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转录因子MEOX2相互作用蛋白的鉴定研究

研究背景:血管平滑肌细胞的增殖在动脉粥样硬化的发生发展及球囊血管成形术后及冠脉搭桥术后再狭窄的发生中发挥了非常关键的作用。与血管平滑肌细胞相反,心肌细胞在心肌梗死等心肌损害后增殖却往往不足以补偿损害所造成的心肌细胞丧失。因此,减少动脉粥样硬化时血管平滑肌细胞的增殖及促进缺血性心脏病时心肌细胞的增殖将是治疗心血管疾病的理想方法。同源盒基因包含一个由60个氨基酸组成的螺旋—转角—螺旋结构,同源盒基因可以通过该结构结合到DNA的大沟,该结构在进化上高度保守,称为同源结构域。同源盒基因编码的蛋白质是一大类的转录因子。同源盒基因主要功能是调控胚胎发育时的细胞生长及分化,成年期某些病理情况下细胞的生长及分化也受同源盒基因的调控。以往的研究表明Meox2的过度表达可以诱导血管平滑肌细胞及心肌细胞的细胞周期停滞。也有研究表明,Meox2的异常表达可以通过诱导细胞周期停滞及凋亡而减少血管损伤后的再狭窄。这些发现支持Meox2具有调控病理情况下血管  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

人新基因EOLA1生物学特性及相互作用蛋白研究

严重烧伤患者由于外源性细菌入侵或肠源性细菌和内毒素移位,易于诱发脓毒症(Sepsis),引起失控性炎症反应,临床上预防和治疗措施都十分棘手,死亡率极高。目前已证实内毒素(Lipopolysaccharide, LPS)是脓毒症的主要启动子,LPS与可溶性CD14分子结合活化血管内皮细胞,内皮细胞的活化在脓毒症的发生、发展中具有重要作用,阐明内皮细胞活化和功能改变机制对于重度烧创伤患者的救治具有十分重要的理论和实践意义。我室长期致力于烧伤早期血管内皮细胞损伤机制方面的研究,内皮高表达脂多糖相关因子1 (endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1, EOLA1)系我室于2002年应用抑制消减杂交技术发现,并以人类新mRNA登陆到Genbank nr库(No.AY074889)。阐明人类新基因的功能是一项非常困难,但意义重大的工作。随着对多种重要生物...  (本文共140页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)

白色念珠菌Crk1相互作用蛋白的筛选与功能研究

CRKI是从白色念珠菌中克隆到的一个C刀CZ相关的蛋白激酶基因,它参与调控白色念珠菌菌丝生长,并对白色念珠菌的致病能力有重要影响。为研究它的作用机理,我们利用LexA酵母双杂交系统,把白色念珠菌染色体DNA用Sau3AI部分酶解并融合于LexA的激活结构域(AD),构建了AD融合的白色念珠菌基因组表达文库。文库含独立转化子7.7x1o“个,包含DNA总长度约为1.2x1O5 kb,约覆盖白色念珠菌基因组全长的10倍,是研究白色念珠菌信号转导途径的重要资源。我们把Crkl(l一748aa)与LexA的DNA结合区融合,作为诱饵筛选白色念珠菌基因组表达文库,在9x1O5个转化子中获得8个Leu、LacZ双阳性克隆,经酶切鉴定与序列分析其插入片段有3种,编号为瓦刀、瓦了2、瓦了3。经序列同源性比较,这些插入片段分别与酿酒酵母基因STll、尺石T2和刀2叮Z具有最高同源性。进一步用CrklN端的激酶活性区和C端非激酶区与这3种蛋白相互作...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

肿瘤抑素(tumstatin)的克隆、融合表达,生物学活性研究及其相互作用蛋白的筛选

新生血管形成(angiogenesis)是从已存在的血管腔中长出新的毛细血管的过程。在成年人,新生血管形成对正常生理过程如伤口修复、女性月经周期以及子宫内膜重塑至关重要。然而,不受控制的病理性新生血管形成总是伴随着疾病状态如糖尿病引起的视网膜病变、类风湿关节炎以及肿瘤的生成和转移。肿瘤的生长和转移依赖于新生血管形成,它对超过mm~3体积的实体瘤生长和生存起着关键作用。血管长入瘤体和肿瘤细胞旁分泌刺激最终导致肿瘤体积增大。肿瘤的生长和转移依赖于新生血管形成,这就为抑制肿瘤新生血管形成治疗策略提供了依据。基底膜是一薄层细胞外基质,它不仅提供各种细胞的支持结构,而且在很大程度上影响它们的生理行为诸如细胞分化和增殖。Ⅳ型胶原是组成血管基底膜的主要大分子物质之一,通常Ⅳ型胶原促进细胞的粘附、迁移、分化和增殖。它由6条不同的α链,即α1-6,并以不同或相同的α链组成三聚体,进一步形成网络为其它大分子提供支架。胶原Ⅳ的每条α链由3部分组成:N...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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人类新蛋白NTKL-BP1及其相互作用蛋白的生物学功能研究

人类基因组计划的完成,宣告了“后基因组时代”的到来,对新蛋白的生物学功能研究成为了当前的热点。hNTKL-BP1基因是本实验室从人胎盘cDNA文库中克隆得到的一个新基因。本论文对hNTKL-BP1蛋白及其相互作用蛋白hPirh2的功能进行了初步研究。通过RT-PCR实验,我们发现hNTKL-BP1基因在16种成人组织中广泛表达,在心脏、肝脏、胰腺、脾胸腺、和前列腺中表达量较高。Northern杂交结果显示hNTKL-BP1基因具有两种大小不同的剪接本。我们又从人胎肝cDNA文库中克隆得到了较小的剪接本hNTKL-BP2,并对两种剪接本所编码蛋白的结构和细胞定位进行了比较。hNTKL-BP1和hNTKL-BP2的C端结构的差异和细胞定位的不同预示了两者在细胞中行使不同的生物学功能。生物信息学分析发现,hNTKL-BP1与Dynatin家族成员有一定相似性,尽管酵母系统的功能互补实验表明hNTKL-BP1并不具有与酵母中Dynati...  (本文共110页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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SGT及其相关蛋白功能的研究

SGT(small glutamine-rich tetratricopeptiderepeat TPR)克隆于1998年,由313个氨基酸组成,其C末端有一段富含谷氨酰氨的序列,中间含有三个串联重复的TPR结构域。近年来的研究表明,SGT能够与热休克蛋白家族的Hsp70和Hsc70相互作用并调节其分子伴侣活性,而Hsp70和Hsc70的分子伴侣活性可以拮抗热休克、血清饥饿、化疗药物等引起的细胞凋亡,不仅如此,CHIP、TPR2、Strap这些含有TPR结构域的蛋白均以不同的方式参与了细胞凋亡的过程。为了弄清SGT是否也参与了细胞凋亡的过程,我们首先建立了SGT超表达的SMMC-7721稳转细胞株,用放线菌酮(CHX)处理稳转空载体的SMMC-7721和稳转SGT的SMMC-7721细胞后,分别用PI染色,AnnexinV和PI双染,DNA片段化降解检测,凋亡小体分析,Hoechest染色观察均证实SGT可以促进CHX诱导的77...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>