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黄孢原毛平革菌不同代谢阶段差异表达基因研究

黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)属于白腐担子真菌,是研究木质素生物降解的模式生物,该菌的基因组序列已由美国联合基因研究所测定完成。P.chrysosporium在进入次生代谢时产生2类依赖于H_2O_2的过氧化物酶—木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP),它们是降解木质素的主要酶类。早期的生理学研究表明,这2类酶的产生受营养因子、通氧量等因素影响。分子生物学研究表明,这两类酶均由基因家族编码,培养基中的氮、碳、热激、锰离子、分子氧等因素在转录水平上影响这些基因的表达,但其在次生代谢期间的转录调控机理仍然不清楚。阐明P.chrysosporium参与进入次生代谢过程中调控基因的表达规律不但有利于理解该菌的木质素降解机理,而且有利于利用这种真菌。本文就P.chrysosporium的次生代谢调控基因的克隆和表达展开了较系统的研究,取得了相应的研究结果。首先,用抑制消减杂交(Supp  (本文共204页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(lipC)转录调控因子的研究

黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)属于白腐担子真菌,是研究木质素生物降解的模式生物,因其具有出色的降解木质素的能力,而且对环境中的有毒物质、爆炸污染物等也有降解作用,因此P. chrysosporium在造纸工业、环境保护等方面具有重要的应用前景。研究表明,P.chrysosporium降解木质素是由众多的胞外过氧化物酶参与的复杂的生物过程,LiP和MnP是主要的2类过氧化物酶。Northern blot和RT-PCR分析表明。这2类酶均受到C、N、O等因素的调节,暗示在其基因的5’-端可能存在顺式调控元件与反式作用因子相互作用调控基因的转录。已有的研究表明,在lipC 5’-端存在2个蛋白质结合元件——PBE1和PBE2。本研究在这一工作的基础上做了如下两方面的研究工作。首先,分别以PBE1、PBE2和PBE1+PBE2为钓饵,利用酵母单杂交技术对低氮培养基中培养3d P. chrysos...  (本文共178页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)转化系统的建立及木质素酶cDNA的同源表达

首先采用PCR技术从质粒pAN7-1中扩增来自大肠杆菌的潮霉素磷酸转移酶基因编码区序列,将该编码区DNA片段克隆到质粒中间载体pSUGV2中,得到质粒pHYG; 然后从质粒pUGLG2中用限制性酶切的方法,分离黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)木质素过氧化物酶基因lip6的终止子序列,并将其克隆到质粒pSUGV1中,得到质粒pGLG2-T; 最后从质粒pHYG中切出潮霉素磷酸转移酶基因编码区片段,插入到质粒pGLG2-T中,由此所获得的重组质粒即是以潮霉素磷酸转移酶基因为报告基因的启动子探针型载体,命名为pSUPV8。用该启动子探针型载体直接在大肠杆菌中克隆到6个来自黄孢原毛平革菌的具有基因启动子活性的DNA片段(分别命名为CH1~CH6),DNA片段的大小在0.1-2.1 kb之间。对其中具有代表性的基因启动子片段CH6的结构和功能作了较为详尽的研究。该片段长约1.1 kb,赋予大肠杆菌3...  (本文共141页) 本文目录 | 阅读全文>>

《湖南科技大学学报(自然科学版)》2018年02期
湖南科技大学学报(自然科学版)

固定化黄孢原毛平革菌对邻苯二甲酸二乙酯的降解效果研究

邻苯二甲酸酯(Phthalic Acid Esters,PAEs)是驱虫剂、化妆品、润滑剂和去泡剂等的主要生产原料.大量PAEs的使用和排放使其广泛存在于空气、水体、土壤等环境介质中[1-3],对生态环境系统造成危害.极低浓度的PAEs就足以干扰人的内分泌系统,产生类雌激素效应,引起神经和免疫系统失调[4].PAEs是一种重要的环境内分泌干扰物及致癌、致畸、致突变物质[5].因此,对PAEs污染的治理刻不容缓.目前,有关PAEs的治理方法主要有非生物降解法和生物降解法.非生物降解法包括水解和光解等,PAEs水解和光解速度都较慢,而且仅能使PAEs得到初步降解,并不能使其完全矿化;生物降解法成本低、效率高、对环境无二次污染[6],是自然环境中PAEs的主要矿化途径[7].因此,生物降解是PAEs污染治理的研究重点,近年来得到了快速的发展.白腐真菌为丝状真菌,能够分泌多种胞外酶降解木质素,并且其分泌的木质素降解酶对底物的专一性较低,...  (本文共6页) 阅读全文>>

《生物技术世界》2016年02期
生物技术世界

黄孢原毛平革菌降解土霉素的影响因素及酶活分析

随着现代工业在发展,许多重金属进入到生态系统中,同时人与动物在治疗过程中还向生态环境中投放了大量抗生素。重金属与抗生素具有连续性与积累性的特征,对环境带来永久性污染,对空气、水等造成了严重破坏。生物处理技术花费成本低,具有可靠的操作工艺,污染较少,受到人们的普遍关注。黄孢原毛平革菌具有氧化特性和对木质素降解没有底物特异性[1]。黄孢原毛平革菌具有独特的吸附与分解能力,被认为是一种有效的生物修复剂。文章在具体研究时,在固化于分固化的条件下,分析了不同浓度对黄孢原毛平革菌的影响。采用固定方法,处理黄孢原毛平革菌后,显著提升了降解效果与酶的活性。1实验材料与方法1.1主要实验仪器(1)电子分析天平(BS224S,北京);(2)高效液相色谱(LA.10A,日本));(3)旋片式真空泵(2XZ.2,临海);(4)电炉、石棉网、牛皮纸等,恒温水浴锅、培养皿等。1.2方法1.2.1制备实验菌种和孢子悬浮液在4℃时,培养真菌培养物,放置到马铃薯...  (本文共2页) 阅读全文>>

太原理工大学
太原理工大学

黄孢原毛平革菌在煤体中代谢—传输的实验研究

煤的原位微生物转化是一项成本低、环境友好、可实现原位煤炭资源流态化开发的一种新方法,实验室煤的高效生物液化以及原位微生物增产煤层气的工业试验均证实了生物法实现煤的原位转化具有很大的发展潜力。无论是注入外源菌,还是刺激强化本源菌来提高产率,微生物在煤体多孔介质中的有效传输与代谢是生物法原位转化的关键技术,目前还有许多问题亟待深入研究。本文从微生物的代谢-传输理论分析入手,在优选降解煤菌株的基础上,设计菌株驯化方案,通过煤的微生物降解实验、煤吸附微生物实验、煤体内微生物代谢-传输等实验,揭示了微生物传输过程的滞留和降解对对流-弥散的影响规律,并在此基础上对固体煤的原位生物流态化开采的工程应用进行了初步设计。主要研究内容与结论如下:1、建立了煤体中微生物代谢-传输-煤体变形物理数学模型。将微生物降解固体煤的多阶动力过程简化为液化-气化两阶段模型,量化了该模型的气/液源汇项;考虑非饱和煤体多孔介质中的两相三组分传输:气液两相在源汇项影响...  (本文共144页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西农业大学
山西农业大学

黄孢原毛平革菌及黑曲霉降解秸秆同步发酵生产乙醇的研究

以玉米秸秆为原料,利用黄孢原毛平革菌降解秸秆原料中的木质素,使黑曲霉混合菌产生的纤维素酶更易与秸秆纤维素接触,降解为还原糖,利用酿酒酵母将还原糖快速转化为乙醇。木质素降解、纤维素降解与糖化发酵工艺同步进行能快速的将纤维素水解产生的糖发酵为乙醇,解除对纤维素酶的反馈抑制作用,从而加快降解速率。本文通过酶活力的测定从高产纤维素酶的菌株中筛选出优秀菌株,构建复合菌系,提高了产酶效率。选用酿酒酵母将复合菌系降解秸秆中纤维素产生的糖类物质,后发酵生成乙醇。将秸秆木质素降解、纤维素降解、发酵乙醇微生物复合,研究微生物的最优生长和发酵条件。主要结论如下:(1)测定了各菌株的内切葡聚糖酶活、滤纸酶活(FPA)、外切葡聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活,从D系列(堆肥中分离培养的优势菌株)、Z系列(植物枝干中发现的优势菌株)中筛选出优良菌株D2、D2-1、Z14。(2)将不同系列、同系列优良菌株进行两两组合,以4种酶活为指标,确定高效产纤维素酶混合菌系为...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>