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细胞凋亡在心脏移植中的作用及聚乙烯亚胺介导FasL基因转染对大鼠同种异体心脏移植的影响

第一部分大鼠同种异位心脏移植模型的建立目的建立一个稳定可靠、简便易行的同种异位心脏移植模型。方法取雄性Sprague-Dawley 大白鼠为受体,Wistar 大白鼠为供体,迅速摘取供心,备用,受体鼠肝素化,右颈外静脉分叉较多处剪断主干,7/0 聚丙烯线牵引近心断端,穿过自制袖套管,纵形剪开静脉壁,外翻并套住袖套管,丝线环扎固定,同法准备右颈总动脉,供心主动脉前壁作一小切口,将受体颈总动脉套管插入其内,丝线环扎,同样方法将供心肺动脉套在右颈外静脉套管外,开放血管夹。结果全部移植成功,无吻合口漏血或血液回流受阻,全组无手术死亡,30 s 内移植物复跳率100%。结论本心脏移植模型操作便利,是一种非常实用的移植模型。第二部分大鼠心脏移植中细胞凋亡的作用目的为了进一步明确心脏移植中细胞凋亡的作用,尤其是凋亡的细胞类别,检测免疫抑制剂对移植心脏中细胞凋亡的影响。方法取雄性SD 大白鼠为受体,SD 和Wistar 大白鼠为供体,分成3 组  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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诱导免疫耐受治疗心脏移植后排斥反应的实验研究

目的:通过建立大鼠颈部心脏移植模型,观察心脏移植后立即行供体淋巴细胞或淋巴细胞提取物注射对移植心脏存活的影响,以及诱导免疫耐受的证据。进而探讨一种新的更有临床应用价值的诱导免疫耐受的方法。材料和方法:Wistar大鼠60只,SD大鼠50只。受体采用健康SD大鼠,雌雄不限,体重250—350g,购自中科院上海实验动物中心。供体采用健康Wistar大鼠,雌雄不限,体重150—250g,购自山东大学实验动物中心。普通饮食喂养。实验动物分为5组:A组:供体与受体大鼠各5只。受体不做任何预处理。B组:供体与受体大鼠各15只。受体移植术当日开始用CsA10mg/kg,隔日一次,共8—10次,腹腔注射。于术后5天、10天各处死5只受体,取出供心,为B1组、B2组,剩余5只于受体死亡后取出供心,为B3组。C组:供体与受体大鼠各15只。受体手术过程中给供体淋巴细胞静脉注射5—10×10~7个,手术当日开始用CsA10mg/kg,隔日一次,共8—1...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
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B7shRNA质粒载体构建及其在小鼠心脏移植抗排斥作用研究

本课题采用体外构建的B7shRNA质粒载体修饰骨髓来源树突状细胞,通过抑制其CD80、CD86表达以阻断B7/CD28协同刺激通路,从中探讨诱导T淋巴细胞无能的机理;研究经RNAi敲减CD80、CD86后的供体来源树突状细胞在异体心脏移植中对移植物的保护作用及其抗排斥机制。第一部分 B7shRNA质粒载体构建及其阻断共刺激通路作用体外研究目的:构建针对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)表面B7分子的短发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)质粒载体,探讨其对阻断B7/CD28共刺激通路及诱导异系T淋巴细胞无能的作用。方法:体外培养小鼠骨髓源DC;分别构建针对B7-1(CD80)、B7-2(CD86)的shRNA质粒载体pCD80shRNA、pCD861shRNA、pCD862shRNA,分别转染DC,以流式细胞术初步检测对DC表面抗原CD80、CD86表达的影响;以pCD80shRNA和p...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
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FasL质粒载体构建及在小鼠心脏移植中抗排斥反应的研究

本课题构建FasL真核表达质粒载体,通过体外转染供体小鼠骨髓源树突状细胞,探讨诱导T淋巴细胞凋亡的机理。研究经FasL转染的供体来源的树突状细胞在小鼠心脏移植中对移植物的保护作用机制。并为进一步研究FasL基因在移植排斥中的保护作用打下基础。第一部分 FasL基因真核表达载体的构建目的 构建携带小鼠FasL基因的真核表达载体,为进一步基因转染树突状细胞(Dendritic cell,DC)做准备。方法 采用限制性内切酶NheI、NotI双酶切P43-FasL质粒,将C57小鼠FasL基因切下后,与经同样双酶切的质粒载体pTracer连接,连接产物在DH5α大肠杆菌中扩增,提取重组质粒进行酶切鉴定,并对阳性克隆的基因进行测序。结果 酶切鉴定FasL基因成功正向插入pTracer质粒载体,经测序,克隆的基因与Genbank提供的C57小鼠FasL基因序列完全相同。结论 以双酶切法成功构建pTracer质粒为骨架的小鼠FasL真核表达...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
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同种异体心脏移植免疫耐受的实验研究

心脏移植是治疗终末期心脏病的有效措施,但供心来源的短缺、心脏移植术后的排斥反应、长期应用免疫抑制剂所引起的并发症及昂贵的医疗费用都是亟待解决的问题。因此,如何有效地诱导供体特异性的免疫耐受便成为解决上述问题的关键。细胞后环磷酰胺方案(Cells-followed-by-CP system)是在啮齿类动物中广泛应用,并有潜在临床应用前景的耐受诱导方案。但此方案难于突破组织相容性抗原完全不同的供受体间的免疫屏障,诱导出免疫耐受。本课题在细胞后环磷酰胺方案的基础上,加用多次供体脾细胞输注,来诱导组织相容性抗原完全不同的大鼠间心脏移植的免疫耐受,并对这种耐受产生的机制进行探讨。Starzl提出的双向移植排斥理论和微嵌合体理论认为,嵌合体的形成对移植器官的长期存活起重要作用。但对于嵌合体和移植耐受间的关系尚存争论。本课题通过联体共生模型建立供受体间的嵌合体,探讨嵌合体与移植耐受之间的关系及联体共生诱导心脏移植免疫耐受的机制。课题研究分以下...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
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同种异位心脏移植后冠状血管病的基础研究

同种异体心脏移植是治疗终末期心脏“泵衰竭”及不可矫治先天性心脏病的唯一有效手段,免疫药物及技术的发展,使心脏移植近期疗效满意,但远期生存率不高,主要原因在于:心脏移植后冠状动脉和静脉,均可发生严重的血管内膜增生,管腔狭窄直至完全闭塞。研究移植后冠状血管内膜增殖的特点及发生机制,以及相应防治措施,改善心脏移植患者预后,对心脏移植学的发展,有着非常重大的意义。心脏移植后冠状血管病,不同于冠状动脉粥样硬化和血管成形后再狭窄,病变可累及冠状动脉和冠状静脉,表现为血管内膜的快速明显增生。不形成粥样斑块。其发生机制仍不清楚,有多种学说。可能是:免疫排斥,缺血再灌注等多种致病因素作用下,血管内皮功能下降,引发血管平滑肌细胞的增殖反应。血管平滑肌细胞改变表型结构,迁移至血管内皮下,增殖并分泌细胞外基质,致使内膜增厚。由于有限的心脏移植病例,加上冠脉标本采集困难。有关移植后冠状血管病的研究大多采用动物实验。通过移植主动脉或心脏进行研究。主动脉移植...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>