮抗菌已经证明能有效防治各种果实采后主要病害,为了加快生物拮抗菌的商业化应用,本文在完善拮抗菌抑病机理的基础上,重点研究了拮抗菌规模化培养条件,生物菌剂制品的稳定性,以及拮抗菌对环境胁迫的生理反应。主要研究内容包括:(1)分析酵母菌拮抗菌、病原菌与果实之间的互作效应及其影响因子; (2)筛选酵母拮抗菌规模化培养的最佳营养配方及培养条件; (3)优化酵母拮抗菌干粉与液体剂型的制备方式; (4)研究酵母拮抗菌在不同剂型中生活力下降的可能机理; (5)探讨酵母拮抗菌次生代谢产物的抑菌效果。研究结果如下: 1、单独接种Monilinia fructicola或同时接种M. fructicola和Cryptococcus laurentii均能诱导甜樱桃果实SOD、CAT和POD等抗氧化酶活性升高并加速脂质过氧化,同时伴有PPO同工酶新酶带出现。病原菌M. fructicola和Penicillum ex...  (本文共162页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(植物研究所)
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拮抗菌和化学物质的抑病机理及果实抗病相关基因的克隆

真菌病害是造成采后新鲜水果损失的一个主要原因。生物拮抗菌能有效地防治果实采后腐烂,降低杀菌剂的用量,从而增加了食品安全性和降低了潜在的环境危害。然而,与化学杀菌剂相比,单独使用生物拮抗菌对果实采后病害的控制效果有时不如化学杀菌剂明显。因此,为了提高拮抗菌的生防效力,有效控制果实的采后病害,本文主要研究了拮抗菌与化学物质使用的防病机理,并从冬枣果实中克隆β-1,3-葡聚糖酶基因并对其特性进行了初步分析。研究结果表明: 1.酵母菌Cryptococcus laurentii和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis能够有效的防治冬枣果实采后青霉病和黑霉病的发生,而且C. laurentii对病害的防治效果比B. subtilis好。拮抗菌的抑病效果与使用浓度成正比。在接种C. laurentii的伤口上再接种病原菌可以显著刺激酵母菌的生长。然而,在接种B. subtilis的伤口上接种病原菌则不增加拮抗细菌的群体数量。2.不同...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(植物研究所)
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海藻糖提高酵母拮抗菌生活力和生防效力的作用机制

近年来,利用酵母拮抗菌进行果实采后病害的生物防治已经成为果实采后领域的研究热点。但是,在实际应用中生物拮抗菌制剂的防病效果远不如化学药剂稳定。由于生物拮抗菌是活体,生活力和生防效力易受诸多因素影响。在商品化制剂的剂型加工、销售、以及使用过程中的环境条件往往影响酵母拮抗菌的生活力和抑病能力,成为酵母拮抗菌产业化生产和商品化应用过程中的一个主要障碍。将酵母拮抗菌和其它化学物质配合使用可以提高拮抗菌的生防效力。另外,增加酵母拮抗菌对逆境条件的耐受力也是增加或稳定其防治效果的有效途径。本文研究了海藻糖与酵母拮抗菌生活力和生防效力的关系,通过生理手段提高了酵母拮抗菌内源海藻糖的含量,同时探讨了在多种逆境条件下内源海藻糖含量对酵母拮抗菌生活力和生防效力的影响及其作用机制。主要研究结果如下:1.以1 %海藻糖作为碳源培养酵母拮抗菌Cryptococcus laurentii可以提高其内源海藻糖含量。在in vitro试验中,提高内源海藻糖含量...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(植物研究所)
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果实对酵母拮抗菌和外源水杨酸诱导的抗病性应答机理

用生物和非生物因子来进行采后病害的防治,是一个非常有效的方法。诱导抗性作为控制果蔬采后病害的生物技术,已成为该领域的一个研究热点。然而诱导抗性的机制非常复杂,涉及到寄主、病原菌、激发子之间的相互作用关系。本研究主要利用酵母拮抗菌Pichia membranefaciens和SA处理果实,观察其抗性诱导表达和对采后青霉病菌(Penicillium expansum)的抑制作用,并从蛋白质组学水平上对诱导抗性的机理进行了分析。研究结果表明:1、酵母拮抗菌P. membranefaciens (5×107 cells?ml-1)和SA(0.5 mM)处理采后甜樱桃果实,能够明显地降低病害的发病率和病斑直径。酵母菌和SA处理影响到了果实抗氧化酶的活性,同时还改变了POD同工酶谱和甜樱桃果实的总蛋白含量,并诱导了新的蛋白质条带产生。用光学显微镜和扫描电子显微镜技术观察发现,在in vitro条件下P. membranefaciens能够紧...  (本文共151页) 本文目录 | 阅读全文>>