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鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株部分生物学特性的研究及荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用

本论文对鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)部分生物学特性及荧光实时定量PCR对其检测方法的建立和应用进行了研究,主要内容可归纳如下:1.对DEV-CHv进行了适应在DEF上生长的研究。10日龄鸭胚经胰酶消化和机械分散后,其成纤维细胞在含10%小牛血清的MEM营养液中生长36h左右后成为致密的细胞单层。DEV-CHv人工感染成年健康鸭后,取病死鸭肝脏组织接种绒毛尿囊腔经10日龄鸭胚连续传代2次,然后取病毒致死鸭胚绒毛尿囊液接种DEF的方法可以使DEV-CHv开始适应在DEF上生长;而病死鸭肝脏组织中的DEV-CHv直接接种在DEF上不能生长。刚刚适应了在DEF上生长的DEV-CHv以细胞变圆,细胞折光度增强,细胞间隙有颗粒状缺失出现为主要病变特征;DEV-CHv经过连续传代6次适应了在DEF上生长以后,细胞病变以成纤维细胞的脱落和形成圆形蚀斑为主要病变特征。DEV-CHv接种DEF后通常30h左右出现细胞脱落,36h左右  (本文共150页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医学报》2005年06期
中国兽医学报

鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株感染鸭胚成纤维细胞的超微结构观察

鸭病毒性肠炎(duck v irus en teritis,DVE)俗称鸭瘟(duck p lague,DP),是由疱疹病毒科中的鸭病毒性肠炎病毒(duck en teritis v irus,DEV)[俗称鸭瘟病毒(duck p laguev irus,DPV)]引起的常见于鸭、鹅、天鹅等水禽的一种高度致死性传染病[1]。该病目前在世界各养鸭地区广泛分布,其预防和控制对于水禽养殖业的发展具有重要意义。自发现本病以来,人们对其已开展了包括病原特性、流行病学、诊断和免疫防治等方面研究,但涉及病原特性方面的研究工作不多。所以为了能够深入了解DEV在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的形态结构特性,以便为相关方面的研究工作提供依据,作者通过超薄切片和透射电子显微镜观察法对DEV CH强毒株在DEF中的形态结构进行了观察。1材料与方法1.1 DEF用10日龄四川麻鸭胚制备,将胚体去头、腿、翅、内脏后剪成1 mm3的小块,经细胞分散剂消化后用含1...  (本文共4页) 阅读全文>>

《畜牧兽医学报》2006年03期
畜牧兽医学报

鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株在鸭胚成纤维细胞中形态发生学的研究

鸭病毒性肠炎(duck virus enteritis,DVE)俗称鸭瘟(duck plague,DP),是由疱疹病毒科中的鸭病毒性肠炎病毒[(duck enteritis virus,DEV),俗称鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)]引起的常见于鸭、鹅、天鹅等雁形目禽类的一种急性、烈性和高度致死性传染病[1]。DVE目前在世界各养鸭地区广泛分布且危害严重,对此病的预防和控制对于水禽养殖业的成功发展具有十分重要的意义。自发现本病以来,世界各地的科研工作者们已经从病原特性、流行病学、诊断和免疫防治等不同方面对其进行了广泛的研究,但在病原特性方面所开展的研究工作还不多。迄今所见到的有关DEV在细胞内形态发生方面的报道[2]很少,而有关DEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)培养物中形态发生方面的研究更显缺乏。为了能够深入了解DEV在DEF中的形态发生规律,加深对本病病原的认识,以便为深入开展病原分子生物学方面的研究...  (本文共7页) 阅读全文>>

《中国兽医科学》2006年06期
中国兽医科学

鸭病毒性肠炎病毒荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用

荧光实时定量PCR是一项新检测技术,它结合 了PCR技术的核酸高效扩增、探针技术的高特异 性、光谱技术的高敏感性等优点,能够对PCR过程 实时监测,做到真正意义上的定量,目前已广泛应用 于病原检测、基因表达分析等多领域,并日益显示出 其优越性巨’一G〕。鸭病毒性肠炎又称鸭瘟,其病原为 鸭病毒性肠炎病毒(DEV),是目前严重危害养鸭业 的一种急性、烈性和高度接触性传染病[7〕。为了解 鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV一CHv)在鸭胚 成纤维细胞(DEF)培养物中的动态分布,以便为相 第6期 郭宇飞等:鸭病毒性肠炎病毒荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用 关研究提供科学参考,本试验建立了TaqMan探针 荧光实时定量PCR检测DEV的方法,并以此对 DEV一CHv在培养物中的动态分布进行了研究。 1材料 DEv一CHv为笔者所在实验室分离鉴定并保 存;iCyeler iQ型荧光实时定量PCR仪,iQ SYBR Green sup...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2009年07期
中国兽医学报

实时荧光定量PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立

鸭病毒性肠炎(Duck virus enteritis,DVE),俗称鸭瘟(Duck plague,DP),是鸭、鹅和其他雁形目禽类的一种常见的急性、热性、败血性传染病。其特征是头肿流泪,两脚发软,下痢,体温升高。该病首次在荷兰报道,之后在法国、英国、比利时、印度、意大利、德国、加拿大及美国等许多国家流行[1-2]。我国1957年在广东首次报道本病,每年由于该病的发生引起的死亡、淘汰、产蛋下降,给当地养鸭业造成很大损失。因此,能建立快速、准确的诊断方法对早期诊断和有效控制鸭瘟的流行有相当重要的作用。近年来我国先后从国外引进种鸭(蛋)约2 000万只,鸭瘟是进出境种鸭(蛋)法定检测项目,我国与其他多个国家签定的双边协定中对该病的检疫规定采用病毒中和试验,我国目前尚未正式发布检疫的诊断标准与检测方法,也没有规范的病毒中和试验操作规程。因此制定鸭、鹅、其他禽鸟类的鸭病毒性肠炎快速有效的标准化诊断方法,对进出境检疫、疫情监测和制定防疫措...  (本文共5页) 阅读全文>>

《现代农业科技》2009年14期
现代农业科技

实时定量PCR检测拟南芥和盐芥谷胱甘肽过氧化物酶表达水平

谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是1957年由MillsRandle在牛红细胞中发现的。与动物相比,植物中GPX研究起步较晚,1985年Drotar等报道在组织培养的菠菜、玉米、美国梧桐及水生藻类中检测到该酶活性[1]。植物体中谷胱甘肽过氧化物酶的结构和功能:植物GPX为非组成型表达,但可受胁迫诱导。研究表明,表达GPXmRNA稳态水平在不同环境胁迫下会有所上升,如病原体、高浓度的盐、重金属机械刺激或铅毒等[2]。因此,GPX在植物氧化信号转导过程中可能起重要作用。有报道指出,模式植物拟南芥GPX可能是潜在的解毒剂,可直接利用GSH为还原剂[3]。拟南芥谷胱甘肽过氧化物酶家族有7个成员,分别专一定位于胞液、线粒体、叶绿体、过氧化物酶体和质外体等亚细胞器中(Milla,2002)。这些酶普遍存在且在非生物胁迫下受各种信号通路调节,但目前这些酶在植物体中的功能并不完全清楚。利用模式植物拟南芥的多种突变体来研究GPX的功能,表明ATGPX...  (本文共1页) 阅读全文>>