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人类白血病细胞中WT1及其下游基因的表达调控

目的1 探讨WT1 基因启动子和增强子调控基因表达的组织特异性;2 探讨RbAp46 基因在白血病发生、发展中的作用;3 探讨IGFBP-rP1 基因与白血病发生、发展的关系。方法1 利用DNA 重组技术分别构建含WT1 基因启动子和增强子的载体。2 转化大肠杆菌DH5α,碱裂解法抽提质粒进行酶切鉴定,利用QIAGEN 去内毒素大剂量质粒纯化试剂盒纯化质粒。3 优化电穿孔和脂质体转染条件,分别将含有WT1 基因启动子、WT1 基因启动子和增强子及空载体的质粒转染肿瘤细胞株中,包括WT1 基因高表达的造血细胞株K562、NB4、THP-1、SHI-1,WT1 基因低表达的造血细胞株U937、Jurkat;WT1基因高表达的非造血细胞株MCF-7、T47D、293,WT1 基因低表达的非造血细胞株ECV304、SMMC7721、HT-29、SHG44。4 合适剂量的G418 筛选2-4 周,用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白的平均荧光强度  (本文共157页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
中国人民解放军军医进修学院

IGSF4基因在白血病细胞甲基化失活的初步研究

抑癌基因甲基化失活已成为白血病发生的重要机制之一。寻找新的在白血病细胞中甲基化失活的基因已成为目前白血病研究中的一个重要任务。于力通过甲基化敏感性限制性路标基因组扫描技术技术比较了来源于正常和白血病小鼠的脾脏细胞DNA甲基化模式,发现了50个DNA启动子甲基化的白血病相关基因。由于小鼠基因组与人类有较高的同源性,这些基因对人类白血病的研究具有很高的价值。本实验选取了其中的4个:SEMA6A、B56、IGSF4和SLIT2,对其进行进一步筛选,希望从中发现在人类白血病也存在DNA启动子甲基化的基因。为探讨SEMA6A、B56、IGSF4和SLIT2在人类白血病是否存在甲基化失活,本研究应用RT-PCR检测了这4个基因在HL60、U937和Molt4等3种常见的白血病细胞系的表达情况;应用5-杂氮脱氧胞嘧啶处理上述白血病细胞系,观察去甲基化处理对失活基因的影响;应用生物信息学技术分析了IGSF4基因的表达谱,应用RT-PCR检测了I...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

Flt3及4-1BBL分子在单核细胞和单核系来源白血病细胞中的作用及其机理

Flt3表达于多能干细胞(multipotential stem cell)、髓系和淋系前体细胞(precursor),而单核系的发育过程中,Flt3持续表达。Flt3信号参与了造血干细胞的更新和定向分化。Flt3分子是目前公认的与白血病发生发展机理和治疗密切相关的重要靶分子。4-1BBL/4-1BB为共刺激分子TNF/TNFR超家族中的重要成员,4-1BBL分子表达于各种活化的抗原递呈细胞(APC)和活化T细胞等免疫细胞。4-1BBL分子尚表达于某些肿瘤细胞,如白血病细胞,且与白血病细胞的生存和增殖有关。为研究Flt3和4-1BBL逆向信号在单核细胞和单核系白血病细胞中的作用,本研究选择共表达4-1BBL和Flt3的单核细胞与单核系白血病细胞为研究对象,克隆表达了人全长Flt3分子并成功研制了抗人Flt3单克隆抗体,进而探讨了其生物学特性;利用抗人Flt3抗体和抗人4-1BBL抗体,初步探讨了Flt3信号和4-1BBL逆向信号...  (本文共128页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建医科大学
福建医科大学

ZnPcS_2P_2介导的光动力疗法对造血系统恶性肿瘤作用的实验研究

白血病是严重危害人民健康的常见血液系统恶性肿瘤,高剂量化疗联合造血干/祖细胞移植已成为最终治愈白血病的有效途径。与异体造血干/祖细胞移植相比,自体移植具有植活容易、无移植物抗宿主病、无需配型、不存在供者来源问题等诸多优点,具有重要的临床应用价值。然而,自体移植物中残留的白血病细胞可引起白血病复发。因此,寻找有效而简便的体外净化方法是自体移植成功的关键,国内外学者在此领域开展了大量工作,如物理净化法、化学净化法、免疫净化法、生物净化法等;但是,由于种种缺陷限制了它们的实际应用。体外净化的关键是尽可能地杀灭残存的白血病细胞,同时尽量保存正常的造血干/祖细胞,光动力疗法(PDT)为此提供了可能。PDT治疗肿瘤的基本原理是:光敏剂(PS)接受特定波长光的光能后,通过光化学反应和能量传递过程将光能转化为分子内能,在有氧条件下,产生多种活性氧物质(ROS),使细胞的结构和功能受到严重影响,从而干扰肿瘤细胞的生长并导致其死亡。然而,PS本身对...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖南大学
湖南大学

新型压电免疫传感技术用于白血病等重大疾患诊断的研究

急性白血病的免疫分型即利用特定单克隆抗体识别白血病细胞分化抗原的一种临床诊断手段,对于急性白血病的准确诊断、治疗方案的选择、预后的判断以及病因的探索等具有十分重要的意义。然而,目前临床上采用的主要急性白血病免疫分型方法普遍表型速度慢、定量能力低、操作复杂、仪器昂贵且需要专业技能,尚只能在少数实验室应用。从而开发一些简便、廉价、定量准确且易于临床推广的免疫传感分型技术是一件很有价值的工作。此外,近年来,一些人畜共患的传染性疾病肆虐人类,特别是一些原已得到控制的寄生虫病又有死灰复燃的趋势,其中以血吸虫病和弓形虫病最为典型,传播广泛且危害严重,成为世界上亟待解决的一个严重公共卫生问题。然而,当今寄生虫病的临床诊断检测方法,要么分析灵敏度低,要么操作繁琐费时,远不能满足目前寄生虫病防治工作的需要。因此,建立准确、快速、方便携带于现场疾病筛查和突发性疫情监控的寄生虫病诊断技术成为当务之急。利用化学与生物传感技术检测疾病标志物进行临床疾病的...  (本文共156页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

丝裂原活化蛋白激酶信号转导系统在白血病细胞分化和凋亡过程中的作用及其分子机制研究

目的丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein Kinases,MAPKs)信号转导系统是细胞外信号引起核反应的细胞信息传递的共同通路,它是一族细胞内广泛分布的含有丝氨酸/苏氨酸残基的蛋白激酶,包括细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK)、C-JUN氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinases,JNK)和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 Mitogen-Activated Protein Kinases,p38)三个主要成员。多种细胞外刺激(如:应激、细胞因子及某些药物等)或是通过G蛋白偶联受体或是通过酪氨酸蛋白激酶的活化,均可将信号传至细胞内,引起MAPKs系统激酶连锁磷酸化,最终通过调节转录因子,参与转录和翻译,调控多种细胞事件如增殖、分化和凋亡的进程。K562细胞是来自慢性粒细胞白血病急性变的细胞系,在不同的诱导...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>