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肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体对人膀胱癌治疗作用的实验研究

第一部分肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)基因克隆及真核表达质粒构建目的:采用RT-PCR方法获得全长cDNA,并构建其真核表达质粒pcDNA3.1-TRAIL。方法:收集3x10~6个Jurkat淋巴瘤细胞,Trizol试剂提取总RNA。经RT-PCR反转录,将细胞总RNA中的mRNA反转录成cDNA第一链,以cDNA为模板,dNTP,Taq酶等进行PCR反应,产物经琼脂糖凝胶电泳初步鉴定,经DNA凝胶回收试剂盒回收纯化后进一步测序证实。上游引物为:5′AGAATTCAGGATCATGGCTATGATGG3′,5′含有EcoRI的酶切位点下游引物为:5′GAAGCTTCCAGGTCAGTTAGCCAACT3′,5′含有Hind Ⅲ的酶切位点PCR产物经EcoRI、HindⅢ酶切后,回收酶切产物。插入经同样酶切的质粒PcDNA3.1中,T_4DNA连接酶连接过夜,构建成真核表达质粒PcDNA3.1-TRAIL。PcDNA  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合丝裂霉素C治疗膀胱癌的实验研究

第一部分肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体以及联合丝裂霉素C对人膀胱癌细胞作用的体外实验目的检测肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(Tumor necrosis factor relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)对人膀胱癌细胞株体外生长的抑制作用和凋亡作用,以及TRAIL联合丝裂霉素C(MMC)治疗膀胱癌的协同作用。方法人膀胱癌细胞株T24、5637体外培养。将T24、5637膀胱癌细胞接种至96孔培养板,培养24h后分别加入浓度为1、10、100μg/L的TRAIL,0.1、1.0、10.0mg/L的MMC,不同浓度TRAIL和MMC作用24h,采用噻唑蓝比色(4,5-dimethy thiazoleor 2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法分别检测膀胱癌细胞的生存率,并将单独用TRAIL、MMC与TRAIL联合MMC对膀胱癌细胞株T24、5637的生长抑制...  (本文共104页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

骨髓基质细胞来源的新型凋亡诱导分子LAPF的功能研究:LAPF募集磷酸化p53(ser-15)至溶酶体介导的细胞凋亡通路

细胞凋亡(apoptosis)是多细胞生物体内高度保守的生物学过程,在个体的生长发育以及存活过程中起着重要作用。研究表明溶酶体(lysosome)参与多种细胞凋亡过程,包括病理状态下的细胞凋亡和生理性细胞凋亡如细胞衰老过程中出现的凋亡。在细胞凋亡进程中,溶酶体膜通透性增高发生于凋亡早期,在线粒体变化之前,并负责进一步触发下游的凋亡信号转导途径,因此溶酶体在细胞凋亡中起着重要作用。本文所研究的新分子来源于骨髓基质细胞。该分子能够通过转位至溶酶体进而促进溶酶体膜通透性增高,来实现其促细胞凋亡功能。结合该分子含有PH和FYVE功能域的结构特征,将其命名为LAPF(lysosome-associated and apoptosis-inducing protein containing PH and FYVE domains)。一、新蛋白家族Phafins的鉴定和LAPF的序列分析及组织分布经大规模随机测序,我们从人骨髓基质细胞(BMS...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

人巨细胞病毒对多发性骨髓瘤细胞的感染及其对细胞凋亡的抑制作用研究

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV,或CMV)属β疱疹家族,在人群中感染非常普遍。正常人机体内,CMV处于一种潜伏的状态,但在免疫功能受损的患者(如器官移植、恶性肿瘤、AIDS病)体内,CMV可被激活,进而引起一系列的临床症状。目前,CMV在体内的活化或潜伏细胞尚不十分明确,有研究发现,CMV在体外可感染多种细胞,包括一些肿瘤细胞,而且CMV感染细胞后,可通过多种机制抑制细胞发生凋亡。有报道血液系统肿瘤患者常发生CMV感染,而CMV活化更是血液系统肿瘤患者进行造血干细胞移植后常见的并发症,但CMV对肿瘤细胞或造血干细胞移植后的残余肿瘤细胞有何影响,尚不清楚。大量研究发现,多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者进行自体造血干细胞移植或CD34+分选的干/祖细胞移植后,极易发生CMV的感染。并且在自体造血干细胞移植患者中,MM患者较白血病及其它疾病的患者,CMV更易活化。另外,有报...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖北中医学院
湖北中医学院

黄角颗粒抗大鼠急性缺血性神经细胞凋亡及其机制研究

目的:防治缺血性神经细胞凋亡是目前缺血性中风治疗中的研究热点,中西医均在寻找解决途径。我们的临床研究表明:黄角颗粒对急性期脑梗死有较好的临床疗效。为了观察黄角颗粒对缺血性神经细胞凋亡的拮抗作用并探讨其可能作用机制,为该药临床应用提供坚实的理论依据,设计了本实验。方法:动物及分组:选用60只健康Wister老年大鼠,雌雄各半,体重300±20g,随机分为六组:即正常组,模型组,中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组,尼莫地平对照组。造模及给药方法:造模前30分钟,中药大、中、小剂量组分别用100%,50%,25%黄角颗粒水溶液按10g/Kg,5g/Kg,2.5g/Kg体重灌胃,尼莫地平对照组用1%的尼莫地平水溶液按10mg/Kg体重灌胃,模型组与正常组用0.9%生理盐水按10ml/Kg体重灌胃。除正常组外,其余各组大鼠采用大脑中动脉线栓法动物模型。取材及检测方法:造模24小时后,断头处死大鼠,取大脑用TUNEL法检测大脑皮层神经...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

沈阳药科大学
沈阳药科大学

中草药活性成分DRG和HS-2抗癌活性的细胞分子生物学研究

本论文以寻找天然抗癌活性化合物并探讨其抗癌作用机理为主要方向。首先采用四甲基偶氮唑盐即MTT法,利用人慢性骨髓性白血病K562(human erythroleukemia)和人大肠癌HCT-15(human colon carcinoma)两种细胞系,对128种抗癌中草药单体成分进行了体外抗细胞增殖活性的初步筛选。结果发现,在所选用的四种浓度下(100、50、25、12.5μg/ml)对K562细胞增殖均有明显抑制作用的样品有6种:DRG、HS-2、S11、S23、S31、S37;对HCT-15细胞增殖均有明显抑制作用的样品有7种:DRG、HS-2、S11、S23、S31、YIA5、YIA59。其中DRG和HS-2在100、50、25 μg/ml时,主要表现为细胞毒作用,而在12.5μg/ml时,显示有细胞毒和细胞凋亡作用。文献检索发现DRG和HS-2均为已知化合物,但DRG的抗癌活性为本研究首次发现。我们运用多种方法对这两个化...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

Apoptin亚细胞定位机理研究

Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒、由121氨基酸组成的小蛋白,能诱导雏鸡造血母细胞和T淋巴细胞前体细胞凋亡,导致雏鸡出现严重的贫血和免疫机能低下。Apoptin还能诱导人转化细胞和肿瘤细胞凋亡,但对正常的人二倍体细胞无凋亡诱导作用。因此,Apoptin被认为是第一个真正意义上可选择性诱导肿瘤细胞凋亡而不损伤正常细胞的凋亡蛋白。Apoptin诱导细胞凋亡活性与其亚细胞定位密切相关。在正常细胞中,Apoptin定位于细胞质,不能诱导肿瘤细胞凋亡;而在肿瘤细胞中,Apoptin定位于细胞核中,能够诱导肿瘤细胞凋亡。所以,揭示Apoptin在肿瘤细胞和正常细胞中具有不同亚细胞定位的机制对于深入认识Apoptin诱导细胞凋亡的机理、探寻肿瘤细胞和正常细胞的本质差别具有重要意义。为研究Apoptin在肿瘤细胞和正常细胞中亚细胞定位的机理,首先考察了带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence prote...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>